国家自然科学基金(3107009330801449)
- 作品数：5 被引量：25H指数：3
- 相关作者：洪文荣朱宝泉方志锴严凌斌严绍德更多>>
- 相关机构：福州大学常州方圆制药有限公司上海医药工业研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省教育厅科技项目福建省教育厅资助项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 依纽小单孢菌接合转移体系的构建被引量：2
- 2011年
- 以依纽小单孢菌HP变种基因组DNA为模板,扩增位于西索米星3',4'-双脱羟基酶基因sisI上下游序列的两端同源交换臂,在两臂之间添加抗性筛选标记ermE基因,并在该基因上游加入组成型强启动子ermE*,以强化筛选标记。将该外源DNA序列插入到质粒pKC1139,构建重组质粒pFD57。转化大肠杆菌ET12567后,经接合转移导入依纽小单孢菌中,经抗性筛选得到两株阳性菌株,命名为HP-I-1和HP-I-2。经PCR验证和测序,结果表明,重组质粒已整合到染色体DNA上。依纽小单孢菌接合转移体系的构建达到了预期目的,并实现了对该体系的优化。
- 张国华洪文荣沈剑锋樊伟明
- 关键词：DNA重组分子遗传学
- 绛红色小单孢菌G1008接合转移体系的构建被引量：10
- 2011年
- 目的构建绛红色小单孢菌(Micromonospora purpurea)的接合转移体系,并对该体系进行优化。方法以绛红色小单孢菌G1008染色体DNA为模板,经PCR扩增甲基化酶基因gntK的上下游序列各2000bp左右作为同源交换臂,并将红霉素抗性基因作为筛选标记插入两交换臂之间。以温敏型质粒pKC1139作为基本载体,构建重组质粒pFD306。借助接合转移技术,将该质粒导入绛红色小单孢菌G1008。结果经抗性筛选,得到一株阳性菌株,命名为GK1008,经PCR鉴定和测序,验证了重组质粒已整合到染色体上。GK1008菌株对红霉素和安普霉素的抗性均超过500μg/mL。结论绛红色小单孢菌接合转移体系的构建达到了预期目的,并实现了对该体系的优化,这为其它小单孢菌的分子遗传学操作提供了借鉴。
- 严凌斌洪文荣方志锴封成军
- 关键词：庆大霉素
- 黑暗链霉菌中安普霉素生物合成的阻断研究被引量：1
- 2012年
- 以黑暗链霉菌Tt-49基因组为模板,利用PCR方法,扩增安普霉素生物合成关键基因aprH^M的上、下游序列,作为同源交换臂,并以温敏复制型质粒pKC1139为基础,构建用于阻断黑暗链霉菌Tt-49中安普霉素生物合成的重组质粒pHM106。质粒经接合转移进入黑暗链霉菌Tt-49,并筛选得到发生同源双交换工程菌,命名为黑暗链霉菌HM106。通过PCR鉴定,证明工程菌HM106中的aprH^M被tetr替换。对工程菌HM106进行发酵产物分析,结果是其发酵效价下降明显,仅为出发菌株的40%左右。采用薄层层析(TLC)对其组分分析,其安普霉素组分消失,因此,初步判断已成功阻断安普霉素的生物合成。
- 严绍德洪文荣
- 关键词：黑暗链霉菌安普霉素生物合成
- 金色链霉菌接合转移体系的构建被引量：7
- 2011年
- 以金色链霉菌J13基因组DNA为模板,扩增金霉素C6甲基化酶基因ctcF上下游序列作为两端同源交换臂,在两臂之间添加抗性筛选标记neo基因,并在该基因上游加入组成型强启动子ermE*,以强化筛选标记.将该外源DNA序列插入到质粒pSET152,构建重组质粒pFD106.转化大肠杆菌ET12567后,经接合转移导入金色链霉菌J13中,MS平板上筛选阳性接合子.PCR检测表明,重组质粒已整合到染色体DNA上.
- 方志锴洪文荣严凌斌潘成奇朱宝泉
- 关键词：金色链霉菌
- 黑暗链霉菌DNA同源重组系统的构建被引量：11
- 2011年
- 以黑暗链霉菌Tt-49基因组为模板,利用PCR方法,扩增安普霉素生物合成关键基因aprF-G的上、下游序列,作为同源交换臂,并将红霉素抗性基因筛选标记及其启动子插入两交换臂之间,以温敏型质粒pKC1139为基础,构建用于阻断黑暗链霉菌Tt-49安普霉素生物合成的重组质粒pFD8。该质粒通过E.coli ET12567/pUZ8002去甲基化修饰后,经接合转移进入黑暗链霉菌Tt-49,利用红霉素抗性筛选得到3株阳性转化子,分别命名为Tt-49 AG1、Tt-49 AG2和Tt-49 AG3。通过PCR鉴定,证明pFD8已插入黑暗链霉菌Tt-49基因组的目标位点。以亲株作对照,对3株工程菌进行红霉素抗性能力考察,发现3株工程菌的抗红霉素能力均高达1 000μg/mL以上。
- 朱碧银洪文荣严绍德朱宝泉林玉双封成军
- 关键词：黑暗链霉菌同源重组安普霉素
