国家自然科学基金(81311130314)
- 作品数：4 被引量：17H指数：4
- 相关作者：徐宏光王弘熊寿良张晓玲俞云飞更多>>
- 相关机构：皖南医学院第一附属医院中国科学院皖南医学院弋矶山医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金卫生部卫生公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 自噬在张力诱导终板软骨细胞退变过程中的变化被引量：4
- 2014年
- 目的探讨自噬在张力诱导终板软骨细胞退变过程中的变化及作用。方法取10只清洁级SD大鼠腰椎终板软骨进行细胞培养。对P。代终板软骨细胞分别加载间歇循环张力（10％伸长率，0．5Hz）0h、3h、12h、24h、48h。以倒置相差显微镜观察细胞形态学变化，实时PCR与蛋白印迹法检测软骨标志基因Ⅱ型胶原、转录因子SOX．9及蛋白多糖转录因子、Beclin．1和LC3基因表达的变化，以单丹磺酰戊二胺染色观察自噬小体。MTT（3．2，5-二苯基四氮唑溴盐染色）法检测3．甲基腺嘌呤（自噬抑制剂）刺激前后的细胞存活率。结果间歇循环张力诱导后0h组与3h组为正常终板软骨细胞形态，呈多角形；12h组略呈不规则形；24h组和48h组呈梭形改变。实时PCR显示24h组和48h组中Ⅱ型胶原、转录因子SOX．9及蛋白多糖的表达量降低；自噬相关基因LC3和Beclin-1表达量呈时间依赖性增加。单丹磺酰戊二胺染色显示24h组和48h组自噬发生率呈时间依赖性增加。MTT结果显示细胞存活率呈降低趋势；添加3-甲基腺嘌呤刺激后细胞活性减弱、存活率降低。结论间歇循环张力刺激下终板软骨细胞表型逐渐丧失；自噬相关基因LC3与Beclin．1表达明显上调，但细胞活性降低；抑制自噬水平可降低细胞存活率，提示自噬参与了间歇循环张力诱导的终板软骨细胞退变过程。
- 俞云飞徐宏光王弘张巍熊寿良张敏涂成东宋俊兴张晓玲
- 关键词：椎间盘退行性变自噬
- Wnt／β-catenin 信号通路在终板软骨细胞体外自然退变模型中的表达被引量：8
- 2014年
- 目的：探讨Wnt/β-联蛋白（ catenin ）信号通路中关键基因在终板软骨细胞自然退变中的表达变化及意义。方法分离培养大鼠终板软骨细胞，建立终板软骨细胞体外自然传代退变模型。分为空白对照组（ P2代细胞）、自然传代组（ P5代细胞）及wnt信号通路抑制组，倒置显微镜观察细胞形态，HE染色及甲苯胺蓝染色检测终板软骨细胞表型改变。实时聚合酶链反应检测各组细胞中Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX-9基因及β-catenin的表达变化；免疫印迹检测β-catenin蛋白表达变化。激光共聚焦显微镜检测β-catenin在细胞内的表达与定位。结果随着自然传代的进行终板软骨细胞表型逐渐丢失；P5代终板软骨细胞较P2代细胞Ⅱ型胶原（P5/P2＝0.11，P＝0.0039）、蛋白多糖（P5/P2＝0.32，P＝0.0046）及SOX-9（P5/P2＝0.58，P＝0.0168）表达明显降低，而Wnt/β-catenin信号通路中关键基因β-catenin（P5/P2＝1.62，P＝0.0082）表达明显增高；抑制wnt 信号通路后β-catenin （XAV-939/P5＝0.23，P＝0.0017）表达降低，Ⅱ型胶原（XAV-939/P5＝2.60，P＝0.0180）、蛋白多糖（XAV-939/P5＝2.56，P＝0.0041）及SOX-9（XAV-939/P5＝1.47，P＝0.0382）表达增高。激光共聚焦显微镜观察可见P5代终板软骨细胞较P2代中β-catenin表达增高且明显入核，抑制wnt信号通路后β-catenin表达明显减少。结论β-catenin基因在终板板软骨细胞体外退变过程中具有重要的作用，调控Wnt/β-catenin信号通路有可能保护终板软骨的退变。
- 郑权徐宏光张晓玲王弘汪景王传东宋俊兴熊寿良赵泉来
- 关键词：椎间盘软骨细胞信号传递细胞衰老
- 自噬在不同年龄大鼠终板软骨中的变化被引量：6
- 2013年
- 目的 观察不同月龄SD大鼠终板软骨中自噬的变化及其意义.方法 取3、6、12月龄SD大鼠的原代终板软骨细胞,分为自然培养组和雷帕霉素组.茜素红染色观察细胞形态,实时聚合酶链反应和免疫印迹检测软骨标志基因Ⅱ型胶原、SOX-9、蛋白多糖转录因子和基质分解酶相关基因MMP-13以及自噬相关基因Beclin-1和LC3基因的表达,单丹磺酰戊二胺（MDC）染色观察细胞的自噬率,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞存活率.结果 茜素红染色显示细胞呈梭形改变,蛋白多糖转录因子、Sox-9和Ⅱ型胶原基因表达呈年龄依赖性降低趋势（P〈0.05）,提示随年龄增长,终板软骨细胞出现退变;自噬相关基因Beclin-1和LC3在各组终板软骨细胞中均有表达,且呈年龄依赖性降低趋势[（1.0±0.1）比（0.6±0.1）,（1.0±0.1）比（0.3±0.2）;（1.0±0.2）比（0.4±0.1）,（1.0±0.2）比（0.1±0.1）]（P〈0.05）,自噬发生率也呈现明显降低（P〈0.05）.自然培养组中,细胞存活率呈逐渐降低趋势（P〈0.05）;与自然培养组相比,雷帕霉素组中各组细胞存活率明显增加（P〈0.05）.结论 自然增龄大鼠中,终板软骨细胞逐渐出现退变,且存活率降低;上调其自噬水平,可提高细胞存活率,提示呈年龄依赖性降低的自噬活性,可能与椎间盘的自然退变有关.
- 俞云飞徐宏光王弘张巍熊寿良张敏
- 关键词：椎间盘软骨细胞物理刺激
- 调控转录因子NF-κB信号通路对体外自然退变终板软骨细胞的影响被引量：4
- 2016年
- 目的探讨终板软骨细胞体外自然退变模型中转录因子（NF）-κB信号通路表达变化及意义。方法分离获取大鼠终板软骨细胞，体外培养建立终板软骨细胞自然退变模型。根据细胞传代次数分P2代细胞（空白对照组），P5代细胞（体外自然退变组）及NF—κB信号通路抑制组（细胞传代中加入Bay11-7082的P5代细胞）。观察细胞形态学变化，甲苯胺蓝染色鉴定细胞表型，阿新蓝染色观察细胞外基质变化。实时聚合酶链反应检测各组细胞中SOX-9基因，Ⅱ型胶原，蛋白聚糖，人基质金属蛋白酶（MMP）13的表达情况，核质分离及免疫印迹检测胞核与胞质中NF—κB信号通路相关蛋白P65、p-P65、IκBα、P-IκBα表达变化。结果随着体外传代的进行终板软骨细胞表型逐渐丢失，阿新蓝染色可见细胞外基质减少，P5代细胞（体外自然退变组）较P2代细胞（空白对照组）SOX-9（P5／P2=0．488，P〈0．01）、蛋白聚糖（P5／P2=0．287，P〈0．01）、Ⅱ型胶原（P5／P2=0．182，P〈0．01）表达明显降低，NF—KB信号通路相关基因P65人核增加，胞质中p-IκBα增高，NF—κB信号通路相关基因MMP13（P5／P2=1．324，P〈0．05）表达明显上升，NF—KB信号通路抑制组较P5代细胞（体外自然传代组）核内p-P65减少，胞内p-IκBα降低，NF—κB信号通路相关基因MMP13（Bay11-7082／P5=0．611，P〈0．05）表达降低，信号通路抑制组中Ⅱ型胶原（Bay11-7082／P5=4．173，P〈0．01）、蛋白多糖（Bay11-7082／P5=2．732，P〈0．05）、SOX-9（Bay11-7082／P5=1．567，P〈0．05）等基因表达明显回升。结论NF—κB信号通路在终板软骨细胞体外退变中发挥重要的调节作用，调控NF—κB信号通路可能会改善椎间盘退变。
- 高智徐宏光张晓玲王弘马明明肖良刘祥
- 关键词：NF-ΚB信号通路基质金属蛋白酶13
