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可穿越血脑屏障的新型神经生长因子TAT—BDNF神经保护作用研究被引量：7: 2011年; 目的研究合成的新型神经生长因子TAT—BDNF融合蛋白兼具穿越血脑屏障及神经保护双重活性，为使用功能蛋白质治疗中枢神经损伤提供研究基础。方法采用分子克隆方法构建表达载体pTAT—HA—BDNF，原核表达获得TAT—BDNF融合蛋白。利用体外培养的大鼠大脑皮层神经元谷氨酸兴奋性损伤模型，通过检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）漏出量，免疫荧光染色观察TAT—BDNF的神经保护作用。尾静脉注射TAT—BDNF后，通过免疫组化检澳0其穿透血脑屏障的活性；Nissl染色验证TAT-BDNF急性脊髓压迫损伤神经保护作用。结果TAT．BDNF融合蛋白由重组质粒能有效表达。在神经元谷氨酸损伤模型中，使用TAT—BDNF后各组间培养液中LDH的漏出量差异有统计学意义（F=24．27，P〈0．05）。形态学观察显示，TAT—BDNF可改善神经元的存活状态，减少谷氨酸诱导的细胞凋亡坏死比例（t=4．59，P=0．001）。大鼠体内实验显示TAT—BDNF能有效透过血脑屏障，分布于脑与脊髓组织。脊髓损伤7d后Nissl染色显示TAT—BDNF注射组髓内神经元存活状态优于对照组。结论合成的新型神经生长因子TAT—BDNF具有穿透血脑屏障活性及神经保护作用。; 蒋晖金卫林金大地陈建庭; 关键词：蛋白质转运脑源性神经营养因子血脑屏障

转录反式激活因子-源性神经营养因子融合蛋白对大鼠急性脊髓损伤的神经保护作用研究: 2011年; 目的探讨合成的转录反式激活因子－脑源性神经营养因子（TAT-BDNF）融合蛋白对急性脊髓损伤的神经保护作用。方法采用分子克隆方法构建表达载体pTAT—HA—BDNF，原核表达获得TAT—BDNF融合蛋白。尾静脉注射TAT—BDNF4Ii后，通过免疫荧光组织化学染色和WesternBlot分析融合蛋白转导至大鼠中枢神经系统内的分布情况。制作大鼠急性压迫性脊髓损伤模型，分为两组：对照组注射生理盐水，实验组注射TAT-BDNF，于损伤后第3天用TUNEL染色观察分析细胞凋亡，通过伤后7dBBB后肢运动功能评分评价TAT—BDNF是否具有减轻脊髓神经功能丧失的作用。结果免疫荧光组织化学染色和WesternBlot分析均证实TAT．BDNF能够穿过血脑屏障分布至中枢神经系统各层组织细胞中。在脊髓急性压迫性损伤模型中，与对照组比较，实验组能减少神经细胞凋亡（P〈0．05）。实验组大鼠伤后3、5、7d的BBB后肢运动功能评分分别为（0．96±0．21）、（3．45±0．81）、（8．06±1．44）分，而对照组分别为（0．58±0．20）、（1．92±0．83）、（3．50±1．64）分，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论TAT—BDNF融合蛋白经静脉给药能通过血脑屏障并减轻脊髓继发性损伤，改善神经功能。; 蒋晖江建明吴晓亮金卫林; 关键词：脊髓损伤血脑屏障蛋白转导

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广东省自然科学基金(9451051501003987)

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