浙江省自然科学基金(Y3080183)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 相关作者：张耀洲王丹曹海燕沈红丹刘立丽更多>>
- 相关机构：浙江理工大学中国科学院上海生命科学研究院休斯敦大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 家蚕30kDa载脂蛋白19G1前体的生物信息学分析及克隆表达
- 2009年
- 从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中发现了一条编码低分子量30 kDa载脂蛋白19G1前体(lowmolecular mass 30 kDa lipoprotein 19G1 precursor)的EST序列(GeneBank登录号:AY568957),在NCBI数据库中比对后得知该基因的ORF长为771 bp,与基因组比对后发现该基因的ORF不含内含子,由单一外显子编码256个氨基酸残基的蛋白质,该蛋白属于家蚕30K蛋白家族,预测分子量约为29.5 kDa,等点电为7.29;信号肽分析显示该蛋白很可能存在信号肽。根据该基因ORF进行引物设计,以家蚕基因组为模板,PCR扩增获得该基因,将其克隆到pET-28a(+)载体中并导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,裂解菌作SDS-PAGE分析,结果表明该蛋白前体成功表达,为研究其功能打下了基础。
- 陈晓平于威张耀洲
- 关键词：家蚕克隆生物信息学分析
- SHP-2蛋白NSH2结构域的原核表达和同位素标记
- 2010年
- SHP-2蛋白是一种含有两个SH2结构域的磷酸酶。SHP-2的N端SH2结构域是细胞因子或病毒因子激活该蛋白的分子内靶点。对shp2基因进行信息学分析,设计引物通过PCR克隆出人SHP-2蛋白N端SH2结构域(NSH2)的DNA序列。重组到原核表达载体pGEX-2T中,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功高效率表达了可溶性NSH2蛋白。对蛋白进行15N同位素标记和纯化,并浓缩获得达到进行核磁滴定法结构研究的蛋白样品。
- 牛皋郭江峰高晓莲张耀洲
- 关键词：SHP-2SH2结构域同位素标记HSQC
- 家蚕BmAWD基因的表达和蛋白纯化
- 2009年
- 家蚕BmAWD与家蚕翅膀发育密切相关,控制其翅膀发育的完整性及可用性。在对本实验室构建的家蚕蛹期cDNA文库测序中,我们筛选到一条编码AWD蛋白的cDNA序列,将其命名为BmAWD基因。通过生物信息学分析,发现该基因序列全长为689bp,ORF框为465bp,编码154个氨基酸残基,含有一个NDPK保守结构域。通过PCR扩增获得该基因ORF框并克隆到表达载体pGEX-5X-1上,得到重组表达质粒pGEX-5X-1-AWD,将该重组子转化大肠杆菌BL21,经PCR、酶切鉴定证明重组正确,在37℃下以IPTG诱导表达后收集菌体并裂解,SDS-PAGE分析发现在43kD左右处有一特异性蛋白条带,与预期值相符,但目的蛋白主要以沉淀即包涵体形式存在,25℃下诱导表达,SDS-PAGE分析表明目的蛋白主要存在于上清中。采用亲和层析法纯化融合蛋白GST-AWD,目的蛋白通过与层析柱上的GST磁珠结合而被纯化分离。
- 赵贤能童富淡蒋彩英张耀洲
- 关键词：家蚕核苷二磷酸激酶基因克隆蛋白纯化
- 家蚕Bm595的表达、组织分布及亚细胞定位被引量：1
- 2010年
- 【目的】从家蚕蛹期cDNA文库中获得一条新基因Bm595,分析Bm595在家蚕体内的表达和定位情况。【方法】利用生物信息学分析Bm595序列,并构建重组表达质粒在大肠杆菌中诱导表达,以纯化的融合蛋白抗原,制备多克隆抗体。用荧光定量PCR和Western blot方法分析Bm595基因在家蚕各组织中的分布。用免疫细胞化学的方法研究Bm595蛋白的定位情况。【结果】Bm595在五龄幼虫的转录水平最高,卵中最低。Bm595在家蚕五龄幼虫各组织中的转录水平由高到低依次为:睾丸、丝腺、肠、头、卵巢、脂肪体、表皮、气管。在表达水平方面,睾丸的表达量最高,其次是丝腺和头,脂肪体有较明显的表达。以家蚕Bm5细胞进行免疫细胞化学试验,Bm595主要分布于细胞核内。【结论】在mRNA、蛋白质表达和细胞水平对Bm595进行初步表达分析和定位分析,为进一步研究该蛋白在家蚕中的功能提供重要依据。
- 王帅玉盛清吕正兵陈健聂作明王丹刘立丽沈红丹舒建洪陈剑清吴祥甫张耀洲
- 关键词：亚细胞定位
- 家蚕BmLITAF基因的克隆表达及生物信息学分析被引量：2
- 2010年
- 在对家蚕蛹cDNA文库进行分析时，发现一条与脂多糖诱导肿瘤坏死因子a的转录激活因子LITAF的保守结构域同源的保守序列。基因序列全长为981bp，由97bp的5’端非翻译区序列（5’UTR）、390bp的开放读码框（ORF）和494bp的3’端非翻译区序列（3’UTR）组成。利用生物信息学方法对BmLITAF进行基因结构分析发现，此基因由3个外显子和2个内含子组成，编码129个氨基酸残基；其预测理论分子量为13．9kDa，预测等电点6．47；在90～100位氨基酸残基区域具有较高的疏水性，具有跨膜结构域；定位细胞内的可能性较大。根据BmLITAF的cDNA序列进行PCR扩增获得目的基因，将其克隆到质粒pGEX-4T-3中，测序验证克隆正确。经IPTG诱导，结果发现目的蛋白主要以包涵体的形式存在。
- 曹海燕王丹张耀洲
- 关键词：家蚕生物信息学分析
