国家科技重大专项(2008ZX10002-002)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 相关作者：王维刘春红瞿涤王静马世平更多>>
- 相关机构：复旦大学上海医学院北京天坛生物制品股份有限公司北京生物制品研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项上海市科委国际合作基金上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 免疫复合物型治疗性乙型肝炎疫苗有效成份佐剂吸附率检测初探
- 2010年
- 目的:探索免疫复合物型治疗性乙型肝炎疫苗"乙克"的主要有效成份HBsAg/抗-HBs复合物(IC)及游离HBsAg的佐剂吸附率检测方法。方法:氢氧化铝佐剂经不同转速离心后,用ICP-AES法检测上清中铝残留量。未吸附IC经不同转速离心后,用电化学发光法检测在各离心转速下上清中HBsAg和抗-HBs含量。用电化学发光法检测未吸附IC与同一批次的佐剂吸附IC的HBsAg含量,计算HBsAg回收率;检测佐剂吸附IC样品离心上清及未离心样品的HBsAg含量,计算吸附百分率及检测的精密度。用凯氏定氮法测定佐剂吸附免疫复合物离心上清与离心前样品蛋白含量。结果:氢氧化铝佐剂经6500r/min离心3min,上清中铝的残留量为0;未吸附IC经2000～9000r/min离心3min,所测上清中HBsAg与抗-HBs均未明显下降。佐剂吸附IC经解离后,HBsAg回收率为91.56%,表明经过解离后铝佐剂不会影响HBsAg含量的检测结果。佐剂吸附IC样品与离心上清比较,蛋白含量减少了3.2mg/mL,表明每毫克铝可吸附约2.54mg蛋白,对总蛋白的吸附率为13.5%。佐剂吸附IC及HBsAg的吸附百分率的重复性检测结果为99.87%±0.15%,CV为0.15%。结论:佐剂吸附的IC在6500r/min离心3min的条件下,上清中未被吸附的HBsAg和抗-HBs不会下沉,而氢氧化铝佐剂连同被吸附IC及HBsAg则被沉淀,且铝佐剂不会对HBsAg的测定造成干扰,故通过检测离心样品上清及未离心样品中的HBsAg含量,可有效测定铝吸附百分率,且精密度较好。
- 朱亭玉徐静何亚丽王明莹齐璇周根喜李津
- 关键词：治疗性乙型肝炎疫苗免疫复合物氢氧化铝
- 汉逊酵母表达乙肝表面抗原的结构研究
- 2009年
- 目的解析汉逊酵母表达重组乙肝表面抗原(HBsAg)的空间结构,给出其颗粒大小、结构对称性方面的信息。方法整合adr亚型HBsAg的基因到汉逊酵母染色体上,建立重组汉逊酵母菌。经过发酵扩菌、诱导表达、精制纯化等步骤得到纯化的HBsAg。滴加5μl浓度为80μg/mlHBsAg溶液到亲水处理的纯碳膜铜网上,用2%醋酸铀染色,放置24h后,通过透射电镜得到汉逊酵母表达HBsAg颗粒的二维电镜图像。运用EMAN软件包完成图像选择、颗粒框取、颗粒全同性处理、初始模型构建和结构精修等HBsAg重构步骤,获得HBsAg颗粒的三维结构。结果汉逊酵母表达HBsAg颗粒大小服从高斯分布(P=0.45),均值为(28.4±2.6)nm;汉逊酵母表达HBsAg是一中空的"鱼笼"状结构,蛋白亚基分布在球状结构的表面;蛋白的表面分布大小为1～2nm的孔状结构和围绕孔状结构的突起;不具备八面体对称性。结论汉逊酵母表达的HBsAg与血源性的HBsAg在大小和结构对称性方面都有显著差异。
- 刘闯朱亭玉李津王钊马锐王曦尹长城
- 关键词：毕赤酵母负染色
- 穿心莲内酯对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞的免疫调节作用被引量：4
- 2010年
- 目的 探讨穿心莲内酯对体外培养慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血单个核细胞（PBMC）表达Th1细胞因子IFN-γ mRNA及Th2细胞因子IL-4 mRNA和IL-10 mRNA的影响及其抗HBV的活性.方法 分别应用穿心莲内酯10mg/L（实验组）及0.1%二甲基亚砜（对照组）加入细胞培养液中刺激CHB患者PBMC.不同浓度穿心莲内酯（实验组）及阿德福韦（对照组）刺激HepG2.2.15细胞系,实时荧光定量PCR检测处理后PBMC的IFN-γ tuRNA、IL-4 mRNA及IL-10mRNA表达水平及HepG2.2.15细胞系HBV DNA复制水平.结果 穿心莲内酯10 mg/L处理16 h后,实验组PBMC的IFN-γ mRNA表达水平高于对照组（Z=-2.78,P=0.05）,IL-4 mRNA及IL-10 mRNA的表达水平明显低于对照组（Z=-3.82,P〈0.01）,IFN一γ/IL-4 mRNA的比例较对照组明显提高（Z=-3.82,P〈0.01）,不同浓度穿心莲内酯对HepG2.2.15细胞系HBV DNA复制无明显影响（t=11.88,P〉0.05）,而阿德福韦对HBV DNA有抑制作用（t=15.95,P〈0.05）.结论 穿心莲内酯对CHB患者PBMC内IFN一γ mRNA、IL-4 mRNA及IL-10 mRNA的表达水平有调节作用,改善Th1/Th2平衡,对HBV DNA无直接抑制作用.
- 杨飞飞王维李新艳刘春红瞿涤张继明黄玉仙
- 关键词：穿心莲内酯TH1细胞TH2细胞白细胞介素4白细胞介素10
- 穿心莲内酯对人PBMC/PBM表达IL-18相关细胞因子的影响被引量：7
- 2010年
- 目的:研究穿心莲内酯对外周血单核细胞表达IL-18相关细胞因子的影响。方法:不同浓度穿心莲内酯处理LPS刺激的PBMC(Peripheral Blood Mononuclear Cells,外周血单个核细胞)和LPS+IFNγ-/IL-4激活的磁珠分选PBM(PeripheralBlood Monocytes,外周血单核细胞),利用real-time RT-PCR法检测IL-18、IL-18BP、IL-18Rα、IL-18Rβ基因转录水平,ELISA法检测PBM上清中的IL-18、IL-18BP和IL-1β、IL-1Rα。结果:穿心莲内酯呈剂量和时间依赖地调节PBMC IL-18和IL-18BP的表达。穿心莲内酯处理使LPS刺激的PBMC IL-18BP转录增加,IL-18BP/IL-18比值升高;使LPS+IFNγ-激活的PBM表达IL-18BP/IL-18比值从9.60倍升高至214倍;IL-4激活的PBM表达IL-1Rα/IL-1β比值从9 200降低至6 520。结论:穿心莲内酯可调节激活的外周血单核细胞IL-18相关基因转录和表达,抑制炎症时IL-18的高表达。
- 王维刘春红王静ITALIANI Paola王迅BORASCHI Diana马世平瞿涤
- 关键词：穿心莲内酯IL-18IL-18BP单核细胞
