广西壮族自治区自然科学基金(2012GXNSFAA053062)
- 作品数：7 被引量：29H指数：5
- 相关作者：陈东黄日波张穗生芦志龙吴仁智更多>>
- 相关机构：广西科学院广西大学更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目广西科学院基本科研业务费资助项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 瑞氏木霉碳源阻遏相关基因Cre1的分子改造被引量：5
- 2014年
- 为了提高瑞氏木霉（Trichoderma reesei）纤维素酶的活力,用类似基因改组的方法改造其碳源阻遏相关基因cre1。以瑞氏木霉基因组DNA为模板PCR扩增cre1基因,用DNaseⅠ消化cre1基因后,回收50-100 bp的DNA片段,用T4 DNA连接酶连接,以连接产物作为模板进行无引物PCR,并将PCR产物转入瑞氏木霉原生质体,通过测定滤纸酶活的方法筛选突变菌株,并在NCBI上比对分析突变菌株的cre1基因。结果表明,筛选获得1株纤维素滤纸酶活比出发菌株提高0.7倍的突变菌株cre2-3。cre2-3菌株在液体培养基中呈棉花状,而出发菌株呈小颗粒状,菌株cre2-3发酵液的颜色比出发菌株的更黄亮。推测cre1基因与瑞氏木霉菌株的生长代谢有关。
- 陈小玲陈东张穗生陈英
- 关键词：DNA改组瑞氏木霉
- 一个酿酒酵母呼吸突变株在高糖胁迫下的生理特性研究被引量：3
- 2013年
- MF11a为甘蔗糖蜜乙醇发酵野生型高产菌株MF1002的呼吸突变体,对糖分的利用能力显著高于MF1002。本文研究了这两菌株应激高糖胁迫的生理特性变化。结果表明,高糖培养条件下,MF11a菌株的生长和乙醇发酵受抑制的程度均明显低于MF1002,培养基的葡萄糖浓度为30%和40%时,其最大菌体密度、最高出芽率和乙醇浓度等已显著高于MF1002,表明MF11a较MF1002具有更强的高糖耐受能力。在30%葡萄糖的胁迫培养条件下,两菌株胞内的总超氧化物歧化酶(SOD)活力、过氧化氢酶活力、过氧化物酶活力,及它们细胞质和线粒体的ATP酶活力均显著上升,说明这五种酶均参与了两菌株的高糖胁迫反应。其中,MF11a的胞内过氧化氢酶活性、过氧化物酶活力、细胞质ATP酶活力在高糖胁迫下的上升幅度显著高于MF1002,表明这三种酶活力可能与MF11a菌株的高糖耐受能力有关,可作为该菌株进一步改造的指导指标。
- 张穗生陈东熊雅兰陆琦黄日波
- 关键词：酿酒酵母生理特性
- 酿酒酵母α-半乳糖苷酶基因重组菌株的表达分析被引量：3
- 2013年
- PCR扩增里氏木霉(Trichoderma reesei)2个α-半乳糖苷酶基因agl2和agl3,将其分别与表达载体pY-ES2连接,电转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)INVSc1菌株。从重组菌株提取载体进行单酶切凝胶电泳检测,证实agl2和agl3分别在重组菌株AGL2和AGL3表达。以葡萄糖和棉子糖为碳源培养菌株,2株重组菌的生长速率均显著高于原始菌株,提前8h菌数达到最大,其中以AGL3的生长速率提高较为明显,重组还使菌株在液体培养基由原来的部分絮凝转变为完全游离状。2株重组菌株均不能利用蜜二糖为碳源生长。
- 陈英陈东陆琦芦志龙黄日波
- 关键词：细胞生长细胞形态
- 黑曲霉木聚糖酶基因xynB的克隆及在酿酒酵母中的表达被引量：5
- 2013年
- 从黑曲霉(Aspergillus niger)克隆木聚糖酶基因xynB,利用重叠延伸PCR法去除其中的内含子。将该基因与质粒pYES2连接,构建真核表达载体,用醋酸锂化转法导入酿酒酵母(Sacharomyces cerevisiae)INVSC1菌株表达。利用α信号肽替换基因原信号肽,以考察信号肽对表达蛋白分泌的影响。结果获得2株重组菌株,分别为xynB连接原信号肽的pYES2-xynB菌株和xynB连接α信号肽的pYES2-xynB-α菌株。木聚糖酶B成功表达,SDS-PAGE检测到约24kDa目的蛋白质条带。木聚糖酶B最适催化温度为50℃,最适催化pH值为5.0,Mn2+对酶活具有强烈的抑制作用。将α信号肽取代原信号肽使酶活达到最高的诱导时间由72h缩短为48h,但是置换信号肽使最高酶活由7.59U降低为3.97U。
- 张水龙陈东曹树威吴仁智黄日波
- 关键词：木聚糖酶黑曲霉酿酒酵母
- 产纤维素酶新菌株的筛选及其产酶特性研究被引量：8
- 2014年
- 【目的】筛选分离新的纤维素酶产酶菌株，并对其生长特性和产酶特性进行研究。【方法】从堆肥样品中分离得到一株产纤维素酶菌株，定名为CP1，利用16SrRNA序列对比和Biolog微生物鉴定系统进行鉴定。通过测定菌株生长速率确定其最适生长条件。采用CMC发酵培养基进行纤维素酶的研究，确定其产酶曲线。测定粗酶液最适作用温度和pH值，热稳定性和金属离子对其影响。【结果】经鉴定该菌株为梭形芽孢杆菌（LysinibacillusfusiJbrmis），其最适生长温度为30℃，最适生长pH值为6。在含CMC—Na的培养基培养，该菌株的生长与产酶同步进行，培养48h菌株生长量达到最大，培养液的CMC酶活力同时达到最大值，为0．46U／mL。该菌株所产的纤维素酶既有酸性CMC酶活力，又有碱性CMC酶活力，并以碱性CMC酶为主，酸性CMC酶的活力只有碱性CMC酶的71．4％。其酸性CMC酶的最适作用pH值为6．0，碱性CMC酶的最适作用pH值为8．0。另外，该菌株所产碱性CMC酶活的最适作用温度为40～50℃，而且0．5%的Cu^2＋使其酶活降低45％。【结论】菌株CP1为首次报道的梭形芽孢杆菌产纤维素酶新菌株，具有独特的酸碱性环境下的纤维素酶活力。
- 芦志龙张穗生吴仁智陈东黄日波
- 关键词：纤维素酶新菌株
- 碱性纤维素酶产生菌株的筛选及其酶学性质研究被引量：5
- 2014年
- 【目的】从堆肥中筛选和鉴定产碱性纤维素酶的菌株，对菌株及其酶学特性进行研究。【方法】以刚果红平板染色法进行初筛，摇瓶发酵复筛，分离到高酶活菌株C73。通过形态观察和16SrRNA序列分析对菌株进行鉴定。采用DNS定糖法测定发酵液酶活最适pH值、pH值稳定性、最适温度、热稳定性及常见金属离子、SDS、EDTA等对酶活的影响。[结果]该菌株形态呈杆状，革兰氏阳性，不产芽孢，适宜在pH值8．0～11．0、30～37℃条件下生长。16SrRNA序列比对发现，该菌株与琼斯氏菌（Jonesiasp．）PCI序列相似度大于99％，初步鉴定为琼斯氏菌属菌株。在发酵培养基中，菌体浓度和CMCase活力分别在40h和50h达到最大值，随着发酵时间的延长发酵液pH值稳定在9．5左右。粗酶液的最适作用pH值为10．0，此时CMCase活力达2．3U／mL。在pH值8．0～11．0的范围内保持60％以上的酶活；最适作用温度为60℃，且在30-80℃的范围内保持60％以上的酶活。金属离子Mn^2＋、Co^2＋和（NH4）2SO4对酶活力有较强的抑制作用。【结论】菌株C73呈现较高的碱性CMCase酶活、较高的热稳定性和pH值稳定性，具有良好的工业应用前景。
- 陈雅娟董园芦志龙陈东黄日波
- 关键词：纤维素酶酶学性质
- 发酵木糖高产乙醇树干毕赤酵母菌株的Co^(60)诱变选育被引量：5
- 2014年
- 【目的】选育能够利用木糖高产乙醇的酵母菌株。【方法】采用Co60诱变树干毕赤酵母(Pichia stipitis),筛选乙醇产量高的突变菌株,并对原始菌株、突变菌株的生长发酵特性和两个菌株对高浓度木糖、乙醇的耐受性进行比较。【结果】在YPX培养基上筛选获得1株能够高效发酵木糖的突变菌株1K-9。该菌株在50mL 15%FM发酵84h,发酵液乙醇含量最高达(51.034±0.112)g/L,比原始菌株提高10.05%;在500mL 15%FM发酵96h,乙醇含量最高达(51.390±0.119)g/L;在500mL 20%FM发酵156h,乙醇含量最高达(52.496±0.513)g/L。菌株1K-9在HSM培养基或含4%~5%乙醇的YPX培养基中生长良好,在含6%~7%乙醇的YPX培养基中生长缓慢。【结论】Co60诱变对于树干毕赤酵母(Pichia stipitis)菌株是有效的,能选育出木糖高产乙醇酵母菌株1K-9。
- 吴仁智陈东芦志龙陆琦张穗生黄日波
- 关键词：诱变树干毕赤酵母乙醇木糖选育
