分别以重组人肿瘤坏死因子-α(TNFα-)和NHS-PEG-MAL的摩尔比为1∶5、1∶20、1∶40、1∶60,于不同时间下进行PEG化反应。反应混合物经SDS聚-丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定和Im age M aster图象分析系统定量凝胶中游离蛋白质,评价蛋白质PEG化程度;采用灌注色谱技术,通过阳离子交换柱分离纯化反应混合物。结果显示:SDS-PAGE法可使游离TNFα-与PEG-TNFα-达到完全分离;TNFα-的PEG化程度随PEG量和反应时间的增加而提高。反应混合物被阳离子交换柱分离成PEG、PEG-TNFα-混合物和游离TNFα-。
