山西省自然科学基金(20051102)
- 作品数：9 被引量：22H指数：3
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- 染料木黄酮对人白血病K562细胞凋亡及增殖的影响被引量：2
- 2008年
- 目的:观察染料木黄酮(GEN)对人白血病细胞增殖及凋亡的影响,探讨其抗白血病的可能性。方法:不同浓度(10、20、30、40、50 mg/L),不同时间(6、12、24、48、72 h)染料木黄酮作用后,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测K562细胞(慢性髓细胞性白血病细胞株)及人外周血单个核细胞增殖;DNA断裂梯带电泳、Annexin-V/PI双染色流式细胞仪分析检测GEN诱导K562细胞凋亡的作用。结果:GEN可有效地抑制肿瘤细胞增殖,而对正常细胞毒性较小(PBM-CIC50=35.5 mg/L和K562 IC50=13.2 mg/L),抑制作用呈明显的时间、剂量—效应关系(P<0.05);GEN体外能够诱导K562细胞凋亡,诱导作用呈时间、剂量依赖关系(P<0.05);结论:GEN具有抗白血病细胞的作用。
- 杨涛王宏伟朱镭张丽
- 关键词：染料木黄酮白血病增殖凋亡
- 正常人骨髓不同细胞群中WT1基因表达及其异构体比例研究被引量：7
- 2007年
- 本研究探讨WT1基因在正常人骨髓不同分化阶段造血细胞中的表达程度及异构体间比例关系。采用实时荧光定量RT-PCR方法检测18例正常人骨髓标本中CD34+CD38-、CD34+CD38+、CD15+CD11b+、CD33+CD14+、CD20+CD5-和CD20-CD5+细胞群中总WT1、WT1(+17AA)及WT1(+KTS)的表达。结果表明:与K562细胞相比,CD34+CD38-、CD34+CD38+、CD15+CD11b+和CD33+CD14+细胞群中均存在WT1基因的低表达,且依次逐渐降低;在CD20+CD5-和CD20-CD5+细胞群中未检测到WT1基因表达。在分化程度较低的CD34+CD38-和CD34+CD38+细胞群中以+17AA,+KTS及WT1(+/+)异构体为主,而较成熟的CD15+CD11b+和CD33+CD14+细胞群中以-17AA、-KTS及WT1(-/-)异构体为主。结论:在正常人骨髓细胞中WT1基因的表达随着细胞分化程度提高而降低,造血细胞可能通过其4种异构体比例的调整而发挥抑制或促进分化的作用。
- 徐菁王宏伟李晓红朱镭张丽张帆覃艳红杨涛
- 关键词：骨髓WT1基因基因表达
- 维甲酸诱导HL-60细胞分化过程中WT1基因表达及其异构体比例变化的研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨全反式维甲酸（ATRA）诱导HL_60细胞分化过程中WT1基因及其异构体表达水平及比例变化。方法采用ATRA诱导HL-60细胞分化，以硝基四氮唑蓝（NBT）还原实验及细胞免疫标记CD11b检测判断细胞分化程度；即时荧光定量RT—PCR方法检测HL-60细胞在诱导分化过程中总WT1、WT1（17AA＋）及WTI（KTS＋）的表达，并计算出WT1（＋／＋）、WT1（＋／-）、WT1（一／＋）、WT1（-／-）四种异构体的比例。结果ATRA诱导HI。60细胞分化过程中NBT阳性率及CD11b表达阳性率与诱导分化前（0h）相比均显著增加（P〈0．05，P〈0．001）。随着细胞分化，WT1表达水平由0h的（4．17±2．21）×10^-3降低至96h的（7．53±2．30）×10^-4；17AA＋和KTS＋两类异构体的比例也逐渐下降，17AA＋异构体比例由0h的0．60±0．05降到96h的0．42±0．08（P〈0．05）。KTS＋异构体比例由0．53±0．08降至96h的0．41±0．04（P〈0．05）；四种异构体的比例变化表现不一致，WT1（＋／＋）比例由0h的0．32±0．06降至96h的0．17±0．03，而WT1（-／-）比例由0h的0．19±0．04升至96h的0．34±0．05，另外两类异构体比例变化差异无统计学意义。结论ATRA诱导HL60细胞分化过程中总WT1表达水平逐渐降低，分化前异构体以WT1（＋／＋）为主，而分化后以WT1（-／-）为主，提示WT1基因可能通过调节四种异构体比例而发挥抑制或促进分化的作用。
- 徐菁王宏伟杨涛覃艳红李晓红
- 关键词：维甲酸细胞分化
- 下调WT1基因对K562细胞血管内皮生长因子表达的影响被引量：1
- 2008年
- 目的 探讨WT1基因沉默对人类白血病细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 将已构建的WT1小发夹RNA(shRNA)质粒载体转染入K562细胞,流式细胞术检测转染效率并对转染细胞进行分选,实时荧光定量PCR检测细胞转染前后WT1及VEGF基因mRNA的表达变化,用ELISA检测转染前后细胞培养液中VEGF浓度的变化.结果 转染48h,WT1shRNA质粒转入K562细胞,转染效率为(65±4.5)%,通过流式细胞术分选,可以得到纯度达98%以上的WT1shRNA阳性细胞,转染后的K562细胞WT1及VEGF基因mRNA表达较转染前及对照组均明显降低(P＜0.05),转染后48、72h细胞培养液中VEGF的含量较对照组明显降低(P＜0.05).结论 WT1干扰质粒在体外可以抑制白血病细胞株VEGF的表达,提示WT1基因可能通过上调VEGF基因的表达而参与白血病的血管新生.
- 杨涛王宏伟叶芳徐菁张丽朱镭
- 关键词：RNA干扰血管内皮生长因子
- WT1基因表达下调对K562／A02细胞阿霉素敏感性的影响
- 2009年
- 目的探讨WT1基因表达下调对人红白血病耐药细胞系K562／A02阿霉素敏感性的影响。方法将WT1mRNA的短发夹RNA（shorthairRNA，shRNA）构建至真核表达载体后转染K562／A02细胞，流式细胞术检测转染效率；荧光定量RT—PCR和Westernblot法分析WT1基因在转染前后表达的差异；pWT1shRNA转染K562／A02细胞48h并经阿霉素作用后，MTT法检测各组细胞阿霉素IC50值；流式细胞术检测细胞阿霉素累积量及细胞凋亡率。结果与未转染对照组及空载体组相比，转染WT1shRNA质粒的K562／A02细胞WTImRNA和蛋白水平均明显降低；经阿霉素诱导24h后，其对阿霉素的敏感性明显增高，相对逆转率为71．5％，细胞内阿霉素的累积量较各对照组明显增高（P值均〈0．05），细胞凋亡率明显升高（P〈0．05）。结论靶向WT1shRNA干扰质粒可有效抑制K562／A02细胞WT1基因表达，增强K562／A02细胞对阿霉素的敏感性。
- 杨涛王宏伟徐菁张丽朱镭
- 关键词：基因WT1K562/A02多药
- siRNA对HEK293细胞WT1表达的抑制作用及对K562细胞增生的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨以WT1基因为靶标治疗白血病的可行性，筛选有效抑制WT1基因表达的siRNA并观察其对K562细胞增生的影响。方法制备特异性WTi siRNA3条，转染HEK293细胞株，采用荧光定量RT—PCR方法检测WT1基因mRNA表达，Westernblotting法检测WT1蛋白表达；M1Tr法检测细胞增生的影响。结果不同位点的siRNA对WT1基因抑制作用不同。si—wt1-1对WT1mRNA抑制明显（P〈0．05），si—wt1-2、si—wt1-3对WT1mRNA无抑制（P〉0．05）。100nmol／L si—wt1—1能使WT1mRNA的表达在转染后24h和48h分别降低至对照组的（42．5±1．0）％（P〈0．05）、（25.3±1．5）％（P〈0．01），但72h恢复至对照组水平。siRNA作用无明显剂量依赖性，不同浓度si—wt1-1对WT1mRNA抑制作用的比较差异无统计学意义（P〉0．05）。Westernblotting法检测证实转染siRNA48、72、96h后，si—wt1-1对WT1蛋白抑制明显（P〈0．05），且96h抑制作用最强；si—wt1-2、si—wt1-3无明显抑制作用（P〉0．05）。si—wt1-1对K562细胞增生有抑制作用，si—wt1-1处理组与阴性对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论siRNA可有效抑制HEK293细胞WT1基因的表达，且mRNA水平抑制效果优于蛋白水平。si—wt1-1可有效抑制K562细胞的增生。
- 田彩霞王宏伟白波朱镭张丽李晓红
- 关键词：RNA干扰小分子干扰肾母细胞
- 根本原因分析法对老年患者医院感染的预防效果被引量：7
- 2015年
- 目的探讨与分析根本原因分析法预防老年患者医院感染的临床效果,为降低老年患者医院感染提供参考依据。方法选取2010年9月-2013年9月2 000例住院患者作为研究对象,选取2013年10月-2014年4月的310例患者为对照组,2014年5-11月的310例采用根本原因分析法制定预防措施患者为观察组,对两组患者住院期间的医院感染进行比较分析,数据采用SPSS 17.0软件进行统计分析。结果 2 000例住院老年患者中发生医院感染患者30例,感染率为1.50%,以单一部位感染为主,共25例占83.33%;感染者分泌物检测共检出病原菌36株,以革兰阴性菌为主,共25株占69.44%;观察组仅发生1例医院感染,感染率为0.32%,对照组发生医院感染7例,感染率为2.26%,组间比较观察组医院感染发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论通过采用根本原因分析法制定住院老年患者医院感染预防措施,可有效降低其感染率,提高医疗质量。
- 郝静杨辉武莹英栗艳婵迎春
- 关键词：老年患者医院感染
- 实时荧光定量RT-PCR检测大肠腺癌中WT1基因表达
- 2007年
- 目的探讨大肠腺癌标本中WT1基因的表达水平及其与临床病理特征的关系。方法建立实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测了27例大肠腺癌标本和11份正常大肠黏膜组织中WT1基因及内参照β-actin基因的表达水平。结果大肠腺癌标本中WT1基因表达水平的范围5.4×10-5～8.9×10-1,在11份正常肠黏膜中有5份存在WT1的低表达,范围从7.6×10-5～7.2×10-4,其余6份未检出表达,81%(22/27)的患者癌组织中WT1 mRNA表达水平高于正常肠黏膜组织,另外,研究表明WT1 mRNA表达水平与病理分级,淋巴结转移,Duke′s分期无明显相关性。结论WT1基因在大肠腺癌中高表达,可作为诊断和治疗大肠癌新的分子指标。
- 徐菁贺杰峰徐永群王宏伟
- 关键词：逆转录聚合酶链反应腺癌基因WT1
- A1/BFL1与WT1在急性白血病的表达及其相关性的临床研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究急性白血病患者A1/BFL1基因与WT1基因的表达情况及其相关性,探讨两者在白血病的临床意义。方法应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测63例初发白血病患者及20例非白血病患者的骨髓A1/BFL1及WT1基因mRNA的表达。结果63例初发白血病患者化疗前A1/BFL1及WT1基因的mRNA相对表达量较对照组明显增高(P<0.05),A1/BFL1与WT1的表达呈正相关(r=0.453,P<0.05),第一次诱导化疗获完全缓解(CR)者与未获CR者相比,A1/BFL1与WT1的相对表达量低(P<0.05)。结论A1/BFL1和WT1的高表达与白血病患者发病及预后密切相关,A1/BFL1与WT1基因共同参与了白血病的发生。
- 杨涛王宏伟徐菁
- 关键词：急性白血病WT1基因逆转录-聚合酶链反应
