国家自然科学基金(30300375)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 相关作者：向延芳史常旭何畏梁志清李彦锋更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院第三军医大学大坪医院更多>>
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- 小鼠FSH-Occludin重组多价避孕疫苗的构建及表达被引量：2
- 2007年
- 目的构建FSH与Occludin重组基因的毕赤酵母分泌型表达载体。方法利用RT-PCR技术,从小鼠新鲜脑组织中提取总RNA扩增获得FSH-β亚单位,同法从小鼠新鲜睾丸组织中提取总RNA扩增Occludin,通过双重PCR扩增,获得含FSH-β亚单位特定基因序列和闭锁因子第2个胞外环序列的耦合片段,构建两种重组质粒pPIC9KFSH-Occlu-din;经酶切鉴定后电转化毕赤酵母菌株GS115,YPD-G418平板筛选高拷贝转化子,甲醇诱导后SDS-PAGE电泳鉴定。结果通过双酶切分析、DNA测序鉴定明确特定的FSH-β亚单位和Occludin基因耦合片段序列与设计完全一致。目的蛋白相对分子质量分别约为14×103与12×103,与理论预测值相吻合;Western blot检测具有良好的免疫反应性。结论耦合片段被成功克隆到巴氏毕赤酵母表达载体pPIC9K中并高效、正确的表达。
- 向延芳何畏梁志清史常旭
- 关键词：卵泡刺激素毕赤酵母
- FSH-occludin融合蛋白在毕赤酵母中的表达纯化及免疫原性检测被引量：1
- 2008年
- 目的纯化FSH-occludin融合蛋白,并检测其免疫原性。方法将表达FSH-occludin蛋白的酵母工程菌GS115/pPIC9K接种到YPD培养基中多次传代后,用PCR检测其目的基因。该酵母工程菌在BMMY培养基中经甲醇诱导表达,上清液初步浓缩后上柱进行凝胶过滤层析,并将纯化蛋白免疫Balb/c小鼠,检测其血清抗体水平,以免疫组化的方法分析各组织oc-cludin的表达与定位。结果该酵母工程菌经多次传代后外源基因不丢失,Western blot检测结果表明纯化蛋白具有很好的反应原性,免疫组化证实occludin在实验组高表达。结论表达FSH-occludin蛋白的酵母工程菌具有很好的遗传稳定性,其表达产物可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。
- 向延芳何畏袁吉钊梁志清史常旭
- 关键词：毕赤酵母纯化免疫原性
- 靶向干扰睾丸支持细胞功能的重组避孕疫苗的构建与表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建含小鼠卵泡刺激素(亚单位(FSH-β)与闭锁因子(Ocln)特定基因片段的重组质粒,以期获得靶向干扰睾丸支持细胞功能的重组避孕疫苗。方法运用PCR技术,分别扩增小鼠FSH-β亚单位特定基因序列和闭锁因子第二个胞外环序列片段;定向克隆到pET28b表达载体中;并运用免疫印迹法对重组蛋白的表达做初步鉴定。结果通过双酶切分析、测序鉴定证实特定的FSH-β亚单位和Ocln基因片断被成功克隆到pET28b中,且诱导表达的重组蛋白能够被抗小鼠FSH-β及抗Ocln抗体所识别。结论重组分子具有两种靶分子的抗原性,为进一步研究其生物学活性及免疫避孕效应奠定基础。
- 何畏李彦锋向延芳梁志清史常旭
- 关键词：卵泡刺激素
