浙江省科技厅项目(021103004)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：张行应可净王琦叶景佳周畔更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属邵逸夫医院浙江大学更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 利用TaqMan技术定量检测基因表达的引物探针设计被引量：1
- 2007年
- 目的建立优化的实时荧光定量PCR的引物探针设计参数。方法设计引物和探针时的原则包括:①上、下游引物的融解温度(Tm值)应尽量相同或相差越小越好,以利于PCR退火温度的优化;②扩增区域应当跨越不同的外显子(在基因组DNA上至少一个以上的内含子),以利于区分基因组DNA扩增产物和cDNA扩增产物;③引物和探针的位置最好位于外显子和内含子交界处,以避免引物和探针与基因组DNA的结合;④扩增区域最好靠近基因的3’端,以减少不完全逆转录的影响。本次研究设计了实时荧光定量RT-PCR检测人甲胎蛋白mRNA的引物和探针,并提取临床肝癌组织标本中的RNA,检测其中甲胎蛋白的表达。结果本次研究设计的实时荧光定量RT-PCR检测甲胎蛋白mRNA的引物和探针具有良好的特异性,可用于临床标本的检测。结论本次研究确定的原则对提高利用TaqMan技术定量检测目的基因结果的可靠性具有很好的指导意义。
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- 关键词：TAQMAN技术基因表达定量PCR
- 纤维支气管镜毛刷洗脱细胞中CEA mRNA、CK20 mRNA表达的临床意义被引量：1
- 2007年
- 目的基因水平检测肺部疾病患者纤维支气管镜刷落细胞中CEA mRNA、CK20 mRNA表达水平临床意义。方法共收集83例肺部疾病患者纤维支气管镜刷脱细胞,采用实时荧光定量RT-PCR检测CEA mRNA、CK20 mRNA在其中的表达。结果肺癌与肺良性疾病CEA mRNA、CK20 mRNA之间的相对表达量差异均有统计学意义(Z分别=-3.79、-1.98,P均<0.05)。有81.39%的肺癌患者CEAmRNA、CK20mRNA超过阳性界限,同时进行的病理学诊断(毛刷涂片或活检)阳性率为58.13%。综合CEA mRNA、CK20mRNA、涂片和活检四项联合检测结果,肺癌患者阳性检出率高达90.69%。结论通过CEA mRNA、CK20 mRNA在肺癌中异常表达的检测和与病理学诊断的的综合分析,将有助提高肺癌的阳性检出率。
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- 关键词：肺癌基因表达
