国家自然科学基金(81173282)
- 作品数：11 被引量：100H指数：6
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- 相关机构：福建中医药大学厦门大学福州市第二医院更多>>
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- 健骨颗粒含药血清对体外破骨细胞CAⅡ、CK、MMP-9mRNA表达的影响被引量：6
- 2015年
- 目的通过观察补肾健脾中药健骨颗粒含药血清对体外破骨细胞CAⅡ、CK、MMP-9mRNA表达的影响,进一步揭示健骨颗粒有效防治绝经后骨质疏松症的作用机制。方法用M-CSF和RANKL诱导破骨前体细胞RAW264.7分化为成熟破骨细胞,alamar Blue法检测破骨细胞血清干预的最佳浓度,于破骨细胞培养第7天开始干预,分别用25%浓度的健骨颗粒含药血清和25%浓度的生理盐水血清干预,培养48小时后抽提总RNA,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量SYBR GREEN法检测CAⅡ、CK、MMP-9mRNA表达,并取骨片行甲苯胺蓝染色,计算分析骨陷窝数和骨吸收面积,同时运用氧化显色法检测破骨细胞培养液中TRAP含量,ELISA法检测骨磨片培养液中CTx含量。结果健骨颗粒含药血清组破骨细胞CAⅡ、CK、MMP-9mRNA表达水平明显低于生理盐水血清组(P<0.05),含药血清组骨磨片的骨陷窝数和骨吸收面积以及TRAP和CTx含量均低于生理盐水血清组(P<0.05)。结论健骨颗粒能有效抑制破骨细胞CAⅡ、CK、MMP-9mRNA表达,降低破骨细胞功能活性,抑制破骨细胞对骨基质的分解,从而抑制骨吸收。
- 张媛媛何嘉承林煜张文明黄云梅吴银生陈翔贾晓康林燕萍
- 关键词：健骨颗粒破骨细胞骨吸收组织蛋白酶K
- 健骨颗粒对成骨细胞分化的影响被引量：16
- 2012年
- 目的:观察健骨颗粒对成骨细胞分化过程的影响。方法:取第3代SD大鼠颅骨成骨细胞,生理盐水血清组加入生理盐水血清;含药血清组加入最佳浓度的健骨颗粒颗粒含药血清;MTT法检测最佳含药血清浓度;运用采用ELISA法检测成骨细胞OCN的表达,采用比色法测羟脯氨酸(HYP)、碱性磷酸酶(AKP),实时荧光定量PCR-SYBR GREEN法检测核心结合因子(Cbfα1)、I型胶原(Col I)、成骨转录因子(OSX)mRNA的表达。取第4代细胞采用茜素红染色法染色矿化结节。结果:MTT法检测显示含药血清最佳浓度为20%;钙化结节观察显示含药20%组最先出现矿化结节,结节数量增多;含药血清组细胞液内OCN、AKP和HYP含量高于生理盐水血清组(P<0.05);Real-time PCR检测结果显示含药血清组Cbfα1、ColⅠ、OSX基因mRNA的相对表达水平明显高于生理盐水血清组(P<0.05)。结论:健骨颗粒含药血清能提高体外培养成骨细胞中矿化结节的数量、AKP、HYP、OCN的含量、ColⅠ、Cbfα1、OSX mRNA的表达,促进成骨细胞增殖,加快细胞分化。
- 林煜吴银生卢天祥黄云梅林燕萍
- 关键词：成骨细胞细胞分化骨质疏松健骨颗粒
- 人参皂甙Rg1与钛微粒对大鼠颅骨成骨细胞的影响被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨人参皂甙Rg1与钛微粒对大鼠颅骨成骨细胞的影响,为人工关节假体松动的防治提供新思路。方法:收集、纯化新生SD大鼠颅骨成骨细胞,筛选钛微粒,配制钛微粒浸提液,进行内毒素检测后,将培养的第3代成骨细胞以1×105个.mL-1的密度传代接种于5组培养液中,即正常组(含10%胎牛血清的DMEM培养基)、钛微粒组(体积比为0.1%的钛微粒混悬液+含10%胎牛血清的DMEM培养基)、钛+高Rg1组(体积比为0.1%的钛微粒混悬液+终浓度为100μg.m-1的人参皂苷Rg1+含10%胎牛血清的DMEM培养基)、钛+中Rg1组(体积比为0.1%的钛微粒混悬液+终浓度为50μg.m-1的人参皂苷Rg1+含10%胎牛血清的DMEM培养基)、钛+低Rg1组(体积比为0.1%的钛微粒混悬液+终浓度为25μg.m-1的人参皂苷Rg1+含10%胎牛血清的DMEM培养基)。连续培养24 h后,观察成骨细胞形态;采用酶联免疫吸附法检测细胞培养液中前列腺素E2、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素1及白细胞介素1受体拮抗剂的浓度;采用实时荧光定量法检测成骨细胞中环氧化酶2mRNA、肿瘤坏死因子αmRNA的表达;采用Western Blotting法检测成骨细胞中环氧化酶2蛋白的表达。结果:5组成骨细胞培养液前列腺素E2光密度值的差异有统计学意义(F=244.895,P=0.000);钛微粒组、钛+高Rg1组、钛+中Rg1组均高于正常组[(53.362±0.307),(41.048±0.431),(38.998±0.234),(31.687±0.466),P=0.000,P=0.000,P=0.000];钛+高Rg1组、钛+中Rg1组、钛+低Rg1组(32.501±0.124)均低于钛微粒组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);钛+低Rg1组低于钛+高Rg1组、钛+中Rg1组(P=0.000,P=0.000);钛+高Rg1组高于钛+中Rg1组(P=0.000);正常组与钛+低Rg1组比较,差异无统计学意义(P=0.168)。5组成骨细胞培养液肿瘤坏死因子α光密度值的差异有统计学意义(F=72.340,P=0.000);钛微粒组、钛+高Rg1组、钛+中Rg1组、钛+低Rg1组均高于正常组[(50.121±0.532),(49.675±0.336),(46.431±0.245),(42.521±0.5
- 林煜张怡元冯尔宥吴银生林燕萍
- 关键词：成骨细胞细胞培养技术人参皂甙细胞因子类环氧化酶2
- 健骨颗粒对体外破骨细胞整合素α_V及β_3 mRNA表达的影响被引量：5
- 2012年
- 目的:探讨补肾健脾中药健骨颗粒对体外破骨细胞整合素(Itg)αV、β3mRNA表达的影响。方法:采用破骨前体细胞系诱导培养法,通过M-CSF和RANKL诱导剂诱导RAW264.7细胞,分化为成熟破骨细胞。分别用健骨颗粒含药血清和生理盐水血清干预,运用实时荧光定量PCR法检测ItgαV、β3mRNA表达,并取骨片行甲苯胺蓝染色,骨陷窝和骨吸收面积计算分析。结果:经M-CSF和RANKL诱导后,RAW264.7细胞的形态特征、TRAP染色均符合成熟破骨细胞特异性表现;含药血清组破骨细胞ItgαV、β3mRNA表达水平明显低于生理盐水血清组(P<0.05),同时骨磨片的骨吸收陷窝数和面积亦呈同样变化趋势。结论:RAW264.7细胞经诱导分化后可以获取成熟破骨细胞;健骨颗粒能有效抑制破骨细胞Itgαv、β3 mRNA表达,影响破骨细胞功能活性。
- 林燕萍何嘉承佘家姮巫阳生吴银生林煜黄云梅黄美雅
- 关键词：健骨颗粒破骨细胞
- 健骨颗粒促进成骨细胞增殖的分子机制被引量：10
- 2013年
- 背景:ERK是依赖于Ras途径激活的一个蛋白激酶,在成骨细胞增殖和分化过程中发挥重要作用。而PD98059是MEK特异性抑制剂,它可通过抑制MEK的活性来抑制ERK的磷酸化,从而起到阻断ERK信号通路的作用。目前有关ERK在大鼠成骨细胞增殖和分化过程中的作用研究甚少。ERK在健骨颗粒促进大鼠成骨细胞增殖和分化过程中调控的作用更未被阐明。目的:观察ERK信号转导通路在健骨颗粒促成骨细胞增殖和分化过程中的作用。方法:取第3代SD大鼠头盖骨成骨细胞,空白组加入生理盐水血清;中药组加入最佳浓度的健骨颗粒含药血清;阻滞剂组添加PD98059阻断剂,中药加阻断剂组添加PD98059阻断剂与健骨颗粒含药血清。用MTT法测定细胞的增殖能力,比色法测碱性磷酸酶、羟脯氨酸水平。收集细胞实时荧光定量PCR-SYBRGREEN法检测Cbfa1、Ⅰ型胶原、OSXmRNA的表达,Westrenblot法检测成骨细胞ERK的表达情况。结果与结论:添加PD98059阻断剂后,阻滞剂组和中药加阻滞剂组中ERK的表达显著低于空白组和中药组。阻断剂组的成骨细胞内碱性磷酸酶、羟脯氨酸的表达以及Cbfa1、Ⅰ型胶原、OSXmRNA表达显著低于空白组和中药组。ERK在健骨颗粒促进大鼠成骨细胞增殖和分化过程中发挥重要作用,ERK信号通路可能是健骨颗粒促进成骨细胞增殖和分化的主要途径。
- 林煜卢天祥吴银生黄云梅林燕萍
- 关键词：骨组织构建PD98059健骨颗粒成骨细胞增殖CBFA1OSX
- 健骨颗粒抗炎镇痛作用的实验研究
- 2014年
- 目的探讨健骨颗粒的抗炎镇痛作用。方法采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀,蛋清致大鼠足趾肿胀,观察中药对小鼠耳廓肿胀和大鼠足趾肿胀的作用;采用扭体法观察中药对醋酸刺激小鼠所致疼痛的影响。结果健骨颗粒对小鼠耳廓肿胀、大鼠足趾肿胀有明显的抑制作用,对小鼠扭体反应也有抑制作用。结论补肾健脾中药健骨颗粒具有一定的抗炎、镇痛作用。
- 罗文娟林燕萍
- 关键词：健骨颗粒抗炎镇痛补肾健脾
- 手法复位石膏外固定和切开复位钢板内固定治疗骨质疏松性桡骨远端骨折的比较研究被引量：56
- 2015年
- 目的：比较手法复位石膏外固定和切开复位钢板内固定治疗骨质疏松性桡骨远端骨折的临床疗效和安全性。方法：回顾性分析73例骨质疏松性桡骨远端骨折患者的病例资料，其中采用手法复位石膏外固定44例，采用切开复位钢板内固定29例。男32例，女41例；年龄60～79例，中位数69岁；左侧27例，右侧46例；按照桡骨远端骨折的 AO 分类，A3型18例、B2型8例、B3型12例、C1型19例、C2型16例。记录并比较2组患者骨折愈合时间、掌倾角和尺偏角及并发症发生情况。记录并比较2组患者骨折愈合时及骨折愈合后6个月的前臂旋前角度、前臂旋后角度及 Robbins 腕关节评分。结果：手法复位石膏外固定组骨折愈合时间、掌倾角、尺偏角均小于切开复位钢板内固定组[（9．75±1．04）周，（11．83±0．75）周，t ＝17．280，P ＝0．001；9．88＆#176;±1．47＆#176;，12．43＆#176;±1．27＆#176;，t ＝10．509，P ＝0．007；21．13＆#176;±0．85＆#176;，22．72＆#176;±0．66＆#176;，t ＝14．350，P ＝0．003]。骨折愈合时手法复位石膏外固定组前臂旋前、旋后角度及 Robbins 腕关节评分均低于切开复位钢板内固定组[25．63＆#176;±6．72＆#176;，51．17＆#176;±8．93＆#176;，t ＝37．555，P ＝0．000；22．13＆#176;±4．58＆#176;，51．33＆#176;±5．72＆#176;，t ＝113．150，P ＝0．000；（3．88±0．64）分，（6．00±0．59）分，t ＝67．632，P ＝0．000]；骨折愈合后6个月2组患者前臂旋前、旋后角度及 Robbins 腕关节评分比较，组间差异均无统计学意义[77．50＆#176;±6．74＆#176;，81．50＆#176;±4．60＆#176;，t ＝1．554，P ＝0．236；73．63＆#176;±5．71＆#176;，73．50＆#176;±1．87＆#176;，t ＝0．003，P ＝0．960；（7．63±0．92）分，（8．00±1．06）分，t ＝1．479，P ＝0．236]。2组患者并发症发生率比较，差异无统计学意义（χ2＝0．052�
- 郭世明石玲玲郭志民林燕萍
- 关键词：桡骨骨折骨质疏松性骨折正骨手法
- 青娥方对骨质疏松模型大鼠骨组织MMP-9及血清TRACP的影响被引量：7
- 2014年
- 目的研究青娥方对去卵巢骨质疏松模大鼠骨组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)含量及血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)活性的影响。方法切除SD雌性大鼠双侧卵巢建立骨质疏松模型,术后12周经鉴定模型成立后,将成模大鼠随机分为青娥方组、雌激素组、生理盐水组,前2组分别灌服青娥方、戊酸雌二醇片,生理盐水组、假手术组灌服生理盐水,用药4、8、12周检测4组骨组织MMP-9mRNA、蛋白含量、血清E2含量及TRACP的活性。结果去卵巢12周后,模鼠体内随着E2水平的下降,血清TRACP活性、骨组织MMP-9mRNA和蛋白含量明显升高,与假手术组比较差异具有统计学意义;用药4、8、12周后,2药物组血清E2水平高于生理盐水组;青娥方组血清TRACP活性、骨组织MMP-9mRNA、蛋白含量低于生理盐水组,差异有统计学意义。结论青娥方能抑制骨组织MMP-9的合成和分泌,降低TRACP的活性,减慢骨质疏松模型大鼠的骨吸收速率。
- 王金蕴林煜吴银生黄云梅林燕萍
- 关键词：骨质疏松绝经抗酒石酸酸性磷酸酶
- miRNA调节骨髓间充质干细胞成骨分化作用研究被引量：2
- 2016年
- miRNA是一类具有转录后调控功能作用的单链小RNA。从1993年在秀丽线虫发育时期发现第一个miRNA后,miRNA的研究取得巨大突破,目前在多种生物体内发现数量庞大的miRNA,并且观察到miRNA具有极其丰富的生物学功能,对生物体的发育代谢凋亡过程均具有调控作用。miRNA是一种非编码的小RNA,长度约为19~25个核苷酸,具有高度保守性。大约占到整个人类基因组的1%,调控人类30%以上基因的表达。参与各种生物体细胞早期发育和生长、增殖、分化、分裂以及凋亡,并且参与重要基因的调控、体液调节、组织重建、内分泌调节,对疾病的发生、发展、转归都具有重要影响[1-3]。
- 张文明张媛媛林燕萍
- 关键词：成骨分化MIRNABMSCS
- 钽微粒对人成骨细胞分化影响的实验
- 2013年
- 磨损颗粒是假体周围骨溶解,直接影响假体使用寿命的主要原因.取人工髋关节置换中截除的松质骨提取成骨细胞,分别加入常规培养基、含钽(tantalum,Ta)微粒悬液培养基、含钛(titanium,Ti)微粒悬液培养基混合培养.观察微粒对共培养的人成骨细胞的增殖分化过程的影响.结果显示Ta微粒和Ti微粒样品内毒素含量符合USP规定,常规培养基组细胞液内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OC)、Ⅰ型胶原(type I collagen,ColⅠ)和羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量最高,Ta微粒组次之,Ti微粒组最低(p<0.05).Real-time PCR检测结果显示各组核心结合因子α1(core-binding factorα1,Cbfa1)、ColⅠ、Osterix(OSX)基因mRNA的相对表达水平从高到低依次为常规培养基组、Ta微粒组、Ti微粒组(p<0.05).以上指标正常组均随天数的增加表达水平逐渐增强;而Ta微粒组有所升高,Ti微粒组则有所下降.提示与Ti微粒相比,Ta微粒对人成骨细胞的分化无明显的抑制作用.
- 张怡元林煜冯尔宥肖莉莉陈嵘王武炼
- 关键词：成骨细胞分化
