博士科研启动基金(199947)
- 作品数：10 被引量：42H指数：5
- 相关作者：王英杰刘俊王宇明郭海涛刘鸿凌更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院上海交通大学附属第六人民医院江西省中医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 非生物人工肝在重型肝炎患者过渡肝移植中的应用价值被引量：3
- 2002年
- 目的 评价非生物人工肝对重型病毒性肝炎 (重型肝炎 )患者等待肝移植的过渡支持作用与价值。方法 采用血浆置换和血浆吸附两种非生物人工肝支持疗法 ,对 8例拟定肝移植的中晚期重型肝炎患者进行人工肝过渡支持。结果 8例重型肝炎患者经人工肝支持 ,4例肝衰竭得到较好的控制 ,4～ 13d后成功等到供肝。另 4例肝衰竭控制不明显 ,病情呈进行性加重 ,在待肝过程中 (人工肝支持后 3～ 8d)死亡。结论 非生物人工肝对等待肝移植的重型肝炎患者有一定的过渡支持作用 ,能否最终成功过渡与患者肝衰竭程度、并发症及待肝时间密切相关。
- 王英杰何念海刘俊牛润章李嘉佳文红伟王宇明
- 关键词：非生物人工肝重型肝炎患者
- 新型编织型生物反应器内大量乳猪肝细胞的组织化培养
- 2004年
- 目的 使反应器内培养的肝细胞能在较长时间保持肝细胞的特殊功能和活力 ,提高生物反应器的功效并为反应器内储存和运输肝细胞提供可能。方法 将新生实验型小猪肝细胞与微载体共同培养 ,待肝细胞与微载体充分粘附形成微载体 球形聚集体后 ,将其置入新型编织型生物反应器的外腔 ,用培养液循环式人工毛细管培养系统进行培养 ,在培养液内加入氯化氨、醋胺酚检测生物反应器的转化功能 ,行无血清培养检测肝细胞的白蛋白的合成功能 ,观察肝细胞的酶漏出量。锥虫蓝染色观察肝细胞的活力 ,电镜观察其超微结构。结果 生物反应器内培养的肝细胞在 1周内能保持较高的活力 ,并保持着较高的氯化氨、醋胺酚的生物转化及白蛋白合成功能 ,酶的漏出量也少。肝细胞超微结构示内质网、线粒体等细胞器丰富 ,核内染色体分布均匀 ,肝细胞间的微绒毛形成胆小管样结构。结论 肝细胞与微载体及肝细胞之间的聚集 ,形成直径大小不等的肝细胞 微载体球形聚集体 ,这种由肝细胞重新结合而成的聚集体类似于体内的肝组织结构 ,在新型编织型生物反应器内的中空纤维网架的支持下 ,肝细胞聚集体均匀地分散其中 ,为肝细胞的生长提供了一个类似体内内环境的三维空间 ,因而在无氧合器供氧的情况下 ,肝细胞也能在 1周内保持较好的形态和功?
- 何礼荣戴坤扬王英杰刘俊郭海涛刘鸿凌戎建杰
- 关键词：乳猪肝细胞微载体
- 两种人工肝生物反应器内乳猪肝细胞培养的比较研究被引量：2
- 2006年
- 目的采用普通型中空纤维及编织型中空纤维两种人工肝生物反应器,比较其内培养的肝细胞生存时间及功能,为生物反应器的设计提供新的方法和思路。方法将新生中国实验小型猪的肝细胞与微载体共同培养,待肝细胞与微载体充分粘附形成微载体-球形聚集体后,将其注入生物反应器的外腔,在培养液内加入氯化氨、醋胺酚检测生物反应器的生物转化和代谢功能,行无血清培养检测肝细胞白蛋白的合成功能,并检测肝细胞酶的漏出量。锥虫蓝染色测定肝细胞的活力,透射电镜观察其超微结构。结果肝细胞与微载体相互聚集,形成了具有一定结构层次的肝细胞聚集体,重构了肝细胞之间的相互连接;接种入生物反应器后,在编织型生物反应器中肝细胞1周内保持较高的活力,至第7天肝细胞活力仍高达(75±6.3)%,对醋氨酚和氯化铵有良好的代谢、生物转化功能,白蛋白合成在第7天为(0.57±0.13)mg/106个肝细胞,酶的漏出量也少,各项指标均明显优于普通型生物反应器组(P<0.05)。结论编织型生物反应器为肝细胞的生长、增殖提供一个类似体内的三维立体环境,是一种性能良好的生物反应器。
- 何礼荣王英杰戴坤扬张允平刘俊郭海涛刘鸿凌
- 关键词：人工肝生物反应器肝细胞微载体
- 体外灌流装置分离肝细胞的初步探索被引量：8
- 2003年
- 目的 探索和建立一种消化分离肝细胞的体外简易灌流装置及方法。方法 采用蠕动泵、特制水浴恒温箱、硅胶管、不锈钢网、塑料留置注射软管针头等组装成简易灌流装置 ,对成年家兔、新生中国实验小型猪和人胎肝进行体外两步灌流 ,综合评价分离肝细胞的效果。结果 灌流装置两步法消化分离肝细胞的活力为 84%～ 98% ,细胞获得量为( 3 .5～ 9.2 )× 10 6/g ,普通条件接种培养后细胞贴壁、生长均良好。结论 自制体外灌流装置消化分离肝细胞简便、快捷、可靠 。
- 郭海涛王英杰刘俊刘国栋文红伟王宇明
- 关键词：肝细胞
- 培养猪肝细胞中空纤维型生物反应器的制备被引量：2
- 2003年
- 目的 探讨培养猪肝细胞中空纤维型生物反应器的制备方法。方法 将两步法分离的新生实验小型猪肝细胞接种于中空纤维器内,用培养液循环式人工毛细管培养系统进行培养,观察生物反应器的蛋白分泌、利多卡因转换能力;检测培养猪肝细胞的乳酸脱氢酶(LDH)漏出量及细胞形态和活力。结果在反应器制备后第2、4、6天可检测出猪肝细胞分泌的白蛋白,生物反应器对利多卡因的转换率为89.6％～96.1％。培养结束时LDH漏出量由(23.7±4.6)U/L升高至(127.8±17.4)U/L(F=39.582,P<0.01),细胞活力由95.8％±0.3%降低至83.8％±4.7％(t=5.135,P<0.01)。结论 可用人工毛细管培养系统制备出1周内性能较好的培养猪肝细胞中空纤维型生物反应器。
- 王英杰刘鸿凌郭海涛刘俊文红伟王宇明
- 关键词：肝细胞生物反应器乳酸脱氢酶
- 用猪肝细胞型混合生物人工肝支持系统治疗肝衰竭的初步研究被引量：6
- 2003年
- 目的 对培养猪肝细胞型混合生物人工肝支持系统治疗肝衰竭的可行性进行初步评价。方法 采用自行研制的以新生实验小型猪肝细胞为基础的混合生物人工肝支持系统 ,对 5例慢性重型肝炎患者进行体外人工肝支持 ,综合评价其临床疗效和安全性。结果 5例患者经混合人工肝支持后 ,肝衰竭均得到不同程度的控制 ,表现为临床症状和肝衰竭相关指标好转 ,肝性脑病改善。最终 2例好转出院 ,1例经肝移植存活 ,2例死亡 ,死亡原因与不良反应无关。
- 王英杰何念海刘俊牛润章李嘉佳王宇明李梦东
- 关键词：生物人工肝猪肝细胞重型肝炎
- 胶原凝胶固定培养大鼠肝细胞的功能与形态观察被引量：5
- 2003年
- 目的 探索混合胶原凝胶培养肝细胞的方法 ,观察培养鼠肝细胞的功能与形态特征。方法 两步法分离大鼠肝细胞 ,与Ⅰ型鼠尾胶原溶液混合接种于培养瓶 ,待胶原液形成凝胶后 ,加培养液常规培养 ,观察培养鼠肝细胞的形态学特征和尿素合成及酶漏出量。结果 成功将大鼠肝细胞混合固定于胶原中 ,形成凝胶状进行培养。培养期间 ,始终能检测出鼠肝细胞合成分泌的尿素 ,而肝细胞乳酸脱氢酶漏出量较少 ,倒置相差显微镜下观察到典型的形态特征。结论 混合胶原凝胶培养方法能为肝细胞提供更接近体内的培养环境 ,可能适用于生物人工肝研究。
- 王英杰刘鸿凌文红伟刘俊郭海涛
- 关键词：肝细胞胶原凝胶
- 新型中空纤维编织型生物人工肝反应器的初步构建被引量：5
- 2003年
- 目的 为体外生物人工肝支持系统构建一种新型中空纤维编织型生物反应器 ,提高传统中空纤维生物反应器的性能。方法 采用中空纤维编织方法 ,制作三维立体型生物反应器 ,对反应器进行物质传输试验后 ,将分离的新生实验小型猪肝细胞接种于中空纤维支架上 ,用培养液循环式人工毛细管培养系统进行培养 ,检测生物反应器的生物功能 ,观察培养猪肝细胞的酶漏出量。结果 传输试验显示 ,中空纤维编织型反应器的半透膜能快速传输含人白蛋白和酚红的RPMI 164 0培养液。加入肝细胞并培养后 ,用SDS/PAGE可从生物反应器内检测出猪肝细胞分泌的白蛋白 ,生物反应器内的猪肝细胞有效地将氯化铵转换成尿素。反应器实验中 ,肝细胞仅释放了少量的ALT、LDH。结论 初步研制出一种新的、符合生物人工肝基本要求的实验型生物反应器 ,该反应器内培养的肝细胞保持较好的细胞活力 。
- 王英杰郭海涛刘鸿凌刘俊王宇明
- 关键词：生物反应器肝细胞细胞培养生物人工肝
- 乳猪肝细胞-196℃保存的初步研究被引量：13
- 2003年
- 目的 探索适合于乳猪肝细胞 -196℃冷冻保存的条件和方法。方法 体外分离新生乳猪肝细胞 ,以含不同浓度二甲亚砜 (DMSO)的冻存液及不同的细胞浓度在液氮中保存。 2个月后复苏接种培养 ,对其存活率、贴壁率、尿素合成能力、猪白蛋白mRNA的表达等进行检测 ,并观察其形态结构变化。结果 不同DMSO浓度保存猪肝细胞复苏后的活力及形态均有所不同 ,其中含 5 %DMSO冻存液组保存效果最差 ;10 %组次之 ;15 %组最佳。 15 %DMSO冻存液组复苏后肝细胞的存活率为 ( 83± 4) % ,贴壁率是 ( 81± 5 ) % ,细胞形态与未冻存组相似 ,均保持较强的尿素合成能力及猪白蛋白mRNA的表达 ,较 5 %与 10 %DMSO冻存液组有显著性差别 (P <0 .0 5 )。冻存时肝细胞浓度为 ( 5～ 10 )× 10 6个 /ml组复苏后细胞存活率明显优于 ( 1～ 2 .5 )× 10 6个 /ml组。结论 15 %DMSO浓度适合于乳猪肝细胞的长期保存。
- 刘鸿凌王英杰郭海涛王宇明于乐成刘俊谭朝霞
- 关键词：猪肝细胞冻存保护剂二甲亚砜
- 三明治培养新生实验小型猪肝细胞的功能与形态被引量：1
- 2003年
- 目的 探索双层胶原夹心培养猪肝细胞的方法 ,观察培养猪肝细胞的功能与形态特征。方法 将两步法分离的新生中国实验小型猪肝细胞接种于胶原被覆的培养板常规培养 ,2 4h后 ,肝细胞上再加一层胶原形成双层胶原夹心(三明治 )培养 ,观察培养猪肝细胞的白蛋白分泌、形态学特征和乳酸脱氢酶 (LDH)漏出量。结果 成功将新生实验小型猪肝细胞固定于双层胶原中 ,形成三明治状。培养 1周内 ,用SDS/PAGE可检测出猪肝细胞分泌的白蛋白 ,倒置相差显微镜下观察到典型的形态特征 ,培养期内LDH漏出量较少。结论 可用双层胶原对新生乳猪肝细胞进行三明治样培养 ,为肝细胞提供更接近体内的培养环境 。
- 杨杰王英杰刘鸿凌刘俊王宇明
- 关键词：肝细胞小型猪三明治
