国家高技术研究发展计划(2006AA020905)
- 作品数：18 被引量：69H指数：6
- 相关作者：张军夏宁邵李少伟顾颖何芳萍更多>>
- 相关机构：厦门大学绵阳市中心医院成都军区总医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金福建省科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 重组人uPA_(17)-KPI大规模发酵及纯化工艺的建立
- 2010年
- 目的建立重组人uPA17-KPI(rhuPA17-KPI)毕赤酵母工程菌在80L发酵罐中的大规模发酵及纯化工艺。方法对工程菌表达rhuPA17-KPI的pH值进行优化。在摇瓶中制备rhuPA17-KPI工程菌种子2L,接种至80L发酵罐中,采用优化的pH值,补料分批培养方式对工程菌进行高密度发酵,控制和优化各种发酵条件,经甲醇诱导48h后结束发酵。将发酵液离心,经SP Sepharose XL阳离子交换层析和SourceTM 30 RPC反相疏水柱层析纯化。结果建立的发酵工艺为:控制发酵温度为28℃,pH值为5.5,溶氧值为25%～30%之间,在酵母细胞湿重达到190g/L时开始甲醇诱导表达,诱导30h,rhuPA17-KPI的分泌达高峰,为300mg/L发酵液。发酵上清经阳离子交换层析和反相疏水层析纯化后,获得纯度为95%以上的rhuPA17-KPI,产量为180mg/L,回收率为60%。结论已建立了rhuPA17-KPI毕赤酵母工程菌在80L发酵罐中的大规模发酵及纯化工艺,为其产业化及临床应用奠定了基础。
- 赵磊孔宁颜炜群周庆伟
- 关键词：毕赤酵母发酵纯化
- 抗H5亚型禽流感病毒单链抗体在毕赤酵母中的分泌型表达和生物活性分析
- 2011年
- 在本实验室研制出的多株针对H5N1亚型禽流感血凝素单抗中,13D4单抗对所有H5亚型病毒均有血凝抑制和中和活性,具有特异性高、反应性强和识别广的特点,且在小鼠实验中显示了对各种代表株禽流感的感染和发病均具有良好的治疗效果。在此研究基础上,本实验通过基因工程构建含有13D4单链抗体(scFv)基因的毕赤酵母表达载体,实现目的蛋白的分泌性表达和纯化。经过竞争法和血凝抑制检测其活性,表明获得的单链抗体具有与原始鼠源抗体相近的反应活性和相同的识别表位。H5N1广谱中和单抗13D4的单链抗体的成功构建,为进一步研制针对H5N1禽流感病毒的治疗性抗体奠定了基础。
- 何芳萍林庆山李少伟魏旻希陈振钦罗文新陈毅歆张军夏宁邵
- 关键词：高致病性禽流感病毒血凝抑制毕赤酵母
- 一种A型流感病毒NP抗原快速检测试剂的建立被引量：10
- 2008年
- 目的建立一种适合现场检测需要的A型流感快速诊断试剂。方法以自制的抗A型流感（Flu A）病毒核蛋白（NP）单抗为原料，建立快速检测A型流感病毒的双抗体夹心酶免疫渗滤试验，并对其灵敏度和特异性进行了初步评价。结果该试剂对不同地区流行的各种亚型的A型流感病毒株均有较高的反应性，而对非Flu A病毒株无交叉反应。比较该试剂与BD公司的两种流感快速诊断试剂，发现该试剂对随机选取的3株Flu A病毒的检测分析灵敏度高出Directigen EZ FluA试剂5～125倍，对2株Flu A病毒的分析灵敏度高出Directigen Flu A试剂约20倍。另外，用该试剂对57份含漱液标本和170份动物拭子标本进行检测，结果显示：本试剂的灵敏度（〉85％）和特异性（〉95％）均优于当前主流的商品化A型流感快速诊断试剂。结论利用抗Flu A NP单抗为原料建立了A型流感快速诊断试剂，该试剂的应用无需任何专用仪器，操作简便快速，可满足现场检测需要。
- 徐飞海王锐白佳伟齐先佳陈毅歆葛胜祥张军夏宁邵
- 关键词：A型流感病毒核蛋白
- HIV-1 gp160截短蛋白在酿酒酵母中的表达被引量：1
- 2011年
- 利用PCR技术从pNL-43上扩增出截短的编码gp160蛋白的基因片断,克隆到酿酒酵母表达载体YEpFLAG-1上构建表达质粒YEp-gp160Δ12,电转化到酿酒酵母中,用缺色氨酸的SC培养基筛选出阳性克隆,重组子经YP培养基诱导后进行全菌蛋白的SDS-PAGE和Western Blotting分析,筛选出高表达菌株.纯化后的重组gp160Δ12(rgp160Δ12)蛋白经ELISA鉴定显示具有良好的生物活性.
- 杨坤宇李少伟张毅李庶甘何芳萍林庆山周正张军夏宁邵
- 关键词：酿酒酵母
- 高原低氧诱导细胞应激试验研究被引量：4
- 2010年
- 目的：探讨高原低氧状态对诱导实验鼠细胞应激性的作用和影响。方法：设定A,B,C 3组,分别再将其分为实验组（A1,B1,C1）和对照组（A2,B2,C2）,每小组18只,共108只实验鼠,雌雄各半,A组和C组用CR小鼠,B组用Wistar大鼠,A1组分析快速进入海拔3 820 m的缺氧诱导因子-1α表达特点;B1组置于400-420 kPa低压氧舱内压下,观察不同低氧暴露时间对大鼠心肌线粒体的影响;C组分析对比在不同海拔高度、不同氧浓度、不同天数的血浆血管内皮生长因子表达水平。对照组在海拔800 m进行实验。结果：A1组内皮素-1α的浓度逐渐上升,小鼠心肌细胞缺氧诱导因子-1α实验A1组阳性显著高于A2组;B组随进入低氧环境的天数延长,大鼠心肌线粒体的数量发生不同改变;C1组血管内皮生长因子浓度随天数增加而增加,与C2组比较差异有统计学意义。结论：低氧低压环境条件可促进实验鼠心肌细胞缺氧诱导因子-1α表达,实验鼠有低氧适应（习服）过程,血管内皮生长因子调控与氧含量相关,随氧含量下降而表达上升。
- 胡娟邓贵福胡媛姮李昉芳张杰
- 关键词：细胞应激缺氧诱导因子转录因子血管内皮生长因子线粒体
- 可捕获HBV的preS1单克隆抗体的制备及性质初探被引量：4
- 2008年
- 用天然乙型肝炎病毒（HBV）颗粒（Dane颗粒和管状颗粒）和HBV前S1（preS1）区基因工程重组蛋白GST-preS1联合免疫Balb/c小鼠，经杂交瘤技术制备了7株单克隆抗体（mAb），采用ELISA、免疫捕获PCR等方式鉴定其有关特性.各株mAb分别为IgG1和IgG2a，轻链均为κ型.腹水mAb的滴度为1×10^7-1×10^9.用间接法ELISA显示，所有7株preS1 mAb均可以识别HBV天然抗原，其中mAb 4D11与HBV天然抗原的结合能力最强.通过竞争抑制法ELISA检测推断preS1（21-47）上至少含有两个B细胞表位，mAb 4D11、1G5、7B6和7H11具有共同的B细胞抗原识别位点；mAb 3H5、6F1和2A6识别另外一个位点.本研究获得的可与HBV天然抗原结合的preS1单抗为HBV preS1检测试剂的研制提供了重要工具，对HBV preS1具有中和免疫活性抗原的设计及相关研究有重要帮助.
- 顾颖朱子恒李少伟张军夏宁邵
- 关键词：单克隆抗体HBVPRES1
- 梅毒螺旋体47ku抗原的分段表达及抗原表位分析
- 2008年
- 通过大肠杆菌表达系统表达了梅毒螺旋体47 ku膜蛋白及其N端和/或C端缺失的重组蛋白共15个,经亲和层析纯化,并通过免疫印迹和酶联免疫实验检测这组蛋白与梅毒病人血清的反应性.结果发现所有包含D结构域的重组蛋白的免疫反应性显著高于不含D结构域的蛋白,提示D结构域中可能包含47 ku膜蛋白上的一个免疫优势表位.
- 郭清顺李廷栋熊君辉周国梁葛胜祥李少伟张军夏宁邵
- 关键词：梅毒螺旋体免疫反应性表位
- 不同海拔高度人群胃蛋白酶原血清水平差异性分析
- 2015年
- 目的：了解在不同海拔高度人群血清中胃蛋白酶原（pepsinogen，PG）含量的变化情况。方法采集不同海拔地区人群的血液标本进行 PG 血清含量检测，根据海拔高度不同进行分组比较，PGR 为 PGI 与 PGII 的比值，对检测数据比较采用独立样本 t 检验。结果1000米组 PGI，PGII 和 PGR 结果数据分别为136.892±2.64μg／L，10.05±5.14μg／L 和13.07±7.41，与1300米组（分别为130.87±48.66μg／L，11.55±2.78μg／L 和12.89±4.76）比较 PGI 与 PGII 差异有统计学意义（P ＜0.05），而 PGR 差异无统计学意义（P ＞0.05）；1500米组上述各项数据分别是126.64±29.84μg／L，12.18±5.99μg／L 和12.2±14.84，与1000米组及1300米组比较 PGI 与 PGII 差异均有统计学意义（P ＜0.05），PGR 差异无统计学意义（P ＞0.05）；其中 PGI 血清水平与海拔高度呈负相关，PGII 血清水平与海拔呈正相关。结论研究发现随着海拔的升高人们的 PGI 血清含量会降低，而人 PGII 的血清含量会随海拔升高而升高，该海拔地区的氧分压不同可能是影响PG 水平变化的主要原因。
- 胡娟徐鹏呼永河林薇
- 关键词：胃蛋白酶原氧分压胃病
- HBV感染患者氧化应激状态与病毒基因型和耐药突变的相关性被引量：3
- 2018年
- 目的探讨慢性乙型肝炎患者氧化应激(OxS)状态和疾病严重程度与乙型肝炎病毒(HBV)基因型和耐药突变的相关性。方法 2014年2月至2016年4月该院确诊的乙型肝炎病毒感染患者296例,其中慢性乙型肝炎(CHB)145例,肝硬化(HBC)101例,CHB相关原发性肝癌(HCC)50例。采用PCR-反向点杂交法检测3种HBV基因型(B、C、D型)和8种耐药突变基因(t180L、rt204M、rt207V、rt236N、rt250M、rt181A、rt184T、rt202S);同时,检测总氧化态(TOS)和总抗氧化态(TAS),并计算OxS指数(OSI)。比较不同肝病、不同基因型及有无耐药突变患者之间TOS、TAS、OSI的差异,并分析HBV基因型、耐药突变、患者OxS与肝病严重程度的相关性。结果 CHB、HBC和HCC患者血清TOS和OSI,以及C型比值和耐药突变率依次增高(均P<0.05);血清TAS则依次降低,但CHB患者和HBC患者之间差异无统计学意义(P>0.05)。除HBC患者TAS水平外,耐药突变患者的TOS和OSI水平升高,而TAS水平降低,与无突变患者比较,差异有统计学意义(P<0.05),且耐药突变发生与血清TOS(r=0.476,P<0.01)和OSI(r=0.441,P<0.01)水平呈正相关,与TAS(r=―0.249,P<0.01)水平呈负相关;突变位点数与HBV感染后病情严重程度呈正相关(r=0.614,P<0.01)。结论 HBV感染患者存在不同程度的氧化损伤,其程度随病毒基因型和耐药突变不同而有所差异。因此,OxS参数可能是反映HBV感染患者疾病进展的有用指标。
- 杨渝伟陈小红彭玲唐洁俸家富
- 关键词：乙型肝炎病毒感染氧化应激基因型耐药突变
- 毕赤酵母分泌表达嵌合HEV表位的HBcAg颗粒
- 2009年
- 在毕赤酵母分泌表达嵌合有HEV受体相关表位12A10的HBcAg蛋白,经甲醇诱导后的培养液上清通过切向流浓缩、更换缓冲液后,进行疏水层析纯化.CsCl等密度梯度离心测得分泌的重组颗粒的密度为1.32 g/mL.透射电镜观察显示,纯化的重组颗粒为均一的直径30 nm左右的空心颗粒.小鼠免疫实验表明,纯化颗粒免疫8周后鼠血清中的特异性12A10抗体滴度可达到1.6×105,并且重组颗粒较好地呈递了HEV受体相关的非免疫优势表位.本文的结果为毕赤酵母胞外分泌表达其它大尺度的重组蛋白颗粒提供了参考,为研究携带表位多肽的疫苗载体提供了范例.
- 章建楠李少伟杨坤宇何芳萍唐明顾颖王颖彬杜海莲张军夏宁邵
- 关键词：乙肝病毒核心抗原毕赤酵母分泌表达
