江苏省自然科学基金(BK2008185)
- 作品数：9 被引量：18H指数：3
- 相关作者：陈晓岚范亚平郭乃凤曹英杰丁斐更多>>
- 相关机构：南通大学江苏省神经再生研究重点实验室南京医科大学更多>>
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- 维甲酸受体介导全反式维甲酸对糖尿病肾病大鼠肾组织细胞增殖与凋亡的影响
- 2012年
- 目的探讨维甲酸受体（RAR-α、RAR-β、RAR-γ）介导的全反式维甲酸（ATRA）对糖尿病肾病大鼠肾组织细胞增殖与凋亡的影响及机制。方法健康雄性SD大鼠30只，随机选10只为空白对照组；链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病模型，造模成功后随机分为糖尿病模型组（n=10）和ATRA组（n=10）。于造模成功第2天起ATRA组大鼠给予ATRA10mg·kg^-1·d^-1灌胃，对照组与糖尿病组均予等体积蒸馏水灌胃。于第8周及第12周观察生化指标及处死各组大鼠，取肾组织行HE染色观察肾脏病理变化；原位末端标记法（TUNEL法）检测各组肾组织细胞凋亡率；间接免疫荧光法检测各组肾组织中维甲酸受体RAR-α、β、γ的表达情况；免疫组化法检测各组肾组织中增殖指标Ⅰ型胶原（ColⅠ），层粘连蛋白（LN）及凋亡相关因子Smac、caspase-3的蛋白表达。实时定量PCR法检测各组肾组织中Smac、caspase-3 mRNA的表达。结果与对照组比较，糖尿病组大鼠24h尿蛋白、Scr、BUN、肾质骱质量比值均显著增加（均P〈0．05），而ATRA组上述指标较糖尿病组减少（均P〈0．05）。ATRA组病理改变较糖尿病组减轻。12周时，与对照组比较，糖尿病组细胞凋亡率显著增加（P〈0．01），ATRA组较糖尿病组减少（P〈0．01）。间接免疫荧光结果显示，12周时糖尿病组肾组织RAR-Ⅰ、RAR-β阳性细胞数显著少于对照组（均P〈0．05），而ATRA组较糖尿病组显著增加（均P〈0．01）；各组肾组织中均未见RAR．γ表达变化。免疫组化结果显示，12周时糖尿病组肾组织肾小球系膜区中ColⅠ、LN、Smac、caspase．3蛋白的表达显著高于对照组（均P〈0．01），ATRA组较糖尿病组显著减少（均P〈0．01）。实时定量PCR结果显示，与对照组比较，糖尿病组Smac、caspase-3mRNA的表达均显著增多（均P〈0．01），并随时间延长表达增强；ATRA组较糖尿病组显著减少�
- 王云陈晓岚陈旭王娜郭乃凤范亚平
- 关键词：糖尿病肾病细胞增殖维甲酸受体维甲酸
- TGF-β/Smad信号通路对肾小球系膜细胞COX-2表达的影响被引量：3
- 2010年
- 目的探讨转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路对肾小球系膜细胞环氧化酶2(COX-2)表达的影响。方法取传代培养第4代系膜细胞进行分组:对照组(A组)、TGF-β5 ng/ml组(B组)、TGF-β10 ng/ml组(C组)、TGF-β10 ng/ml+NS-398 10μmol(D组)和TGF-β10 ng/ml+staurosporine 5 nmol/ml组(E组)。用RT-PCR方法测定各组COX-2 mRNA及Smad 2 mRNA的表达,Western blot法测定各组COX-2及Smad 2蛋白的表达。结果不同浓度TGF-β作用4、12、24 h后,系膜细胞Smad 2 mRNA和COX-2 mRNA表达及二者的蛋白表达均增加,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05),加入COX-2抑制剂NS-398或Smad 2抑制剂staurosporine后,COX-2和Smad 2的表达均减少(P<0.05)。COX-2和Smad 2表达呈正相关(r=0.9438,P<0.05)。结论 TGF-β可通过Smad信号通路刺激肾小球系膜细胞COX-2的表达。
- 陈晓岚陈玉莲宋东庆郭乃凤曹英杰高捷张定武
- 关键词：转化生长因子ΒSMAD2环氧化酶2肾小球系膜细胞
- Ski在全反式维甲酸抑制TGF-β1诱导的系膜细胞增殖中的作用
- 2013年
- 目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对转化生长因子(TGF)-β1诱导的大鼠系膜细胞增殖及Ski表达的影响。方法不同浓度ATRA预处理大鼠HBZY-1系膜细胞(为各剂量ATRA组)24h后再加TGF-β1(10μg/L)培养24h。CCK-8法检测细胞增殖情况;Real-time PCR法检测SkimRNA的表达;Western blot检测Ski蛋白的表达;激光共聚焦荧光显微镜检测Ski蛋白的亚细胞定位。并与正常对照组及TGF-β1组比较。结果与正常对照组相比,TGF-β1组系膜细胞增殖明显,且Ski mRNA及蛋白表达升高(P<0.05);与TGF-β1组相比,ATRA能够呈剂量依赖性地抑制TGF-β1的促增殖作用,ATRA 10μmol/L组Ski mRNA及蛋白表达量明显增高。ATRA组Ski蛋白主要定位于大鼠系膜细胞核,其细胞核荧光信号强度较TGF-β1组明显增强,细胞浆中荧光信号强度较TGF-β1组减弱。结论 ATRA可通过上调大鼠系膜细胞Ski表达,抑制其向核外转位,从而抑制TGF-β1诱导的系膜细胞增殖。
- 苏宝凤王晓花张莉于莹陈晓岚
- 关键词：肾小球系膜细胞维甲酸SKI
- NS-398通过转化生长因子-β/Smad信号通路对肾小球系膜细胞环氧化酶-2表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨COX-2抑制剂NS-398对转化生长因子-β(TGF-β)影响肾小球系膜细胞表达环氧化酶-2(COX-2)及Smad2 mRNA表达的作用。方法:传代培养系膜细胞后取第4代系膜细胞进行分组实验,用RT-PCR方法测定各组COX-2 mRNA及Smad2 mRNA的表达,观察不同浓度TGF-β在4、12、24h对COX-2 mRNA及Smad2 mRNA表达的影响,及NS-398对其的抑制作用。结果:不同浓度TGF-β作用不同时间后,系膜细胞COX-2 mRNA和Smad2 mRNA表达均增加,呈浓度和时间依赖性。与TGF-β组相比,加入COX-2抑制剂NS-398后,COX-2 mRNA和Smad2 mRNA表达均减少。结论:TGF-β刺激肾小球系膜细胞COX-2表达的信号通路之一是Smad信号通路。而COX-2抑制剂NS-398对COX-2表达的抑制机制之一是通过此信号通路。
- 陈玉莲陈晓岚李辉丁斐
- 关键词：肾小球系膜细胞环氧化酶-2抑制剂SMAD2环氧化酶-2
- 全反式维甲酸对转化生长因子β1诱导肾小球系膜细胞环氧化酶2表达及Smad信号通路的影响被引量：5
- 2010年
- 转化生长因子β1（TGF-β1）可能是致组织纤维化的核心因子,其经典信号通路为Smad通路.环氧化酶2（COX-2）是一种膜结合蛋白,在炎性反应中起重要作用.局部浸润的炎性细胞、肾小球的巨噬细胞、系膜细胞都是COX-2的来源.维甲酸能抑制肾脏纤维化,保护肾功能,其主要包括全反式维甲酸（atRA）,92顺式维甲酸和132顺式维甲酸.本研究探讨atRA对肾小球系膜细胞TGF-β-Smad信号通路中COX-2表达的影响.
- 陈晓岚李辉曹英杰丁斐张定武高捷施岚范亚平
- 关键词：SMAD信号通路肾小球系膜细胞转化生长因子Β1全反式维甲酸环氧化酶2COX-2表达
- 全反式维甲酸对环孢素诱导的肾小球系膜细胞增殖与凋亡的影响及其机制被引量：2
- 2017年
- 目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对环孢素(Cs A)诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法采用不同剂量ATRA作用于不同剂量Cs A诱导下的肾小球系膜细胞。采用MTT比色法检测细胞增殖,Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡形态,后用流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫荧光法检测线粒体促凋亡的Smac蛋白的表达。结果与对照组比较,Cs A剂量为0.5μg/m L及以上可抑制细胞増殖,Cs A剂量为1.0μg/m L及以上可诱导细胞凋亡,且Smac蛋白的表达随Cs A剂量的增加而增加,具有剂量和时间依赖的特征(均为P<0.05)。而与Cs A组比较,Cs A+ATRA处理组对细胞增殖的抑制作用更为明显,而加入ATRA可呈剂量依赖性抑制Cs A诱导的肾小球系膜细胞凋亡及Smac蛋白的表达(均为P<0.05)。结论 Cs A可抑制肾小球系膜细胞增殖,诱导其凋亡并刺激Smac蛋白的表达。ATRA可以抑制Cs A诱导的肾小球系膜细胞凋亡,且可能是通过Smac信号通路介导的。
- 陈旭吴建华郭乃凤范亚平陈晓岚
- 关键词：系膜细胞肾小球SMAC蛋白细胞增殖凋亡
- 全反式维甲酸对转化生长因子诱导的肾小球系膜细胞环氧化酶2表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:研究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)刺激系膜细胞环氧化酶2(COX-2)及Smad3,Smad7蛋白表达的影响,探讨ATRA在TGF-β/Smad信号通路中对系膜细胞表达COX-2的影响作用。方法:取培养第4代的大鼠肾小球系膜细胞分组:(1)对照组;(2)TGF-β刺激组(5、10ng/ml);(3)TGF-β+NS398[COX-2抑制剂组(10μmol/LNS398+10ng/mlTGF-β)];(4)TGF-β+Staurosporine(Smad抑制剂)组(5nmol/ml Staurosporine+10ng/mlTGF-β);(5)药物组:ATRA(10-3、10-6、10-9mol/L)组,在不同的作用时间(4h,12h,24h),WesternBlot印迹法测定各组COX-2、Smad3、Smad7蛋白的表达变化。结果:(1)在外源性TGF-β刺激下,COX-2、Smad3、Smad7蛋白的表达明显增加,各组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)加入COX-2抑制剂NS-398和Smad抑制剂Staurosporine后,COX-2、Smad3、Smad7表达均减少,与TGF-β组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)ATRA各浓度组和TGF-β组比较COX-2、Smad3、Smad7蛋白的表达明显减少(P<0.05),呈时间和浓度依赖性。(4)COX-2蛋白的表达与Smad3、Smad7蛋白的表达均呈显著正相关(r=0.978,r=0.942,P<0.05)。结论:ATRA可能通过TGF-β/Smad信号通路抑制系膜细胞COX-2的表达,显示其具有良好的抗纤维化和抗细胞增殖作用。
- 郭乃凤陈晓岚宋东庆施岚范亚平丁斐
- 关键词：转化生长因子SMAD3SMAD7系膜细胞环氧化酶2全反式维甲酸
- 全反式维甲酸对TGF-β诱导肾小球系膜细胞CTGF及信号通路的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探讨全反式维甲酸(atRA)在转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路中诱导系膜细胞表达结缔组织生长因子(CTGF)的作用。方法培养第4代大鼠肾小球系膜细胞分组:对照组;TGF-β(5、10 ng/ml)组;TGF-β+Staurosporine组;药物组:atRA(10-3、10-6、10-9mol/L)预处理24 h后,再加TGF-β(10 ng/ml)共培养。分别提取4、12、24 h细胞总蛋白,用Western blot法测CTGF蛋白和Smad2蛋白的表达。结果在外源性TGF-β刺激下,CTGF、Smad2蛋白的表达明显增加(P<0.05)。与TGF-β组比较,药物组CTGF、Smad2蛋白表达明显减少(P<0.05),呈时间和浓度依赖性;各组不同时间段内Smad2蛋白和CTGF蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论TGF-β可刺激大鼠肾小球系膜细胞CTGF和Smad2蛋白的表达,atRA可以抑制其表达,且此作用可能与Smad2信号通路有关。
- 宋东庆陈晓岚郭乃凤曹英杰丁斐范亚平
- 关键词：SMAD2结缔组织生长因子全反式维甲酸
- 全反式维甲酸对转化生长因子β诱导的肾小球系膜细胞Spl及c-met表达的影响被引量：1
- 2011年
- 肝细胞生长因子（HGF）是一种多效性的细胞因子，c-met是HGF现已知的唯一的受体，HGF与c-met结合后，发挥相应的生物学效应[1]。Spl蛋白是众多基因的基本转录因子，能与c-met基因启动子区域的多重GC盒结合，是调节肾脏细胞表达c-met的重要转录因子[2]。全反式维甲酸（ATRA）能抑制肾脏纤维化，保护肾功能。本研究探讨ATRA对肾小球系膜细胞Spl、c-met表达的影响，以进一步了解ATRA对肾脏的保护机制。
- 陈晓岚韩锦祎郭乃凤曹英杰范亚平
- 关键词：C-MET表达肾小球系膜细胞全反式维甲酸转化生长因子Β肾脏纤维化基因启动子区域
