国家科技支撑计划(2006BAD06A12)
- 作品数：53 被引量：283H指数：9
- 相关作者：贺英逯忠新高鹏程赵萍储岳峰更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所扬州大学甘肃农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家重点基础研究发展计划国家科技基础性工作专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 猪瘟病毒急性感染后病毒载量的动态分布规律研究
- 针对猪瘟病毒(CSFV)和猪看家基因(ACTB)分别设计了一对引物和一条探针,建立了一套特异强、灵敏度高的CSFV相对荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法。对CSFV SM株感染的16头60日龄长白猪体内各主要组织器官...
- 刘俊王琴范学政徐璐汤波陈蕾黄伟
- 关键词：CSFV病毒载量FQ-PCR
- 文献传递
- 复合PCR鉴定胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌方法的建立及初步应用被引量：4
- 2009年
- 在已经建立的胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件和引物的筛选,成功地建立了APP、HPS复合PCR诊断方法,利用一次PCR反应,即可同时扩增APP的442 bp,和HPS的1 090 bp的特异性片段,并应用于临床检测。该方法的建立对临床上进行这2种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测都具有重要意义。
- 贺英赵萍储岳峰高鹏程逯忠新赵海燕
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌副猪嗜血杆菌复合PCR
- 免疫组化Envision法检测肺组织中猪圆环病毒抗原的研究被引量：1
- 2009年
- 为了对猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的早期诊断、临床诊断和流行病学调查提供技术支持,本试验制备了兔抗PCV2多克隆抗体,采用免疫组织化学Envision二步法对30例疑似PCV2病猪肺组织的病毒抗原进行定位、半定量检测。结果表明,试验制备的兔抗PCV2抗体具有高纯度和良好的特异性;Envision法可原位检测病猪肺组织PCV2抗原的分布,其抗原的阳性表达主要出现在肺巨噬细胞胞浆内;依据阳性细胞百分率,进行染色结果判断,检出阳性病猪16例,阳性检出率为53.37%。实验证明Envision法具有高敏感、低背景、快速简便的特点,可在兽医病理诊断中推广应用。
- 杨鸿林涛邓桦何启盖陈冬焕马春全卢玉葵
- 关键词：ENVISION法猪圆环病毒
- 青海省部分地区猪传染性胸膜肺炎的流行病学调查研究被引量：4
- 2011年
- 通过间接血凝检测方法对青海省部分猪场的猪传染性胸膜肺炎的流行情况进行了调查研究,研究结果表明本地区总阳性率为26.13%,其中母猪阳性率偏高。
- 逯忠新贺英高鹏程储岳峰赵萍赵海燕马利青陆艳蔡其刚
- 关键词：猪传染性胸膜肺炎流行病学调查
- 建立多重PCR方法快速鉴别猪伪狂犬疫苗毒和野毒(英文)被引量：2
- 2009年
- 根据GenBank中PRV的gB、gE、Tk基因序列设计并合成引物,对样品中PRVDNA进行多重PCR扩增及反应条件优化,得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为427bp(gB)、298bp(gE)、208bp(Tk)。用这3对引物对4种伪狂犬疫苗样品DNA进行多次多重PCR扩增,其中一种疫苗得到与设计相符的1条特异性条带,其余为2条。检测结果表明,此检测方法敏感度较高,适合科学研究、临床诊断以及流行病学调查,对根除伪狂犬病具有重要作用。
- 蔺芳尹双辉尚佑军刘艳红刘湘涛
- 关键词：伪狂犬病病毒多重PCR
- 猪伪狂犬病病毒JSZ株的分离鉴定及其病毒核酸的分布规律被引量：11
- 2009年
- 用猪伪狂犬病病毒(PRV)特异性引物对江苏省某猪场疑似猪伪狂犬病的病死仔猪组织病料进行了PCR鉴定,结果可扩增到特异性的条带。用该病料接种PK-15细胞,24 h即出现细胞病变,PCR和间接免疫荧光试验结果均证明所分离病毒为PRV。用该PRV分离株接种兔后出现奇痒症状并麻痹致死;接种仔猪后出现持续发热,肌肉震颤等症状。通过对自然感染PRV病死仔猪脏器进行PCR检测,发现PRV在仔猪体内广泛分布,其中以脾的检出率最高,可达100%;对人工感染猪的直肠和鼻腔棉拭样品进行PCR检测,发现病猪排毒最长可达13 d。证实,该分离株为猪伪狂犬病强毒株,脾为病毒检测的首选靶器官。
- 郭丽静赵瑜张伟崔盟吴艳涛高崧彭大新刘秀梵
- 关键词：猪伪狂犬病病毒排毒
- 猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立被引量：6
- 2008年
- 目的建立可以同时检测猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速而可靠的PCR检测方法。方法和结果根据胸膜肺炎放线杆菌的Apx-VIA基因序列、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的16SrRNA基因序列设计5条引物。猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌模板的PCR扩增产物大小分别为342bp,485bp和1258bp。复合PCR对1～12型猪胸膜肺炎放线杆菌标准株,6株多杀性巴氏杆菌标准株,1～15型副猪嗜血杆菌以及25株经生化鉴定确认为上述三种细菌的分离株的基因组DNA作为模板进行检测,均获得预期大小的扩增产物。以猪放线杆菌、吲哚放线杆菌等14种常见细菌作为阴性对照进行PCR检测,结果仅有支气管败血波氏杆菌产生了可以和上述三个特异性条带明显区分的PCR产物。复合PCR针对胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的敏感性分别为14pg、34pg和37pg。结论本研究建立的复合PCR特异性好,敏感性高,可以用于猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速检测。
- 朱吕昌陈义平李明义郭玉广马爽周洁
- 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌多杀性巴氏杆菌副猪嗜血杆菌复合PCR
- Asia1型口蹄疫病毒受体结合位点多样性被引量：5
- 2011年
- 【目的】口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)通过结构蛋白VP1 G-H环上高度保守的精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)基序与整联蛋白结合起始病毒的感染,但FMDV是RNA病毒,在环境条件变化时,FMDV能够以非RGD的途径起始病毒的感染。为了研究FMDV Asia1/JS/China/05田间舌皮毒经两种不同的途径短期传代后细胞受体结合基序RGD的变异。【方法】采用RT-PCR方法扩增FMDV Asia1/JS/China/05田间毒、田间毒的乳鼠适应毒第四代(MF4)和接种田间毒的牛同居感染的猪水泡病料适应细胞的第八代毒(PBF8)结构蛋白VP1基因,并对不同病毒VP1基因的PCR产物测序和cDNA文库测序。【结果】以含RGD受体结合基序为优势的田间毒在乳鼠上短期传代后出现了含精氨酸-丝氨酸-天门冬氨酸(Arg-Ser-Asp,RSD)和RGD受体结合基序的混合种群,而同居感染后的细胞传代病毒种群则以含精氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸(Arg-Asp-Asp,RDD)受体结合基序为优势种群。【结论】发现了含RGD受体结合位点为优势的FMDV种群,经不同的宿主短期传代后产了含RSD或RDD受体结合基序的优势种群,该发现不仅增加了保守基序RGD发生替换的FMDV变异株的数量,而且为FMDV的细胞识别和宿主嗜性的改变等进一步研究奠定了物质基础。
- 李平花白兴文孙普卢曾军曹伟军吴润殷宏刘在新
- 关键词：口蹄疫病毒多样性
- 2株猪圆环病毒2型ORF2的克隆及序列分析
- 2008年
- 根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)的核酸序列,设计一对引物,采用PCR方法从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的死亡仔猪组织病料中扩增出ORF2基因,将其克隆到pMD18-T载体上,筛选获得重组质粒pMD18T-ORF2。序列分析表明,克隆的ORF2基因与其他PCV-2ORF2的分离株的同源性在91.5%～99.4%,与杭州分离株的同源性达到99.4%,表明我国各地区之间PCV-2的分离株存在较大的差异。
- 辜吉秀刘艳红尹双辉宋冰刘湘涛
- 关键词：猪圆环病毒2型ORF2基因克隆
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒江苏株的分离与鉴定被引量：1
- 2009年
- 从暴发猪高热病的江苏盐城地区某养殖户送检病料中分离到一株致Marc-145细胞病变的病毒,细胞培养物裂解上清经浓缩、负染后电镜观察可见直径约50 nm,有囊膜的球形病毒粒子;间接免疫荧光试验结果表明,该分离株与美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清反应发出强特异性荧光;以特异性引物对分离的病毒进行RT-PCR扩增于600 bp^700 bp出现单一条带,序列分析显示Nsp2缺失了87 bp。结果表明,该分离株为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株,暂命名为JYC。
- 刘金彪孟庆华吴艳涛高崧彭大新刘秀梵
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
