国家科技支撑计划(2006BAD06A09)
- 作品数：30 被引量：131H指数：6
- 相关作者：宋铭忻路义鑫韩彩霞林矫矫傅志强更多>>
- 相关机构：军事医学科学院东北农业大学中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 旋毛虫43ku ES抗原基因表达水平的实时荧光定量PCR检测被引量：4
- 2009年
- 根据GenBank中旋毛虫43 ku ES抗原基因(Ts43)序列设计引物和探针。以管家基因18 SrRNA为内参基因,对旋毛虫总RNA进行归一化处理,根据循环阈值(Ct值)的变化计算Ts43基因的表达量,建立检测旋毛虫Ts43表达量的实时荧光定量PCR方法,并用该方法测定旋毛虫不同寄生时期Ts43基因的表达水平。结果显示,旋毛虫Ts43基因在各寄生时期均有表达,成虫和新生幼虫Ts43基因的表达水平相对于其他寄生时期的虫体低,该基因表达量在感染后第18 d开始逐渐上升,于感染后第30 d达到高峰,而后开始逐渐下降,但感染后第58 d的虫体Ts43基因表达水平仍高于成虫和新生幼虫。结果表明,Ts43基因的表达与保姆细胞的形成有较大关系。
- 王守育路义鑫张子群韩彩霞宋铭忻
- 关键词：旋毛虫荧光定量聚合酶链式反应
- 旋毛虫实时荧光PCR检测方法的建立与应用研究被引量：8
- 2009年
- 根据旋毛虫隔离种线粒体Ls-rRNA基因序列,设计一对特异性引物及TaqMan MGB探针。以Ls-rRNA阳性重组质粒为模板,建立了旋毛虫实时荧光PCR检测方法。该检测方法对各旋毛虫隔离种具有良好的特异性,而对小鼠、狗和猪正常肌肉组织、猪鞭虫、猪蛔虫、猪钩虫、犬蛔虫等无交叉反应。最小检出量为1.32×102拷贝(10-5条旋毛虫),建立的标准曲线拟合良好,扩增方程Y=-3.43X+19.70,相关系数R2=0.9984,扩增效率为95%。平行检测组内变异系数为1.11%(n=20),同一组不同浓度梯度样本(n=9)间隔30d重复检测,结果无显著性差异。人工感染不同剂量猪旋毛虫的小鼠,在攻虫14d后检出率100%。对经压片镜检、人工胃液消化、胶体金试纸条检测结果为阴性的63份送检狗肉样本中敏感地检出8个阳性。
- 张子群谢晓峰袁金钱由轩徐义刚单琳琳宋铭忻
- 关键词：旋毛虫实时荧光PCR
- 我国狂犬病预防和控制建议被引量：33
- 2012年
- 1狂犬病及流行概况
狂犬病（Rabies）是一种由狂犬病病毒（Rabiesvirus，RABV）感染引起的高度致死性脑脊髓炎^[1]。所有种类的温血动物，不分年龄大小，均对狂犬病易感。犬的狂犬病俗称疯狗病（MadDogDisease），能使患病犬的中枢神经系统兴奋，发作时往往表现攻击行为，咬伤人或其他种类动物个体，造成犬群或犬科野生动物狂犬病的外溢，从而导致人、家畜（如牛、马、羊、猪、驴、鹿、水牛等）和其他温血动物（如猫、狐、黄鼬、鼬獾、猪獾、狼、浣熊、臭鼬、鼠等）的感染^[2-3]。
- 扈荣良张守峰刘晔
- 关键词：狂犬病病毒中枢神经系统兴奋野生动物脑脊髓炎
- 日本血吸虫Sj Cyclophilin B基因的克隆、表达及免疫保护效果分析
- 2010年
- 本研究克隆和表达了日本血吸虫Cyclophilin B(Sj CyPB)编码基因的cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。本研究以日本血吸虫童虫cDNA为模板,RT-PCR扩增其基因全长cDNA,提交序列到NCBI,登录号为GQ403665。荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,构建重组表达质粒,表达纯化重组蛋白。利用Western blotting检测重组蛋白的抗原性。以重组抗原免疫小鼠,评估其对小鼠诱导的免疫保护效果。结果表明,RT-PCR获得了Sj CyPB编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为672bp。经分析确定其为CyPs家族中的CyPB基因,命名为Sj CyPB。荧光实时定量PCR分析表明,该基因在18d童虫期表达量最高,32d次之。构建了重组表达质粒pGEX-6P-1-SjCyPB,并在大肠杆菌中成功表达,表达产物分子量为49.5kDa。Western blotting试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性,在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得31.5%的减虫率和41.01%的肝脏减卵率。本研究获得了日本血吸虫童虫期高表达的Sj CyPB基因的全长cDNA,成功构建了Sj CyPB原核重组表达质粒,并在大肠杆菌中成功表达,证实该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果。
- 彭金彪韩宏晓洪炀王艳郭凡吉石耀军傅志强刘金明程国锋林矫矫
- 关键词：日本血吸虫CYCLOPHILIN免疫保护效果
- 反向遗传学技术及其在狂犬病病毒研究中的应用被引量：2
- 2008年
- 反向遗传技术是一种新兴的分子生物学技术,已广泛应用于生命科学研究的各个领域。本文综述反向遗传学技术研究进展,并讨论该技术在狂犬病病毒(Rabiesvirus,RV)研究中的应用。
- 郑学星夏咸柱杨松涛王化磊孙培录
- 关键词：反向遗传学全长CDNA狂犬病病毒
- 旋毛虫ES抗原P49基因的体外表达分析被引量：3
- 2011年
- 目的克隆和表达旋毛虫ES抗原P49基因,并分析表达产物的免疫原性。方法以重组质粒pCDNA3.1-P49为模板,PCR扩增旋毛虫ES抗原P49基因,将扩增片段双酶切产物连接到质粒pEGFP-N1中,构建重组真核表达载体pEG-FP-N1-P49,利用脂质体法将其转染哺乳动物细胞COS-7。于转染24h后在荧光显微镜下观察发绿色荧光的转基因细胞;通过Western-blot分析证实P49基因表达产物的免疫原性。结果成功构建旋毛虫ES抗原P49基因的绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1-P49,并在COS-7细胞中表达了目的蛋白,并且表达的蛋白可被感染旋毛虫小鼠阳性血清特异地识别。结论成功获得了重组蛋白,并证实该融合蛋白具有免疫原性,其结果为研究其生物学功能奠定了基础。
- 韩彩霞路义鑫李晓云朱艳梅宋铭忻
- 关键词：旋毛虫真核表达
- 日本血吸虫Sj28GST重组抗原的摇瓶发酵条件研究被引量：2
- 2009年
- 目的探索应用重组E.coliTB1摇瓶生产日本血吸虫Sj28GST重组抗原的最适工艺条件。方法用2YT培养基进行发酵,观察培养温度、种子液接种量、诱导剂异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、IPTG诱导时间等培养条件。结果培养温度为37℃,种子液接种量为10%,转速为200 r/m in,用0.8 mmol/L IPTG在开始发酵4 h后进行诱导,为最佳发酵条件。在此条件下,振荡培养17 h后,细菌密度达到吸光度(A600)值2.5,重组日本血吸虫Sj28GST产量达到21.6mg/L发酵液。结论成功探索了日本血吸虫Sj28GST重组抗原的摇瓶发酵条件。
- 沈阳林矫矫姚利晓刘金明
- 关键词：日本血吸虫摇瓶发酵
- 狂犬病病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立与初步应用被引量：6
- 2008年
- 目的建立狂犬病病毒快速检测法。方法根据狂犬病病毒核蛋白基因的保守序列分别设计两对引物及其相应的TaqMan探针。构建pMD-N重组质粒,建立荧光定量RT-PCR绝对定量标准品,并对反应体系进行优化,建立绝对定量的标准曲线。利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并与普通RT-PCR法进行比较;作重复性和特异性检验后进行临床标本的检测。结果构建了绝对定量的参照质粒,标准曲线相关系数为0.998。狂犬病病毒荧光定量RT-PCR检测反应的灵敏度为10个TCID_(50);5种非狂犬病病原体检测均为阴性。结论建立的狂犬病病毒的荧光定量RT- PCR检测方法快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好,可以应用于临床样品的检测。
- 郑学星杨松涛侯小强王化磊孙培录刘林立夏咸柱
- 关键词：狂犬病病毒
- 旋毛虫53ku ES重组蛋白单克隆抗体的制备及其免疫金标试纸条的研制
- 为建立一种简易、快速检测动物血清中的旋毛虫排泄分泌(Excretory-secretory,ES)抗原的胶体金免疫层析试纸法。选用旋毛虫53 ku ES重组蛋白免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体(MA...
- 路义鑫韩彩霞张子群李晓云谢晓峰赵黎黎扈炳新宋铭忻
- 关键词：旋毛虫单克隆抗体胶体金
- 本地毛形线虫49ku ES重组蛋白诱发小鼠保护性免疫的研究被引量：1
- 2008年
- 目的研究本地毛形线虫肌幼虫49ku ES重组蛋白对小鼠的免疫保护作用。方法以表达的本地毛形线虫肌幼虫49ku ES重组蛋白免疫小鼠,共免疫3次。末次免疫后10d,每只小鼠攻击感染200条本地毛形线虫感染性肌幼虫,检测本地毛形线虫7日龄成虫数、雌虫体外产新生幼虫数以及感染35d肌幼虫数,并且计算减虫率,应用自制的ELISA方法测定各组小鼠血清抗体OD值。结果成虫减虫率、新生幼虫减虫率、肌幼虫减虫率分别为9.4%、70.2%和71.3%,免疫组血清抗体水平远远高于佐剂对照组和感染对照组(P<0.01)。结论本地毛形线虫肌幼虫49ku ES重组蛋白诱导小鼠产生较好的抗本地毛形线虫的保护性免疫。
- 韩周姜曰晓李继红肖文左宋铭忻路义鑫
- 关键词：本地毛形线虫KU保护性免疫
