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拟南芥RNA加工因子的开花调控机制被引量：1: 2013年; 开花调控是植物生长发育中很重要的过程。拟南芥分子遗传学分析表明,MADS-box转录因子FLC、RNA结合蛋白(FCA、FPA和FLK)和mRNA3′端加工因子(FY)都参与了这一过程。开花因子通过抑制FLC表达来促使植物开花;RNA结合蛋白通过转录后调控来调节FLC的表达以调控拟南芥开花。此外,microRNAs也参与这一过程。本文通过综述上述几个相关因子的调控过程,来阐述RNA加工因子参与的拟南芥开花调控机理。; 邹晨辉汤青林宋明王志敏; 关键词：拟南芥开花时间 RNA结合蛋白 MICRORNAS

芥菜开花整合子SOC1与AGL24蛋白K结构域的互作位点鉴定被引量：1: 2015年; 芥菜开花整合子SOC1与AGL24相互作用能够调节开花时间。为了深入研究SOC1与AGL24蛋白互作的分子机理,利用ISIS系统在线预测了SOC1/AGL24互作位点,并分别在MIKC型蛋白SOC1和AGL24的K域构建了5个SOC1突变体和3个AGL24突变体。酵母双杂交和β–半乳糖苷酶活性检测表明:突变体AGL24^(R137L)和AGL24^(E169L)能够与SOC1蛋白互作,但作用强度与SOC1/AGL24差异不显著;然而AGL24蛋白第107位的谷氨酰胺突变为亮氨酸后(AGL24^(Q107L)),则与SOC1的作用消失。说明SOC1/AGL24的作用强度能够被AGL24蛋白K域第107位调节,但可能不受第137和169位调控。进一步研究发现:SOC1^(V77K)、SOC1^(P81K)、SOC1^(K108V)、SOC1^(R109L)和SOC1^(C137K)突变体均能与AGL24相互作用;但SOC1^(V77K)、SOC1^(P81K)、SOC1^(K108V)和SOC1^(R109L)突变体与AGL24的作用强度均显著低于SOC1/AGL24,而SOC1^(C137K)突变体与AGL24的作用显著高于SOC1/AGL24。说明SOC1/AGL24的作用强度能够被SOC1蛋白K域第77、81、108、109位负调控或者第137位正调控。这为利用氨基酸位点调节SOC1/AGL24的深入研究及其开花时间分子调控奠定了基础。; 谢婷谷慧英江为马关鹏陈娇王志敏宋明汤青林; 关键词：芥菜酵母双杂交

芥菜开花整合子SOC1启动子的克隆及其与FLC、SVP蛋白互作的研究被引量：3: 2015年; 为了深入研究芥菜开花整合子SOC1基因的表达调控机制,利用染色体步移法从芥菜‘QJ’中克隆了SOC1编码区上游782 bp的启动子,并构建SOC1基因启动子的酵母表达载体p Ab Ai-SOC1,与蛋白表达载体p GADT7-FLC、p GADT7-SVP共转化酵母Y1HGold菌株。酵母单杂交表明:芥菜FLC和SVP蛋白均能与SOC1的启动子相互作用。进一步分析发现:SOC1启动子含3个CAr G-box表达调控基序。分别亚克隆这3个基因片段(SOC1-1、SOC1-2和SOC1-3),并再次构建酵母重组质粒p Ab Ai-SOC1-1、pA b Ai-SOC1-2和p Ab Ai-SOC1-3,与p GADT7-FLC、p GADT7-SVP分别融合到Y1HGold菌株。融合菌株均能在相应SD/-Leu/Ab A培养基上生长,说明SOC1-1、SOC1-2和SOC1-3都能被芥菜FLC、SVP蛋白识别并结合。再次构建SOC1-1、SOC1-2、SOC1-3的CAr G-box删除突变体及A-T互换突变体,则均不能与FLC、SVP蛋白互作。由此说明:SOC1-1、SOC1-2和SOC1-3的3个CAr G-box基序确实能特异性识别FLC、SVP,发生DNA—蛋白相互作用。这为利用启动子调控SOC1基因的转录表达等深入研究奠定了理论基础。; 陈娇赵夏云鲜登宇马关鹏谢婷王志敏宋明汤青林; 关键词：芥菜 FLC SVP

芥菜AGL18家族成员与开花整合子SOC1的互作分析被引量：5: 2017年; 为阐明芥菜开花抑制因子AGL18与开花整合子SOC1间的互作调控机制,在芥菜‘QJ’的开花期克隆了AGL18-1,幼苗期克隆了AGL18-2和AGL18-3,它们分别编码257、257和258个氨基酸,为AGL18家族的3个成员。序列比对表明,芥菜AGL18家族成员与十字花科芜菁和油菜同源性均高达90%。酵母双杂交和BiFC试验表明:芥菜AGL18-1、AGL18-2和AGL18-3蛋白与SOC1不会发生蛋白相互作用。酵母单杂交和Dual-Glo~ Luciferase试验表明:AGL18-1、AGL18-2和AGL18-3中仅有花期AGL18-1蛋白与SOC1启动子间存在互作。为进一步筛选AGL18-1/SOC1的互作区域,分别截取了AGL18-1蛋白的M域和IKC域,发现仅M域与SOC1启动子存在相互作用,说明M域是介导花期AGL18-1蛋白与SOC1启动子互作的关键区域。这为深入研究AGL18与SOC1互作的分子机制及其对开花时间的调控奠定了基础。; 李朝闯马关鹏谢婷陈娇王志敏宋明汤青林; 关键词：芥菜相互作用

芥菜开花调控蛋白SVP与FLC酵母表达载体的构建及其相互作用研究被引量：14: 2012年; 为深入研究芥菜开花信号整合子的两个核心调节因子SHORT VEGETATIVE PHASE(SVP)与FLOWERING LOCUS C(FLC)相互作用的分子机理,通过PCR扩增,从芥菜材料‘QJ’中分别克隆含EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切位点的SVP和FLC编码区全长,并利用酵母双杂交体系,将FLC与GAL4报告基因DNA激活域融合(pGADT7FLC),SVP与GAL4报告基因DNA结合域融合(pGBKT7SVP)。两种重组质粒分别转化酵母Y187和Y2HGold后未出现自激活和毒性现象。融合的二倍体酵母(pGADT7FLC×pGBKT7SVP)能在选择性固体培养基QDO/X/A(SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal/AbA)上生长,并且菌落呈蓝色。将诱饵质粒(pGBKT7SVP)与猎物质粒(pGADT7FLC)载体互换(pGADT7SVP、pGBKT7FLC),再次转化酵母后仍能融合成二倍体酵母(pGADT7SVP×pGBKT7FLC),并同时激活报告基因AUR1-C、HIS3、ADE2、MEL1,由此表明SVP与FLC蛋白能够相互结合。; 汤青林李念祖丁宁陈竹睿宋明王志敏; 关键词：芥菜 SVP FLC 酵母双杂交

甘蓝抽薹开花抑制因子FLC与SVP体外表达及相互作用被引量：7: 2013年; 甘蓝抽薹开花抑制因子FLC与SVP可能存在相互作用,从而调节开花时间。为进一步的验证该相互作用,以甘蓝‘ZQ’为材料,扩增了594 bp的FLC cDNA和726 bp的SVP cDNA序列,它们分别编码197和241个氨基酸,且均属MIKC型蛋白。NCBI比对发现FLC与BoFLC3同源性高达98%,SVP与BoSVP-a同源性高达99%。将甘蓝FLC和SVP分别与原核表达载体pET43.1a融合,构建重组质粒pET43.1a-FLC、pET43.1a-SVP,并转化宿主菌大肠杆菌BL21,均能够在体外表达目的蛋白。利用免疫共沉淀的原理及pET43.1a-FLC、pET43.1a-SVP融合蛋白序列中的6×His标签能与Ni+结合的特点,结合SDSPAGE,检测到体外表达蛋白FLC与SVP能相互作用并形成复合体,这为深入研究FLC与SVP互作机理及探讨其与抽薹开花因子的相互作用提供了理论依据和技术基础。; 杨朴丽张丹华刘智宇许俊强王志敏汤青林宋明; 关键词：甘蓝 FLC SVP 体外表达蛋白质相互作用

芥菜开花相关基因AGL24的表达及与SOC1、SVP和FLC蛋白的互作被引量：3: 2014年; 为阐明芥菜(Brassica juncea Coss.)开花激活因子AGL24的表达特性及其在开花途径中与调节因子SOC1、SVP和FLC蛋白的互作机制,从‘青叶芥’中克隆了680 bp的AGL24基因,它编码221个氨基酸。序列分析表明:芥菜AGL24含有M、I、K和C域,分别有59、11、102和47个氨基酸,与油菜AGL24亲缘关系较近。荧光定量PCR分析发现:在低温春化途径和长日照光周期途径中,AGL24在叶片和茎尖中均有表达,营养生长期表达量较低,而生殖生长期表达量迅速增加;AGL24在光周期途径中的表达峰值要早于低温春化途径。酵母双杂交试验表明:全长AGL24与开花信号整合子SOC1蛋白能够互作,激活酵母报告基因AUR1-C、HIS3、ADE2和MEL1,在QDO/X-α-Gal/AbA平板培养基上长出蓝斑。另外,分别去掉M域后的截短体AGL24★与SOC1★也能相互作用。β–半乳糖苷酶活性检测发现:截短体杂交组合AGL24★×SOC1★的互作强度显著高于全长杂交组合AGL24×SOC1。然而全长AGL24或截短体AGL24★均不能与光周期途径核心抑制子SVP互作,也不与低温春化途径核心抑制因子FLC相互作用,说明AGL24并不是SVP或FLC的直接靶蛋白。; 江为杨修勤谷慧英鲜登宇赵夏云王志敏宋明汤青林; 关键词：芥菜酵母双杂交

结球甘蓝花粉类钙调素蛋白基因BoCML49的克隆及表达分析被引量：12: 2012年; 以结球甘蓝E1为材料,提取花粉萌发前和萌发后的混合花粉总蛋白,总蛋白双向电泳后通过MALDI-TOF-MS鉴定分析差异点,根据差异点分析结果,利用同源克隆得到甘蓝BoCML49基因707bp的cDNA片段。通过对BoCML49基因的qPCR分析表明其表达量在花粉萌发前约为萌发后的2.73倍,表明BoCML49基因在花粉萌发后表达下调。通过5-Race和3-Race分别得到550bp和721bp大小cDNA片段,最终得到结球甘蓝BoCML49全长cDNA序列,开放阅读框位于125~1078bp处,加尾信号（AATAAA）位于第1222bp处。通过cDNA推导得到的氨基酸序列分析表明,BoCML49编码317个氨基酸残基,预测分子量为33.51kD,pI为6.93,经Smart-embl预测其含2个重要的EF-hand结构,分别位于序列第150~178和第216~244位氨基酸残基处,预测结果显示其含有7个α-螺旋和10个β-折叠结构。系统发育树表明结球甘蓝BoCML49与拟南芥AtCML49和AtCML50的亲缘关系较近。BoCML49基因的原核表达得到37.55kD的融合蛋白。; 宋明许俊强孙梓健汤青林王志敏王小佳; 关键词：结球甘蓝花粉

结球甘蓝雌蕊发育调控因子SPT与HEC1的基因克隆及相互作用: 2014年; 为研究SPT和HEC及其相互作用对甘蓝雌蕊发育的影响,以结球甘蓝自交不亲和系E1为材料,提取雌蕊总RNA,根据拟南芥中SPT和HEC1基因设计引物,采用同源克隆方法克隆SPT基因,其序列1085 bp,开放阅读框(ORF)1062 bp;HEC1基因ORF 696 bp。通过cDNA推导得到的氨基酸序列表明,SPT编码353个氨基酸残基,预测分子量为37.67 kD,pI为6.83;HEC1编码231个氨基酸残基,预测分子量为25.26 kD,pI为10.2。两基因在各器官中均表达,但SPT在果实和雌蕊中表达量最高,而HEC1在根和花蕾中的表达量最高。为检测两者的相互作用,构建原核表达质粒pCold I-SPT和pGEX-HEC1,pull-down试验表明两蛋白能够在体外相互作用。同时构建pGBKT7-SPT、pGADT7-HEC1及互换载体pGBKT7-HEC1和pGADT7-SPT酵母表达载体,分别转化酵母Y2HGold和Y187感受态细胞后均未出现自激活和毒性现象,融合后的二倍体酵母均能在SD/–Trp–Leu–Ade–His/X-α-gal/AbA板上长出蓝色菌斑,表明SPT和HEC1能够相互作用激活下游的HIS3、AUR1-C、MEL1和ADE2报告基因,酵母双杂交试验结果与Pull-down检测一致,说明SPT和HEC1能够相互作用以调控雌蕊的发育。; 许俊强孙梓健刘智宇杨朴丽汤青林王志敏宋明王小佳; 关键词：结球甘蓝雌蕊 SPT 相互作用酵母双杂交

MIKC型MADS-box蛋白对开花调控作用研究进展被引量：6: 2014年; MIKC型蛋白是植物中特有的一类MADS-box转录因子,具有一个独特的结构域。除了高度保守的MADS域外,还包括3个其他的域(I、K和C)。植物进化过程中,MIKC型蛋白的数量和功能多样化不断增加,在高等开花植物中达到顶峰。它们在花发育的不同阶段发挥了重要的调控作用。综述了植物MIKC型MADS蛋白的分类及结构,与DNA的相互作用,蛋白之间相互作用及其分子机制,并对MIKC型蛋白的深入研究进行了展望。; 赵夏云鲜登宇宋明汤青林; 关键词：相互作用转录因子

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