国家自然科学基金(30170914)
- 作品数：7 被引量：17H指数：2
- 相关作者：田大力黄波郑毛根杨春鹿高英更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第四医院中国医科大学附属第一医院中国医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目辽宁省教育厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小细胞肺癌相关基因片段验证及RACE扩增被引量：2
- 2008年
- 目的:在前期实验获得的小细胞肺癌相关基因片段C1、L1和L2基础上分别进行这三种基因的验证及RACE扩增。方法:根据小细胞肺癌相关基因片段C1、L1和L2的已知序列,设计3对引物,提取小细胞肺癌细胞株(NCI-H446)的RNA并行RT-PCR。在获得的阳性片段的基础上进行RACE扩增并测序,将测序结果与Genbank序列进行对比。结果:小细胞肺癌相关基因片段C1、L1和L2中只有L2扩出目的大小片段,将其进行RACE扩增后与Genbank序列进行对比其序列与ABCE1的序列基本一致。结论:通过小细胞肺癌RT-PCR及RACE扩增得到ABCE1基因,该基因与小细胞肺癌存在一定关系。
- 黄波田大力郑毛根
- 关键词：基因核酸扩增技术
- 肺癌转移相关基因C_1、L_1、L_2片断的验证及全长序列的克隆
- 2007年
- 目的对肺癌转移相关基因C_1,L_1,L_2片断(已知序列)进行验证,并克隆其基因全长。方法应用PCR及快速扩增cDNA末端(RACE)技术,在小细胞肺癌细胞株(NCI-H446细胞)和肺腺癌细胞株(95-D细胞)中对肺癌转移相关基因C_1、L_1、L_2片断进行验证并克隆出其全长序列,登录基因库。结果在NCI-H446细胞和95-D细胞中未得到C_1和L_1目的片段,只得到L_2目的片段。从这两种细胞株中均钓取到L_2基因的3′端部分未知序列1 169 bp;从NCI-H446细胞、95-D细胞中分别钓取得到L_2基因的5′端未知序列178bp和145bp。L_2基因序列与已知的ABCE1基因序列同源性为100%。结论L_2基因即为已知ABCE1基因,可能参与肺癌转移的相关调节。
- 郑毛根田大力黄波
- 关键词：肺肿瘤肺癌转移相关基因
- RNA干扰ABCE1基因后可抑制肺癌95-D/NCI-H446细胞的增殖和诱导细胞凋亡(英文)被引量：13
- 2009年
- ABCE1作为RNase L抑制剂首先是在脊椎动物中被发现的.前期研究结果显示ABCE1与肺腺癌的发生率及临床分期显著相关.为了进一步研究ABCE1的新功能,构建了ABCE1基因的siRNA表达质粒(RNAi-Ready pSIREN-DNR-DsRed-Express vector),培养肺癌细胞(95-D和NCI-H446),用FuGENE6作为转染试剂转染后,使用荧光显微镜观察转染效果,RT-PCR分析ABCE1基因表达,Westernblot分析ABCE1蛋白的表达,MTT法检测细胞的活性,流式细胞仪分析细胞周期,ELISA法检测细胞凋亡.结果显示:质粒的转染效果较满意,阳性率约为42.70%;在实验组,细胞活性和生长指数明显受到抑制,细胞凋亡明显增加,与对照组比较差异显著(P<0.05).上述结果显示,RNA干扰ABCE1基因可显著抑制肺癌细胞(95-D/NCI-H446)RNA的转录、蛋白质的表达,并增加细胞凋亡,为进一步研究ABCE1基因提供必要的基础.
- 郑毛根高英黄波田大力杨春鹿
- 关键词：凋亡肺癌细胞增殖RNA干扰
- ABCE1基因pEGFP重组表达载体构建及转染小细胞肺癌细胞
- 2009年
- 目的:构建ABCE1基因的pEGFP重组表达载体pEGFP-C1-ABCE1,并将其转染至小细胞肺癌细胞(NCI-H446),观察其表达,并检测转染前后细胞增殖情况。方法:RT-PCR扩增ABCE1基因cDNA,酶切后和携带绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-C1重组获得重组表达载体pEGFP-C1-ABCE1。经酶切,电泳,DNA测序鉴定后应用Fugene-HD将重组表达载体pEGFP-C1-ABCE1及空载体pEGFP-C1分别转染NCI-H446细胞,观察pEGFP-C1-ABCE1和pEGFP-C1在小细胞肺癌细胞的表达,MTT法检测转染ABCE1基因对小细胞肺癌细胞增殖的影响。结果:ABCE1基因cDNA片段成功重组到pEGFP-C1载体中。经酶切和DNA测序验证,插入载体的cDNA片段为ABCE1基因。荧光显微镜观察转染pEGFP-C1-ABCE1的NCI-H446细胞绿色荧光蛋白主要在胞浆表达而转染pEGFP-C1的NCI-H446细胞绿色荧光蛋白在胞浆及胞核均有表达。MTT实验提示转染pEGFP-C1-ABCE1的细胞与转染pEGFP-C1和未转染的同类细胞相比增殖能力明显增加。结论:成功构建了pEGFP-C1-ABCE1真核细胞重组表达载体,并将该载体转染入小细胞肺癌细胞,该载体的绿色荧光主要在NCI-H446细胞胞质表达,提示ABCE1基因可能主要在胞质表达。该基因与小细胞肺癌的增殖活性有关。
- 黄波田大力杨春鹿
- 关键词：小细胞肺癌绿色荧光蛋白
- 以mRNA差异显示方法克隆与鉴定小细胞肺癌新的相关基因cDNA片段被引量：1
- 2003年
- 杨春鹿田大力李进东李厚文富伟能
- 关键词：克隆小细胞肺癌相关基因CDNA片段
- 非小细胞肺癌组织中angiostatin与VEGF mRNA的转录表达及临床病理意义
- 2008年
- 目的探讨血管抑素(AS)与血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)发展过程中的作用及意义。方法采用RT-PCR方法检测48例NSCLC癌组织及癌旁肺组织中AS和VEGF mRNA的转录表达,探讨其表达水平与NSCLC临床病理特征的关系。结果AS和VEGF mRNA在肺癌组织中的表达均高于癌旁肺组织(P<0.05)。AS mRNA的表达与NSCLC的淋巴结转移及临床分期呈负相关(P<0.05)。VEGF mRNA的表达与NSCLC淋巴结转移及临床分期呈正相关(P<0.01),与组织分化程度呈负相关(P<0.05)。AS与VEGF间的表达无相关性(P>0.05)。结论NSCLC中AS和VEGF mRNA转录水平的增高,可以反映肺癌的恶性程度及癌细胞的侵袭转移能力,与NSCLC的发生及进展过程相关。
- 高英郝利铭张玲王睿田大力
- 关键词：血管抑素临床病理
- ABCE1基因siRNA表达质粒的构建及鉴定被引量：7
- 2007年
- 目的:构建针对人ABCE1基因siRNA表达质粒,为进一步研究该基因功能奠定基础。方法:合成含靶向ABCE1基因siRNA转录模板的茎环结构,与两端分别有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点的RNAi-Ready pSIREN-DNR-DsRed-Express质粒连接,大肠杆菌中扩增,测序鉴定。结果:转化大肠杆菌涂布平板长出阳性菌落,重组质粒电泳初步说明质粒构建成功,测序结果表明RNAi-Ready pSIREN-DNR-DsRed-Express的酶切位点BamHⅠ、HindⅢ之间有71bp的插入片段,其序列与所设计、合成的ABCE1的siRNA转录模板序列一致。结论:siRNA转录模板完整正确地插入RNAi-Ready pSIREN-DNR-DsRed-Express质粒中。
- 郑毛根田大力黄波
- 关键词：SIRNA质粒
