国家质检总局科技计划项目(2009IK184)
- 作品数：6 被引量：29H指数：5
- 相关作者：曾静张西萌张海予张蕾魏海燕更多>>
- 相关机构：北京农学院北京出入境检验检疫局北京大学更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家质检公益性行业科研专项公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程生物学更多>>
- 海产品中霍乱弧菌免疫磁分离和环介导等温扩增快速检测方法的建立被引量：5
- 2015年
- 目的:采用纳米免疫磁珠分离霍乱弧菌,建立霍乱弧菌环介导等温扩增检测方法,以缩短检测时间。方法:采用本实验室制备的霍乱弧菌单克隆抗体制备纳米免疫磁珠,特异性吸附霍乱弧菌,结合环介导等温扩增技术,建立霍乱弧菌快速检测方法。结果:霍乱弧菌纳米免疫磁珠在菌体浓度103CFU/m L水平,对霍乱弧菌的捕获率最高达70%。免疫磁分离结合环介导等温扩增技术,在纯培养、无需增菌的情况下,检测灵敏度达到4.8×102CFU/m L菌液。通过测试102株霍乱弧菌和101株非目标菌,该检测方法均具有良好的特异性。在食品基质添加试验中,其检测限为1 CFU/25g样品,增菌时间缩短到8 h。结论:霍乱弧菌免疫纳米磁珠结合环介导等温扩增技术缩短了增菌时间。目标菌纯培养、无需增菌条件下,检测灵敏度达到4.8×102CFU/m L增菌液。人工添加样品,8 h增菌条件下,检测低限达到1 CFU/25 g样品。
- 程晋霞曾静张西萌张蕾刘莉张海予
- 关键词：霍乱弧菌环介导等温扩增
- 海产品中副溶血性弧菌免疫磁分离和环介导等温扩增快速检测方法的建立被引量：5
- 2013年
- 目的采用纳米免疫磁珠分离副溶血性弧菌,建立副溶血性弧菌环介导等温扩增检测方法。方法采用副溶血性弧菌单克隆抗体,制备纳米免疫磁珠,特异性吸附副溶血性弧菌,结合环介导等温扩增技术,建立副溶血性弧菌快速检测方法。结果副溶血性弧菌纳米免疫磁珠在菌体浓度为103cfu/ml水平时,对副溶血性弧菌的捕获率达到74%。免疫磁分离结合环介导等温扩增技术,在纯培养、无需增菌情况下,检测灵敏度达到140 cfu/ml增菌液;通过对134株副溶血性弧菌和74株非目标菌的测试,环介导等温扩增技术具有良好的特异性;食品基质添加试验中,在增菌时间缩短至8 h的条件下,其检测限为2 cfu/25 g样品。结论副溶血性弧菌免疫纳米磁珠结合环介导等温扩增技术,有效缩短了增菌时间,适用于副溶血性弧菌的快速检测。
- 张蕾张海予曾静程晋霞魏海燕张西萌马丹
- 关键词：副溶血性弧菌海产品环介导等温扩增食源性致病菌
- 海产品中霍乱弧菌免疫磁分离和实时荧光PCR快速检测方法的建立被引量：6
- 2014年
- 目的 采用纳米免疫磁珠（Nano-IMS）分离霍乱弧菌,建立霍乱弧菌实时荧光PCR（Real-time PCR）检测方法.方法 采用霍乱弧菌单克隆抗体,制备霍乱弧菌纳米免疫磁珠（Nano-IMB-Vc）,特异性吸附霍乱弧菌,结合Real-time PCR技术,建立霍乱弧菌快速检测方法.选用15株典型菌株,对Nano-IMB-Vc捕获特异性进行验证;选取102株霍乱弧菌和101株非目标菌,对所建立的Real-time PCR方法进行特异性验证;采用纯菌的灵敏度检测和基质添加实验对所建立方法的灵敏度进行检测,并与食品中霍乱弧菌的检测方法（NMKL No.156）进行比较.结果 Nano-IMB-Vc在菌体浓度为103 CFU/ml水平,对霍乱弧菌的捕获率最高可达70.2％.Nano-IMB-Vc分离结合Real-time PCR技术,在纯培养、无需增菌情况下,检测灵敏度达到5.4×102 CFU/ml;通过102株霍乱弧菌和101株非目标菌的测试,102株霍乱弧菌检测结果均为阳性,其余101株非目标菌检测结果均为阴性,无交叉反应.采用Nano-IMB-Vc分离结合Real-time PCR技术,在食品基质添加试验中,每25 g样品中添加1CFU霍乱弧菌,增菌8h即可检出.结论 Nano-IMB-Vc分离结合Real-time PCR技术,具有良好的特异性,较高的检测灵敏度,适用于霍乱弧菌的快速筛选.
- 程晋霞曾静刘莉魏海燕赵晓娟张西萌张蕾张海予
- 关键词：聚合酶链反应
- 纳米免疫磁分离-实时荧光聚合酶链式反应快速检测海产品中副溶血性弧菌被引量：8
- 2014年
- 采用副溶血性弧菌单克隆抗体、纳米免疫磁分离技术,结合实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,建立海产品中副溶血性弧菌纳米免疫磁分离-实时荧光PCR检测方法。副溶血性弧菌纳米免疫磁珠在菌体浓度为103 CFU/mL水平时,对副溶血性弧菌的捕获率达到74%。在纯培养、无需增菌情况下,该方法检测灵敏度达到140 CFU/mL;通过134株副溶血性弧菌和74株非目标菌的测试,实时荧光PCR技术具有良好的特异性;在食品基质添加实验中,其检测限为2 CFU/25 g样品,增菌时间缩短到8 h。
- 张蕾曾静魏海燕马丹程晋霞张西萌张海予
- 关键词：副溶血性弧菌
- 副溶血性弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及其活性分析被引量：9
- 2013年
- 目的制备副溶血性弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体(mAb)并建立双抗夹心ELISA。方法采用差速离心法提取副溶血性弧菌ATCC 17802菌株的鞭毛蛋白,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠,抗血清效价达到1∶32 000时,取脾细胞与生长良好的对数期Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。多次克隆化培养后获得杂交瘤细胞株并制备腹水,纯化后得到抗体。结果获得6株持续、稳定分泌抗副溶血性弧菌鞭毛蛋白mAb的杂交瘤细胞株,命名为VpNo.1～VpNo.6,抗体效价高达1∶2×106。对抗体进行了Ig类和亚类检测以及Western blot法鉴定,其Ig亚类依次为IgG1、IgG1、IgM、IgG1、IgG2a和IgM。SDS-PAGE结果显示,提取出的鞭毛蛋白相对分子质量(Mr)为42 000并且纯度较高。采用VpNo.6抗体建立了副溶血性弧菌双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到103CFU/mL菌液,通过采用134株副溶血性弧菌和74株非副溶血性弧菌进行特异性实验,结果表明134株副溶血性弧菌呈阳性反应,74株非副溶血性弧菌呈阴性反应,VpNo.6抗体具有非常好的特异性。在基质添加试验中,最低检出限为21 CFU/g样品。结论成功制备了副溶血性弧菌鞭毛蛋白mAb,并将其应用于双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到1×103CFU/mL菌液,与所测试的非副溶血性弧菌没有交叉反应。
- 张蕾张西萌张海予魏海燕马丹刘雪松曹栋曾静
- 关键词：副溶血性弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体
- 抗多菌灵单克隆抗体的制备、纯化及初步鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的:制备抗多菌灵小鼠单克隆抗体(mAb),并初步鉴定其特性,为快速检测蘑菇、干菇类中残留的多菌灵提供基础。方法:将小分子的多菌灵交联在大分子载体匙孔嘁血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)上,KLH交联物用于免疫BALB/c小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,通过融合,筛选制备抗多菌灵mAb,并通过ELISA方法测定抗体亲和力,检测mAb的交叉反应,及初步竞争抑制检测。结果:通过ELISA筛选出7株稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,其亚型均为IgG1。与同属于苯并咪唑类杀菌剂的苯菌灵和甲基硫菌灵没有交叉反应。竞争抑制检测结果显示MC-3细胞株竞争效果较好。结论:获得1株高特异性、高亲和力、能稳定分泌抗多菌灵抗体的杂交瘤细胞株,为进一步研发多菌灵残留免疫检测技术和产品奠定基础。
- 王金花奇日迈励图张蓉曾静
- 关键词：多菌灵杂交瘤单克隆抗体
