广东省自然科学基金(S2011040003476)
- 作品数：6 被引量：12H指数：3
- 相关作者：何本夫周思朗朱成全钟文刘英更多>>
- 相关机构：解放军第四二一医院南方医科大学南方医院解放军第421医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金南方医科大学南方医院院长基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 建立慢病毒介导的miR-145稳定过表达的鼻咽癌细胞株
- 2012年
- 目的构建过表达miR-145的慢病毒载体,建立稳定过表达miR-145的鼻咽癌细胞株。方法构建慢病毒表达质粒pLVTHM/miR-145;293FT细胞进行慢病毒包装,生产的慢病毒感染鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2,经流式细胞仪筛选后,建立稳定表达miR-145的鼻咽癌细胞株;最后应用荧光定量PCR检测病毒感染后鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2中miR-145的表达水平。结果荧光定量PCR结果和测序验证pLVTHM/miR-145重组质粒构建成功;包装生产的慢病毒感染鼻咽癌细胞CNE1和CNE2后,与阴性对照组比较,其表达水平分别升高4000倍和4500倍。结论成功构建了pLVTHM/miR-145慢病毒重组质粒,建立稳定表达miR-145的鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2,为研究miR-145在鼻咽癌发生发展过程中的基因调控和相应的作用机制提供了有用的细胞模型。
- 苏艳王硕刘英文军张余琴陈佩娟
- 关键词：慢病毒鼻咽癌细胞MIR-145
- 阿西替尼联合5-FU对移植人肠癌细胞的裸鼠的治疗作用被引量：3
- 2012年
- 目的探讨阿西替尼联合5-FU对肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其毒性作用。方法肠癌LoVo细胞移植瘤裸鼠随机分为5组:空白对照组、溶剂对照组、阿西替尼组、5-FU组和联合用药组,分别给予处理。观察各组裸鼠肿瘤大体形态,并测定裸鼠体质量、肿瘤大小及计算瘤质量、完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、T(2治疗后肿瘤增长至治疗前瘤体积2倍所需的时间)和肿瘤生长延迟时间(TGD),记录动物死亡率。结果联合用药组疗效优于阿西替尼及5-FU单药组。治疗后第30天联合用药组瘤质量小于对照组及阿西替尼和5-FU单药组(P<0.01)。联合用药组T(229.05 d)长于阿西替尼(19.31 d)和5-FU组(21.22 d)。联合用药组的TGD达16.73 d,较阿西替尼单药组和5-FU单药组的8.53 d和9.72 d,明显延长。除了空白对照组没有裸鼠死亡之外,其余4组均有1只死亡,死亡率未超过20%。此外,各组裸鼠的体质量下降也均未超过20%。阿西替尼组及联合组中各有1例获得部分缓解(PR)。阿西替尼组及联合用药组的瘤组织ABCG2蛋白水平较对照组表达显著下降(P<0.05),而5-FU组的ABCG2表达水平则较对照组无显著差异(P>0.05)。结论在人肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤模型中,阿西替尼和5-FU单药均能抑制肿瘤生长,两者联合使用显示出更强的抗肿瘤作用。两药剂量范围内的联合具有较佳的耐受性和安全性。
- 赵佳招婷谢锋伟何本夫
- 关键词：5-FU肠癌
- miR-143在鼻咽癌细胞系中的表达及其对高转移细胞株5-8F的影响
- 2013年
- 目的检测鼻咽癌细胞系中miR-143表达情况,建立稳定高表达miR-143的鼻咽癌细胞系,为研究其在鼻咽癌的发生和发展中的作用机制提供可靠的细胞模型。方法采用QPCR方法检测鼻咽癌细胞系CEN1、CNE2、HONE1、5-8F、6-10B及人永生化鼻咽上皮细胞NP69中miR-143的表达水平。构建重组逆转录病毒质粒pMSCV-puro-miR-143,包装逆转录病毒pMSCV-miR-143和pMSCV-Vector并感染鼻咽癌细胞,建立稳定高表达miR-143的鼻咽癌细胞系,并应用细胞黏附实验检测过表达mir-143后,鼻咽癌细胞对胞外基质的黏附性。结果鼻咽癌细胞系中miR-143的表达水平均低于对照组NP69细胞,其中高转移潜能细胞株5-8F的表达量最低,仅为对照组的3.03%,成瘤但不转移细胞株6-10B表达量最高,为对照组的63.59%。实时荧光定量PCR显示筛选后第7代细胞miR-143的表达水平比对照组高出达1080倍(P<0.05)。细胞黏附实验结果显示,过表达mir-143可降低5-8F细胞对胞外基质的黏附性。结论 miR-143在鼻咽癌细胞系中表达失常,其作用可能与鼻咽癌细胞的侵袭和转移相关;成功建立了稳定高表达miR-143的鼻咽癌细胞系,并初步确定miR-143能抑制5-8F细胞的黏附能力,为探索miR-143在鼻咽癌的发生和发展中的作用机制奠定了实验基础。
- 钟文何本夫全天一朱成全周思朗陈永乐
- 关键词：MIR-143鼻咽癌逆转录病毒稳定细胞系
- 微小RNA与胎儿异常发育的研究进展
- 2012年
- 微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长度为22～28个核苷酸的非编码小分子RNA,它们通过与靶mRNA结合,导致靶mRNA降解或翻译抑制,从而在转录后水平调控蛋白表达。miRNA对胚胎细胞增殖、形态发生、分化和凋亡有重要的调节作用,参与胎儿疾病的发生和病理生理过程,在发育异常的胎儿中已发现各种miRNA表达异常。目前可通过检测妊娠母亲外周血miRNA水平来预测胎儿疾病,并在动物实验中成功干预miRNA异常,相信未来miRNA在胎儿疾病的诊断及治疗上将起更重要的作用。
- 毕广良刘英
- 关键词：微小RNA胎儿异常发育
- MiR-143通过负调控GLI3基因来抑制鼻咽癌细胞的迁移被引量：6
- 2013年
- 目的探讨miR-143在鼻咽癌细胞迁移中的生物学功能及可能的分子机制。方法应用生物信息软件预测miR-143靶基因,分别将预测靶基因GLI3的3'UTR及其突变体构建到荧光素酶载体psiCHECK-2骨架中。通过荧光素酶报告基因检测分析miR-143对靶基因GLI3的调控作用,并检测转染miR-143 mimics、inhibitor和siGLI3后鼻咽癌5-8F细胞miR-143和GLI3的表达水平及迁移能力的变化。结果生物信息学预测Hh信号通路转录基因GLI3可能是miR-143的靶基因;双荧光素酶报告基因分析表明miR-143能够作用于GLI3的3'UTR;Western Blot和qRT-PCR结果进一步证明5-8F细胞中miR-143与GLI3的表达呈负相关,并影响5-8F细胞的迁移能力。结论 MiR-143可通过负调控靶基因GLI3抑制鼻咽癌细胞的迁移,为进一步研究miR-143及Hh信号通路在鼻咽癌中的作用机制提供参考价值。
- 钟文何本夫朱成全肖烈钢周思朗彭心昭
- 关键词：MIR-143迁移
- 沉默Sam68对鼻咽癌5-8F细胞增殖的影响及其机制被引量：3
- 2013年
- 目的探讨Sam68基因对鼻咽癌5-8F细胞增殖能力的影响及可能的分子机制。方法通过靶向沉默鼻咽癌5-8F细胞内源性Sam68基因,研究细胞增殖能力的变化情况,并采用qRT-PCR和Western blotting实验方法检测Sam68、细胞周期相关蛋白及其上游分子的表达情况。结果转染Sam68靶向siRNA的5-8F细胞中,Sam68蛋白和mRNA表达水平均明显降低。MTT、细胞周期实验证实干扰Sam68后5-8F细胞的增殖能力受到抑制;Western blotting检测结果显示细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达明显下调,p27表达上调,同时p-FOXO3a、p-Akt和p-GSK-3β的表达明显下调,而总FOXO3a、Akt和GSK-3β的表达则无明显变化。结论 Sam68可能通过激活Akt/FOXO3a信号通路对细胞增殖的相关分子进行调控,进而影响鼻咽癌细胞的增殖能力。
- 杨彬冯德辉
- 关键词：鼻咽癌增殖细胞周期相关蛋白
