国家自然科学基金(31171084)
- 作品数：8 被引量：23H指数：3
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- 细胞间黏附分子1通过活化MAPK通路调节小鼠间充质干细胞向脂肪细胞分化
- 2014年
- 本研究旨在探讨细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)调节小鼠间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)向脂肪细胞分化的分子机制。分别将小鼠ICAM-1重组逆转录病毒MIGR1-ICAM-1和空载体逆转录病毒MIGR1感染小鼠间充质干细胞系C3H10T 1/2细胞,获得稳定高表达ICAM-1的C3H10T 1/2细胞(MIGR1-ICAM-1/MSC)和对照组细胞(MIGR1/MSC)。通过Western blot检测P38,ERK和JNK通路的活化情况,观察MIGR1-ICAM-1/MSC和MIGR1/MSC向脂肪细胞的诱导分化。实验组加入P38、ERK及JNK 3种信号通路抑制剂后进行培养并观察其成脂肪分化情况。以原位油红染色观察脂滴,应用real-time PCR检测成脂分化关键转录因子C/EBPα和PPARγmRNA的表达水平。结果显示,ICAM-1过表达可活化MSC的P38、ERK及JNK通路;原位油红染色及real-time PCR检测结果显示对ERK通路活化抑制可导致MIGR1-ICAM-1/MSC的C/EBPα和PPARγ的mRNA表达水平上调,脂滴变大,脂肪数量增加(P<0.01);阻断P38通路后MIGR1-ICAM-1/MSC的C/EBPα和PPARγmRNA表达水平下调,脂滴及脂肪细胞数量更小、更少(P<0.01)。结论:ICAM-1可能通过活化ERK信号通路抑制MSC的成脂分化,通过活化P38通路维持小鼠MSC成脂分化能力。
- 陈继德徐芬芬朱恒李喜梅唐博刘元林张毅
- 关键词：细胞间粘附分子1MAPK通路间充质干细胞脂肪细胞
- 辛二酰苯胺异羟肟酸诱导人卵巢癌细胞OC3自噬作用被引量：2
- 2015年
- 目的探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)是否诱导人卵巢癌细胞OC3发生自噬。方法 SAHA0.05,0.25,1.25,6.25和31.25μmol·L-1处理OC3细胞24 h后,倒置显微镜吉姆萨和-瑞氏染色观察细胞形态变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活;流式细胞术检测自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)的表达;AO/EB双染色观察红色酸性自噬囊泡的出现;电镜直接观察自噬囊泡的结构。结果不同浓度SAHA处理后,OC3细胞形态呈不规则梭形或多角形,细胞空泡化增多,折光性差。MTT结果表明,不同浓度SAHA处理对OC3细胞的存活具有明显的抑制作用,并存在时间和浓度效应关系,浓度相关系数分别为r12 h=0.898,r24 h=0.976和r48 h=0.952(P<0.05),SAHA 0.05,0.25,1.25,6.25和31.25μmol·L-1时,时间相关系数分别为0.999,0.654,0.999,0.869和0.922(P<0.05)。SAHA与OC3细胞作用24 h后,AO/EB双染色可见红色酸性自噬囊泡出现;进一步电镜观察,可观察到自噬囊泡结构;流式细胞术检测结果表明,与正常对照组相比,SAHA 0.05,0.25,1.25,6.25和31.25μmol·L-1处理OC3细胞24 h后,LC3B阳性细胞比率显著升高,分别为(19.4±2.4)%,(28.5±3.4)%,(34.6±3.9)%,(38.6±3.2)%和(61.8±1.0)%(P<0.05)。结论SAHA可能通过诱导人卵巢癌细胞OC3发生自噬而杀伤肿瘤细胞。
- 赵岳刘朝晖张思刘元林周向东王洋童英张毅
- 关键词：卵巢肿瘤自噬
- ICAM-1基因转染对小鼠间充质干细胞成脂分化功能的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探讨细胞间黏附分子1（ICAM-1）基因转染对小鼠间充质干细胞（MSC）向脂肪细胞分化的影响。方法构建含小鼠ICAM-1基因全长DNA片段的MIGRl-ICAM-1重组逆转录病毒质粒，连同空质粒MIGRl及包装质粒ECOS分别转染T293细胞，收集相关病毒上清并感染小鼠MSC细胞系C3H10T1／2细胞，荧光倒置显微镜下观察及real．timePCR法和流式细胞术检测转染效率，将获得稳定过表达ICAM-1的C3H10T1／2细胞（C3H10T1／2-ICAM-1细胞）和转入空质粒的C3H10T1／2细胞（C3H10T1／2-MIGRl细胞）向脂肪细胞诱导分化，以原位油红O染色和real—timePCR检测成脂分化能力及其关键转录因子C／EBPoL和PPARy mRNA的表达水平。结果成功构建MIGRl-ICAM一1逆转录病毒载体；感染C3H10T1／2细胞获得稳定过表达ICAM-1的C3H10T1／2-ICAM-1细胞和空载体对照C3H10T1／2一MIGRl细胞。成脂细胞诱导分化结果显示，无论是在自分化还是诱导分化组中，C3H10T1／2-ICAM-1细胞与转染空载体的细胞相比脂滴变小，其脂肪细胞数量分别为[（3．2±0．5）／孔、（12．2±3．8）／孔]，显著少于转染空载体的细胞[（11．2±0．4）／孔、（51．3±2．8）／孔]（P〈0．05）；C3H10T1／2一ICAM一1细胞自分化组和诱导分化组C／EBPoLmRNA表达水平分别为1．2±0．7和2．9±0．9）；PPAR-,／mRNA表达水平分别为1557．6±70．2和7547．0±442．2，均较转染空载体细胞的5．8±0．5和23．0±2．3：2453．04-215．6和9856．3±542．2下调（P〈0．05）。结论细胞表面ICAM一1过表达可抑制小鼠MSC的成脂分化。
- 徐芬芬朱恒陈继德刘元林刘雨潇郑荣秀张毅
- 关键词：基因ICAM-1间充质干细胞基因转染细胞分化
- 血管细胞黏附分子-1过表达对小鼠间充质干细胞迁移能力的影响被引量：2
- 2016年
- 目的探讨血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)过表达对小鼠间充质干细胞(MSC)迁移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法将正常小鼠MSC(C3)、转染空载体的小鼠MSC(C3+N)和基因修饰过表达VCAM-1的小鼠MSC(C3+VCAM-1)分别接种在Transwell培养体系培养8和12 h,以胎牛血清为趋化物质诱导MSC迁移。甲紫(结晶紫)和DAPI染色法观察并计数各组细胞的迁移细胞数和迁移率。利用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路抑制剂〔SB203580,PD98059和Jun激酶(JNK)抑制剂Ⅱ〕阻断细胞活化的信号通路,观察各组MSC迁移能力的改变。结果 MSC在Transwell体系培养8和12 h,C3+VCAM-1组细胞迁移数分别为7467±485和8795±255,迁移率分别为(14.9±1.0)%和(17.6±0.5)%,均显著高于C3组〔2731±562和4779±224;(5.5±1.1)%和(9.6±0.4)%〕和C3+N组〔2539±321和5645±1080;(5.1±0.6)%和(11.3±1.1)%〕(P<0.05,P<0.01)。加入JNK抑制剂Ⅱ可抑制MSC的迁移能力,C3+VCAM-1组迁移的细胞数为4843±167,迁移率为(9.7%±0.3)%,显著低于不加JNK抑制剂Ⅱ的C3+VCAM-1组(P<0.01)。MAPK通路抑制剂SB203580和PD98059对MSC的迁移能力无抑制作用。结论 VCAM-1过表达可能通过活化JNK/MAPK通路促进小鼠MSC的体外迁移作用。
- 程岩朱恒刘元林王艳国赵岳陈秀慧杨振林张毅
- 关键词：血管细胞黏附分子-1间充质干细胞细胞迁移
- 小鼠VCAM-1表达载体的构建及稳定高表达间充质干细胞系C3H10T 1/2的建立被引量：2
- 2014年
- 本研究旨在构建小鼠血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)的逆转录病毒载体,通过转染建立稳定高表达VCAM-1的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC),并初步探讨VCAM-1基因过表达对MSC免疫学特性的影响。以小鼠脾脏组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增小鼠VCAM-1基因cDNA,应用基因工程技术将扩增的cDNA片段插入PMSCVmigr-1逆转录病毒载体,构建重组逆转录病毒表达质粒PMSCVmigr-1-mVCAM-1,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术转染293细胞,收获含有病毒颗粒的上清;用病毒上清感染间充质干细胞系(C3H10T 1/2)并检测其表达。采用3H-TdR掺入法测定高表达VCAM-1的MSC在淋巴母细胞转化实验中对淋巴细胞增殖的抑制作用。结果表明:酶切和测序鉴定证实,正确构建了小鼠VCAM-1的重组逆转录病毒表达质粒。逆转录病毒上清感染MSC后流式细胞术检测到目的基因VCAM-1在MSC表面高表达。高表达VCAM-1的MSC对刀豆素A诱导的淋巴细胞增殖具有显著抑制作用,且呈剂量效应关系。结论:成功构建了小鼠VCAM-1基因的重组逆转录病毒质粒并使其在MSC中稳定高表达。高表达VCAM-1的MSC对体外淋巴细胞增殖具有很强的抑制效果。本课题为进一步研究VCAM-1基因调控MSC干预免疫相关性疾病奠定了实验基础。
- 陈慧朱恒褚亚男徐芬芬刘元林唐博李喜梅胡亮钉张毅
- 关键词：间充质干细胞基因表达
- 辛二酰苯胺异羟肟酸对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞OC3/P存活和凋亡的影响被引量：5
- 2013年
- 目的 研究辛二酞苯胺异羟肟酸（SAHA）对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞OC3/P存活和凋亡的影响。方法 SAHA 4~64 μmol·L-1与OC3/P细胞作用6，12，24或48 h，用倒置显微镜观察细胞形态的变化，瑞氏吉姆萨染色观察细胞质和细胞核形态的变化，MTT法检测细胞存活率，AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术测定细胞凋亡率，用透射电镜观察细胞内超微结构的变化。结果 倒置显微镜下可见，SAHA 4，16和64 μmol·L-1与OC3/P细胞孵育24 h，可引起OC3/P细胞皱缩，细胞贴壁不良，折光率减弱，活细胞数目减少，且随着SAHA浓度升高细胞形态改变更明显。瑞氏吉姆萨染色发现，SAHA 64 μmol·L-1与OC3/P细胞孵育24 h，使细胞体积减小、细胞质凝集和核固缩。MTT法检测结果表明，SAHA 4~64 μmol·L-1对OC3/P细胞存活具有抑制作用，并存在明显的时间和浓度效应关系，其中SAHA 64 μmol·L-1作用 6，12，24和48 h对OC3/P细胞存活的抑制率分别为（7.1±1.9）%，（14.6±2.0）%，（36.8±2.7）%和（83.3±3.0）%（r=0.891，P〈0.05），SAHA 4，8，16，32和64 μmol·L-1作用48 h对OC3/P细胞存活的抑制率分别为（28.8±1.2）%，（34.8±4.3）%，（52.3±2.8）%，（61.3±4.9）%和（83.3±3.0）%（r=0.966，P〈0.05）。流式细胞术检测结果表明，SAHA 4，16和64 μmol·L-1作用48 h均可诱导OC3/P细胞凋亡（P〈0.05，P〈0.01）。透射电镜观察结果表明，SAHA 4，16和64 μmol·L-1作用24 h，OC3/P细胞核出现典型的凋亡形态变化。结论 SAHA可抑制人卵巢癌紫杉醇耐药细胞OC3/P的存活并诱导其凋亡。
- 刘朝晖刘雨潇李俊峰赵岳刘元林童英张毅
- 关键词：卵巢癌紫杉醇P
- 环巴胺对子宫内膜癌HEC-1A细胞存活与凋亡的影响
- 2017年
- 目的探讨环巴胺(cyclopamine,CYP)对人子宫内膜癌HEC-1A细胞存活及凋亡的影响。方法采用0,5,10,20,40μmol/L CYP处理HEC-1A细胞24 h,倒置显微镜下观察细胞形态改变,CCK-8法检测细胞增殖,AO/EB双染法观察死亡细胞;流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI法检测细胞发生的凋亡率,Q-PCR法检测Bax和Bcl-2基因的表达水平。结果 CYP处理导致HEC-1A细胞形态发生明显改变,且具有CYP浓度依赖性;CCK-8结果显示,CYP可显著抑制HEC-1A细胞的增殖(P<0.05);AO/EB染色结果表明,CYP可诱发HEC-1A细胞大量死亡;流式细胞术检测发现CYP可导致HEC-1A细胞凋亡,且随CYP浓度的升高HEC-1A细胞发生凋亡的比例升高(P<0.05);Q-PCR检测凋亡相关基因表达。结果显示,CYP处理可诱导HEC-1A细胞上调表达Bax基因,下调表达Bcl-2基因。结论 CYP可抑制人子宫内膜癌细胞HEC-1A的存活并诱导其发生凋亡。
- 张萍萍李雪刘元林张思周向东童英张毅
- 关键词：子宫内膜癌环巴胺
- 不同止血方法对腹腔镜下卵巢肿瘤剥除术后卵巢功能影响的临床对比研究被引量：9
- 2015年
- 目的:探讨不同止血方法对腹腔镜下卵巢肿瘤剥除术后卵巢功能的影响。方法:本研究选择2011年5月-2013年3月我院收治的92例卵巢良性肿瘤患者,根据在腹腔镜下卵巢肿瘤剥除术中所采取的止血方法的不同将其分为观察组与对照组,观察组患者采用双极电凝止血法,对照组患者采用缝合的止血方法。观察两组患者手术时间、出血量、住院天数、体内性激素[卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)]水平及手术后月经情况的变化。结果:观察组患者的手术时间明显低于对照组,出血量及住院天数也显著性低于对照组,组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05);两组患者手术前性激素(FSH、E2、LH)水平进行比较无显著性差异(P>0.05),手术后两组性激素水平比较有显著性差异(P<0.05);观察组的月经正常率为93.5%,对照组为71.7%,观察组正常率明显高于对照组,两组比较有统计学意义(P<0.05)。结论:采用电凝的止血方法与传统的手术缝合方法相比,前者可以有效保持卵巢的正常生理功能,降低手术对患者的副作用,值得进一步研究。
- 陈冰刘佳李春东
- 关键词：止血方法卵巢肿瘤剥除术卵巢功能
