宁夏回族自治区教育厅基金(NGY2011054)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
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- 相关机构：宁夏医科大学潍坊市人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠增殖抑制基因抑制大鼠胶质瘤细胞的增殖及其机制被引量：5
- 2014年
- 目的观察腺病毒介导的大鼠增殖抑制基因(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)在大鼠胶质瘤细胞(C6)中的表达及其对大鼠胶质瘤细胞增殖的影响,并探讨其作用的机制。方法用含有rHSG基因的重组腺病毒载体(Adv-rHSG-GFP)转染C6细胞,采用Western blot和免疫细胞化学法检测rHSG蛋白的表达;使用流式细胞仪分析细胞周期,并结合MTT、细胞计数法和平板克隆形成实验观察rHSG对细胞增殖的影响;应用Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期调控蛋白p27Kip1、p21Cip1的蛋白表达变化。结果 Adv-rHSG-GFP转染组C6细胞中:rHSG蛋白的相对表达量均明显高于未转染组和Adv-GFP转染组(P<0.01);流式细胞仪分析结果表明细胞周期被阻滞在G0/G1期,且MTT、细胞计数和平板克隆形成实验显示大鼠胶质瘤细胞增殖受到明显抑制(P<0.01);与未转染组和Adv-GFP转染组相比,周期调控蛋白p27Kip1、p21Cip1表达升高,PCNA表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论 rHSG基因过表达能够抑制大鼠胶质瘤细胞增殖,其机制可能是通过参与细胞周期调节发挥作用。
- 高鹏蒋树财郭晖杨强方志豪赵巍沈冰
- 关键词：神经胶质瘤腺病毒细胞C6
- 重组腺病毒载体对大鼠胶质瘤细胞转染效率的影响
- 2013年
- 目的研究转染复数(MOI)和转染时间对重组腺病毒载体转染大鼠胶质瘤细胞转染效率的影响。方法体外培养大鼠胶质瘤细胞(C6细胞),用携带有rHSG基因的重组腺病毒载体(Adv-rHSG-GFP)转染C6细胞。根据MOI将细胞分为:A组MOI=0、B组MOI=10、C组MOI=50、D组MOI=80、E组MOI=100,转染Adv-rHSG-GFP 24h后分别收集每组细胞,采用Western Blot和免疫细胞化学法检测rHSG蛋白的表达,并通过流式细胞仪和倒置荧光显微镜观察GFP阳性表达来评价重组腺病毒载体的转染效率。用MOI为100的Adv-rHSG-GFP转染C6细胞不同时间后(12、24、36和48h),同法收集细胞并检测rHSG蛋白的表达及评价重组腺病毒载体的转染效率。结果 Adv-rHSG-GFP转染C6细胞24h后,rHSG蛋白的相对表达量和绿色荧光蛋白表达随MOI值的增高而增多;用MOI为100的Adv-rHSG-GFP转染C6细胞后,12h即可观察到绿色荧光蛋白的表达,且在24h内随时间的变化而增高,在24~36h绿色荧光蛋白表达无变化,48h有所降低(P<0.01);rHSG蛋白相对表达量在12~48h内随时间的变化而增高,于48h达到最大值(P<0.01)。结论重组腺病毒载体能够有效转染C6细胞,且在MOI值为100,24h时有最高转染效率。
- 高鹏张春赵巍沈冰
- 关键词：腺病毒转染
