国家自然科学基金(39430080)
- 作品数：24 被引量：60H指数：4
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- 一种新的中心体常驻蛋白的鉴定
- 2000年
- 利用膜特异结合抗体洗脱法，用一例自身免疫病人血清鉴定了一种新的中心体蛋白３１／２９抗原．免疫荧光结果显示这种抗原定位于中心体处，不依赖于细胞周期的变化，属于一种中心体常驻蛋白．为了研究细胞核周期与中心体复制之间的协调关系，利用此抗血清以及Ｃｅｎｔｒｉｎ和γ－微管蛋白（γ－ｔｕｂｕｌｉｎ）抗体研究了Ｖ７９－８细胞在人工诱导产生早熟染色体凝集（ＰＣＣ）现象时其中心体复制周期的变化．结果发现在羟基脲抑制ＤＮＡ合成，细胞阻断在Ｇ_１／Ｓ及Ｓ期时，中心体蛋白继续表达积累，中心体复制仍在进行．咖啡因的加入在诱导未复制基因组的有丝分裂（ＭＵＧ）细胞的同时也诱导复制后中心体的分开，这表明细胞中ＤＮＡ合成和中心体复制事件之间可以分离．两者在细胞周期引擎分子的控制下正常运转，相互协调，使ＤＮＡ复制一次的同时中心体也复制一次，从而保证双极纺锤体的组装和染色体的均等分配，以保持细胞遗传性的稳定．
- 陈晓波王永潮李永哲崔京涛
- 关键词：抗体中心体MPF
- 利用正义和反义技术研究着丝粒/动粒复合体蛋白CENP-B在细胞周期调控中的作用被引量：1
- 2005年
- 为研究着丝粒/动粒复合体蛋白(centromere/kinetochore complexprotein-B,CENP-B)高表达和低表达在细胞周期调控中的作用,将全长CENP-BcDNA基因(cenpb)构建到pBI-EGFP真核表达载体上,获得正义和反义cenpb真核表达重组质粒,并转染HeLa-Tet-Off细胞.结果表明,正义质粒转染导致细胞产生巨型着丝粒/动粒复合体,细胞分裂几次后发生凋亡;转染反义质粒至HeLa-Tet-Off细胞,克隆筛选获得稳定表达反义cenpb的细胞株HACPB.HACPB细胞着丝粒/动粒复合体小、数量多,CENP-B表达量低;细胞周期延长,恶性表型降低,裸鼠致瘤能力降低,G2/M期向下一周期的G1期过渡发生延迟.细胞周期蛋白相关激酶(cyclin-dependentkinases,CDKs)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白相关激酶抑制剂(CDKinhibitors,CKIs)等的表达在某时相发生特异的变化.这些结果说明,CENP-B是维持着丝粒/动粒复合体正常结构和功能的必需组分,并参与细胞周期调控.
- 罗松林海燕齐建国王永潮
- 关键词：CENP-B细胞周期调控
- 蛋白激酶A抑制剂对HeLa细胞S期进程的影响被引量：1
- 2001年
- 以同步化的HeLa细胞为实验材料 ,研究了蛋白激酶A (PKA)抑制剂对HeLa细胞S期进程的影响及其作用的分子机理 .通过TdR双阻断法 ,获得了同步化的S期细胞 ,3H TdR掺入实验表明PKA抑制剂typeⅢ(80mg/L)明显提高了S期3H TdR的掺入水平 ,提示了PKA在S期进程中起阻抑作用 .进一步实验表明 ,在PKA抑制剂typeⅢ作用下胸苷激酶 (TK)活性和PCNA蛋白水平均有所提高 ,同时明显促进了CyclinA蛋白的表达 ,并抑制了周期负调因子 p2 1蛋白的水平 ,但对CDK2表达几乎无影响 .结果表明 ,PKA可通过作用于PCNA和引擎分子CyclinA的水平和通过影响 p2 1的表达负调于S期进程 .这可能是PKA负调HeLa细胞S期进程的分子机理之一 .
- 孙霞柳惠图童迎凯王端顺
- 关键词：蛋白激酶AS期HELA细胞
- 泛素-蛋白水解酶复合体通路在小鼠精子变态中的作用被引量：3
- 2000年
- 应用重力沉降法分离睾丸各层细胞 ,通过蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹观察各种生精细胞中泛素结合蛋白的表达规律 ,并通过免疫组织化学方法对其进行组织和细胞水平的定位 .结果表明 ,在圆形精子和长形精子细胞中泛素结合蛋白增加 ,在成熟精子中量较低 ,在精原和精母细胞中量微弱 .总蛋白电泳的结果表明 ,在精子变态过程中蛋白的变化以长形精子细胞转变为成熟精子阶段最为剧烈 ,其间许多蛋白消失同时伴随一些新蛋白的出现 .蛋白免疫印迹显示泛素结合蛋白在精子变态过程中大量出现 ;结合总蛋白电泳的结果发现 ,此阶段消失的蛋白多为泛素结合蛋白 .由此可见 ,泛素对一些蛋白的修饰及其降解与精子变态密切相关 .
- 乔丹宋长城李存玺王永潮
- 关键词：泛素小鼠免疫组织化学蛋白水解酶
- 抑制PKCα对乳腺癌细胞特性及cyclin E和CDK2基因表达的影响
- 1999年
- 将构建的表达PKC_α反义RNA的质粒,转入人乳腺癌细胞Bcap-37中,通过筛选与检测获得PKC_α表达受到抑制的细胞。随后分析了细胞生长的血清依赖性、软琼脂成集落和致瘤性的变化,以及cyclin E和CDK2基因表达所受到的影响。结果显示PKC_α表达受到抑制后,乳腺癌细胞生长的血清依赖性增加,软琼脂成集落能力下降,细胞致瘤性被强烈抑制,说明PKC_α表达下降或活性降低伴随着乳腺肿瘤细胞恶性程度的减弱。同时,结果还表明PKC_α表达受到抑制后,导致细胞周期调控系统中的cyclin E及CDK2表达水平下降,说明PKC_α参与的信号转导系统与cyclin/CDK参与的细胞周期调控系统在功能上有着较为密切的联系。
- 桑建利王永潮
- 关键词：PKCΑCDK2基因表达乳腺癌
- 部分抑制CDK4基因的表达导致V79-8细胞的G1期的延长被引量：1
- 1998年
- V79_8细胞是一个没有可测定G1和G2期的变异细胞株 ,其母系细胞系V79有G1期 ,但没有G2期 ,为了探讨V79_8的G1期缺乏是否与CDK4的调控有关 ,研究了CDK4对其细胞周期的影响 .构建反义CDK4质粒转染V79_8细胞筛选得到V79_8_asCDK4细胞 ,通过研究V79_8_asCDK4与对照组细胞的细胞生长曲线 ,测定其细胞的GT(细胞倍增时间 ) ,用FCM测定细胞周期中各个周期时相所占的比例 ,比较各期细胞数量的变化 ,同时检测其内源CDK4及其他增殖相关基因的表达 .V79_8_asCDK4生长变缓慢 ,GT时间约增长了 2 .5h ,FCM结果G2 +M无明显变化 ,而G1期比对照组明显增加 ,因此 2 .5h主要是出现了G1期所致 .Northern杂交结果表明 ,V79_8_asCDK4细胞中内源CDK4的表达降低 ,cyclinD1及Rb略有减少 ,TGF_β表达增加 ,而cyclinB1无明显变化 .CDK4主要在G1及G1 /S起作用 ,反义CDK4转染V79_8细胞可部分抑制CDK4mRNA的表达 ,降低CDK4/cyclinD激酶复合物水平 ,降低了Rb的磷酸化程度 ,延长G1期过程 ,而G1 /S转换处也因受到检验点的调控而出现了延迟 ,导致出现明显的G1期 .
- 肖卫群张四清王永潮王跃
- 关键词：CDK4基因表达G1期
- 反义CENP-B对HeLa(Tet-off)细胞增殖状况的影响被引量：1
- 2001年
- 为了检测反义转染引起的细胞着丝粒蛋白CENP-B表达的变化情况,用原核表达的融合蛋白GST-CENP-B免疫Balb/c 小鼠,制得抗CENP-B的鼠抗血清（MaCenpB）.转染了含有反义CENP-B表达载体pBI-EGFP-as-CenpB的HeLa-Tet-off细胞（HaCb）,用Northern blot和Western blot研究了转染后细胞内源CENP-B基因表达的抑制情况.生长曲线表明,反义CENP-B抑制HeLa（Tet-off）细胞增殖,使倍增时间延长了32.8h.流式细胞光度术分析表明,较之HeLa（Tet-off）细胞,HaCb的G1期比例增加（△G1=9％）,S期比例减少（△S=11％）.同时,有丝分裂指数（MI）大大降低;间接免疫荧光分析表明,HaCb的着丝粒组装受到抑制.这说明,CENP-B的正常表达对于细胞的增殖是必要的.
- 粱前进王谦林海燕罗松王春梅何大澄王永潮
- 关键词：着丝粒蛋白细胞分裂细胞增殖CENP-B细胞周期
- 一种新的钙依赖性的蛋白激酶基因CP4的克隆及其表达研究
- 2002年
- 在利用人ACA (Anti Centromere/KinetochoreAutoantibody)血清研究拟南芥ACA相关蛋白的过程中克隆了钙依赖性的蛋白激酶基因家族的一个不典型基因 ,称为CP4 ,GenBank注册号为AF130 2 5 2。Southern杂交结果表明 ,拟南芥基因组中至少存在两种以上等位形式的CP4。原位杂交结果表明 ,CP4mRNA在拟南芥的花和根中高表达 ,在果实和叶片中没有表达。此外还构建了CP4的高效表达载体 ,为进一步研究CP4的功能打下了基础。
- 王世峰罗松林海燕赵晖梁华齐建国王跃王永潮
- 关键词：拟南芥基因组蛋白激酶基因钙依赖性血清克隆
- 三尖杉酯碱诱导HeLa细胞凋亡的研究被引量：6
- 2000年
- 报道了三尖杉酯碱 (harringtonine ,HT)可以诱导HeLa细胞凋亡 .采用Heochst33342荧光染色、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞光度术 (FCM)的方法 ,研究了HT对HeLa细胞凋亡的影响 .利用细胞同步化技术和斑点杂交法研究发现 ,HT影响了HeLa细胞c myc和bcl 2基因的表达并且与细胞周期密切相关 .初步探讨其凋亡诱导的机制 ,认为HT通过在G1和G2 期下调细胞凋亡抑制基因bcl 2的诱导凋亡 ,以及下调c myc癌基因阻滞细胞增殖 ,并延迟凋亡发生 .这些结果对于了解HT的药物作用机制和提高临床化疗疗效具有重要意义 .
- 宋长城邢录洲宋晓元彭安王永潮
- 关键词：HELA细胞三尖杉酯碱细胞凋亡
- 缘何细胞周期调控研究获得新千年第一个诺贝尔奖被引量：2
- 2001年
- 王永潮
- 关键词：细胞周期调控诺贝尔奖CDKS
