上海市自然科学基金(06ZR14093)
- 作品数：8 被引量：37H指数：4
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- 环氧合酶-2在肿瘤浸润和转移中的作用及治疗研究被引量：5
- 2008年
- 环氧合酶-2(COX-2)是合成前列腺素的关键酶之一,其在组织细胞中呈诱导型表达。COX-2与肿瘤浸润转移具有一定相关性,其高表达可促进肿瘤转移.COX-2通过改变细胞表面粘着因子和细胞外基质、促进肿瘤血管生成以及改变肿瘤微环境等一系列病理生理变化促进肿瘤转移。COX-2已成为预防和阻止肿瘤转移的药靶,COX-2抑制剂对肿瘤有一定疗效。现就近年来COX-2在肿瘤浸润和转移中的作用及治疗研究作一综述。
- 吴永王和勇张培德周彩存
- 关键词：COX-2肿瘤转移细胞外基质肿瘤血管生成
- 环加氧酶2基因的大肠杆菌表达与纯化
- 2008年
- 通过RT-PCR从肺癌细胞株A549克隆环氧化酶2(cyclooxygenase2,COX-2)基因全长1.8 kb,测序结果与已发表的一致;将该片段插入pET32-a(+)载体中,构建原核表达载体pET-32-COX-2,转入BL-21中,IPTG诱导重组融合蛋白his-COX-2表达,SDS-PAGE分析71kD处有特异条带,与理论相符;Western blotting验证为COX-2蛋白;用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化融合蛋白,获得纯度较高的原核表达蛋白.为其新型抑制剂的研发与抗肿瘤作用蛋白疫苗的研制奠定基础.
- 向阳王和勇雷桅孙敏
- 关键词：COX-2融合蛋白原核表达纯化
- 不同部位皮下注射DNA疫苗对小鼠体液免疫的影响被引量：4
- 2008年
- 主要探讨在小鼠不同部位皮下注射DNA疫苗对体液免疫应答的影响,为DNA疫苗在体内获得高滴度抗体提供优化条件.用RT-PCR从人肺癌细胞株A459中克隆VEGF片段,并插入pVAX1质粒构建pVAX1-VEGF真核表达质粒;在耳廓、胸部、腹部、尾跟部、背部及足垫的皮下注射1μg/μL pVAX1-VEGF疫苗DNA 100μL,ELISA法检测血清中VEGF抗原表达及其IgG抗体分布,测定血清中IgG2a和IgG1两亚型水平.实验结果发现:耳廓、胸部、腹部免疫产生的VEGF抗原较快,其中耳廓免疫产生的体液免疫最快最强,与胸部、腹部、背部、尾根及足垫免疫产生的体液免疫反应相比,具有统计学意义,同时pVAX1-VEGF疫苗组与pVAX1对照组的体液免疫差异显著,但pVAX1-VEGF疫苗组主要产生IgG2a型抗体.上述结果表明:所构建人VEGF的DNA疫苗能在小鼠体内有效表达,不同部位皮下免疫后均能产生抗VEGF的IgG抗体,以IgG2a抗体为主;但就抗原表达、抗体及IgG2a而言,以耳廓皮下接种最佳.
- 王和勇向阳唐亮孙敏
- 关键词：皮下注射DNA疫苗体液免疫
- 环氧合酶2的DNA疫苗构建及其在COS-7细胞中表达被引量：1
- 2008年
- 构建了环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)的DNA疫苗载体pVAX1-COX-2,并考察在COS-7细胞中表达.用RT-PCR法从肺癌A549细胞中获得环氧合酶-2基因片段,此片段插入pVAX1载体构建pVAX1-COX-2真核重组表达质粒,脂质体介导法转染COS-7细胞,以pVAX1为对照,收集稳定转染细胞,利用RT-PCR和West-ern-blot分别在mRNA和蛋白水平上考察COX-2表达.实验结果表明:RT-PCR法从A549细胞mRNA中扩增1.8 kb的COX-2基因片段,酶切与测序结果表明所构建的真核表达载体pVAX1-COX-2与预期相符,质脂体法成功地将质粒DNA转染到COS-7细胞中.RT-PCR和Western-blot分析结果表明COX-2已表达.因此,所构建的真核表达载体pVAX1-COX-2正确,且在COS-7细胞中表达.
- 罗恒王和勇向阳唐亮谈立松周彩存孙敏
- 关键词：环氧合酶-2DNA疫苗真核表达
- MHCⅠ类链相关蛋白A在肿瘤免疫中的作用研究被引量：3
- 2008年
- 丁修敬陈晓峰王和勇
- 关键词：MICANKG2D肿瘤免疫免疫监视免疫逃避
- VEGF DNA疫苗注射部位对小鼠抗原表达与Th细胞活性的影响
- 2008年
- 目的探讨小鼠不同部位皮下注射VEGF DNA疫苗对抗原表达与Th细胞活性的影响,为DNA疫苗在体内获得良好的细胞免疫提供优化条件。方法用RT-PCR法从A459细胞株中扩增570 bp的VEGF片段,此片段构建成真核表达重组质粒pVAX1-VEGF;在小鼠耳廓、胸部、腹部及背部皮下注射1μg/μl的pVAX1-VEGF DNA100μl,ELISA法检测血清中VEGF抗原表达水平和脾细胞产生的IL-4及IFN-γ动态变化。结果小鼠耳廓、胸部及腹部免疫,VEGF抗原表达较强,其中耳廓免疫所激活的Th1细胞最强,产生524.2 pg/ml IFN-γ,与胸部、腹部及背部免疫的效果相比,差异显著;pVAX1-VEGF疫苗组与pVAX1对照组的Th1与Th2细胞活性差异均显著,不同部位的pVAX1-VEGF疫苗组对Th2细胞活性无明显影响。结论本研究所构建人源VEGF的DNA疫苗能在小鼠体内有效表达,且不同部位皮下免疫后均可激活Th细胞,但以Th1细胞效应为主和耳廓皮下接种最佳。
- 王和勇向阳唐亮谈立松周彩存
- 关键词：皮下注射DNA疫苗抗原表达TH细胞小鼠
- 丙戊酸钠抑制肺癌细胞株A549增殖的研究被引量：4
- 2009年
- 目的研究丙戊酸钠（sodium valproate,VPA）对肺癌细胞株A549细胞增殖的影响。方法体外不同浓度VPA不同作用时间处理人肺癌细胞株A549,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞技术分析细胞周期与细胞凋亡的改变。结果2.0 mmol/L VPA作用72 h细胞形态明显改变、细胞数明显减少。1.0mmol/L VPA作用72 h后,细胞增殖被抑制,抑制率为（15.8±2.8）%,与同期对照组相比,差异具有统计学意义（P〈0.05）;提高处理浓度或延长作用时间,抑制作用有加强趋势。1.0 mmol/L VPA作用72 h后可改变细胞周期分布,G1期细胞比例为（72.2±3.4）%,与同期对照组相比差异显著;2.0 mmol/LVPA处理24～72 h后G1细胞比例由（64.5±3.7）%增加至（79.8±4.4）%,而S期细胞由（30.7±5.17）%降低至（14.2±3.37）%;提高处理浓度或延长作用时间均使G1期细胞比例增高,S期细胞比例减少。2 mmol/L VPA作用24～72 h可提高细胞凋亡率,由（7.30±1.87）%增加到（19.85±2.40）%。结论VPA可抑制肺癌A549细胞生长,改变细胞周期分布、促进细胞凋亡。
- 罗恒刘明忠王和勇粟波李玉平
- 关键词：丙戊酸钠肺癌细胞A549细胞增殖细胞周期
- COX-2及其抑制剂在肿瘤防治中的作用被引量：21
- 2008年
- 环氧化酶(cyclooxygenase,COX)是前列腺素合成途径中主要的限速酶之一,参与炎症、发热、出凝血等病理生理过程。COX-2在肿瘤发生发展、转移、凋亡抑制及促进肿瘤血管生成等方面发挥重要作用,已成为肿瘤防治的一个新靶点;COX-2及其抑制剂在肿瘤预防、放疗、化疗、生物疗法中具有广阔应用前景。本文就COX-2及其抑制剂在肿瘤防治中的进展作一详细综述。
- 向阳孙敏王和勇
- 关键词：COX-2抑制剂肿瘤预防肿瘤治疗
