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小鼠PDL1-Red2融合蛋白真核表达载体的构建、表达及其效应: 2008年; 目的:小鼠跨膜型PD-L1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因真核表达载体的构建、表达与鉴定,及其效应初步研究。方法:应用基因工程技术构建重组载体,脂质体转染NIT细胞株,以流式细胞术(FCM)和倒置相差荧光显微镜检测融合蛋白的表达;采用混合淋巴细胞培养,以FCM测定脾细胞的增殖反应。结果:融合基因在转染的真核细胞中获得表达,并呈膜分布,转染PD-L1/pDsRed2-N1的细胞对淋巴细胞增殖反应有一定的抑制作用,表明PD-L1/pDsRed2-N1融合蛋白中分子标签未影响PD-L1的结构及其生物学活性。结论:PD-L1与DsRed2融合基因载体构建成功,表达的融合蛋白具有生物学活性。; 廖雯君孙晶朱慧芬张金元沈关心; 关键词：PD-L1 红色荧光蛋白融合基因

可溶性mPDL1-hIgGFc表达载体构建、表达及对诱导细胞增殖与凋亡的影响: 2008年; 目的可溶性mPDL1-hIgGFc（mouse PDL1-human IgG Fc）表达载体的构建与表达，及其对诱导细胞增殖与凋亡的研究。方法以含有mPDL1基因的载体pmPDL1为模板，采用PCR的方法获得mPDL1胞外段基因，定向连接于含有hIgGFc基因片段的载体phIgGFc，构建表达载体pmPDL1-hIgGFc；采用脂质体将重组子转染CHO细胞，转染后的CHO命名为CHOp；ELISA和Western blot法检测目的蛋白的表达，流式细胞术检测CHOp培养上清对混合淋巴细胞培养（MLC）的影响。结果测序结果和酶切鉴定显示构建的表达载体pmPDL1-hIgGFc完全正确；ELISA和Western blot法检测CHOp培养上清中有目的蛋白表达；流式细胞术检测表明CHOp培养上清可体外抑制小鼠MLC，并诱导活化T细胞凋亡，其效应呈剂量依赖性。结论成功构建mPDL1-hIgGFc表达载体；mPDL1-hIgGFc在体外可抑制MLC和诱导活化T细胞凋亡，具有负性调节T细胞的功能。; 杨敬廖雯君王国华何峰蓉朱惠芬戴红周玮吴雄文张金元沈关心; 关键词：混合淋巴细胞培养增殖凋亡

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上海市自然科学基金(06ZR14118)