国家自然科学基金(30772102)
- 作品数：11 被引量：22H指数：3
- 相关作者：窦科峰李韧刘卫辉张福琴吴印涛更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学中国人民解放军海军总医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠肝癌肺转移灶中边缘群细胞的分离与表型鉴定
- 2009年
- 目的:建立肝癌远处器官转移灶中边缘群肝癌细胞的分离方法并对其干细胞特征进行鉴定.方法:利用二乙基亚硝胺(DEN)建立大鼠肝癌肺转移灶模型;组织块原代培养法扩增培养肺转移灶中的肝癌细胞,对细胞进行Ho-echst33342及不同荧光标记的c-kit,Sca-1mAb染色后,利用流式细胞仪(FACS)分选肝癌肺转移灶中的边缘群及非边缘群细胞,并分析两群细胞表面干细胞标志物的表达特征;软琼脂克隆形成分析两群细胞的肿瘤形成能力.结果:成功建立大鼠肝癌肺转移灶模型,并在此基础上获得性质较为均一并可稳定传代的肺转移肝癌细胞株;FACS分析表明边缘群细胞占肺转移肝癌细胞总细胞量的0.5%,边缘群细胞表面c-kit表达率为85%,Sca-1表达率为75%,而非边缘群细胞表面c-kit及Sca-1表达率分别仅为8%和3%;软琼脂克隆实验结果表明边缘群细胞平均克隆形成率为69.9%,非边缘群细胞平均克隆形成率为15.3%,边缘群细胞肿瘤形成能力显著高于非边缘群细胞(P<0.01).结论:肺转移肝癌细胞中的边缘群细胞具备显著的肿瘤干细胞特征.
- 张佳斌窦科峰李韧刘正才宋文杰千年松于恒超
- 关键词：肝细胞肿瘤转移肿瘤干细胞
- 大鼠肝癌细胞与胎肝细胞间抑癌微小RNAs的表达差异被引量：4
- 2009年
- 微小RNAs（miRNAs）是一类短序列、非编码、具有调控功能的单链小分子RNA，通过与其靶mRNA分子互补结合，在翻译水平上特异性抑制基因表达，参与调控生物生长和发育等许多复杂的生命过程，异常的miRNAs表达可能与人类许多疾病乃至肿瘤的发生和发展部密切相关。已知的miRNAs参与癌症发生的机制包括细胞黏附、血管生成、蛋白质水解、细胞信号系统、细胞增殖、侵袭转移和细胞死亡。
- 刘卫辉吴印涛李韧张洪涛张福琴窦科峰
- 关键词：胎肝细胞
- 利用基因表达连续分析技术构建肝癌HepG2细胞文库
- 2009年
- 目的采用基因表达连续分析技术（serial analysis of gene expression，SAGE）建立肝癌HepG2细胞标签文库。方法提取肝癌HepG2细胞总RNA，分离纯化得到mRNA，利用改进后的M—MLV RTase cDNA合成试剂盒合成生物素标记的双链cDNA；得到全长cDNA后，根据SAGE技术流程后续步骤，建立肝癌HepG2细胞标签文库。结合GenBank、UniGene文库分析标签代表的转录本，最终通过SAGE软件分析标签丰度。结果15586个标签中有14181个获得稳定有效的扩增，长度在200～3000bp。将获得的长片段进行序列分析后，2023个特异基因被发现。结论用改进后的逆转录试剂盒可以较好地获得全长cDNA，为SAGE技术构建文库提供可靠的原料。借助SAGE技术建立的肝癌HepG2细胞标签文库，容量大、效率高，为后续基因研究搭建了良好的平台.
- 刘卫辉李韧窦科峰
- 关键词：肝细胞HEPG2细胞文库
- 小鼠胎肝干细胞的生长和分化模式及鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的体外培养小鼠胎肝细胞，探索其生长和分化模式，并进行干细胞特征的表型鉴定。方法分离培养不同时期小鼠胎肝细胞，动态观察细胞形成的集落数及生长模式；收获集落进行干细胞表面标记物流式检测；传代培养胎肝细胞，探索甲胎蛋白（AFP）变化趋势及细胞分化模式。结果经体外培养，第15天胎肝细胞形成明显集落，生长状况最好，干细胞的表面标记提示形成的集落具有肝干细胞特性。传代培养中，第15天胎肝干细胞以线性模式生长；分化模式中AFP呈现正态分布变化。结论随胎龄增加，有干细胞特性的细胞逐渐减少。体外培养中，肝干细胞呈线性模式增殖，逆向线性方式分化。
- 刘卫辉李韧窦科峰
- 关键词：肝干细胞分化
- 大鼠肝癌细胞与胚胎肝细胞的microRNA差异表达谱分析
- 2013年
- 目的建立大鼠肝癌细胞与大鼠胚胎肝细胞microRNA(miRNA)表达的差异谱,为miRNA在肝细胞癌变发生机制中的作用提供新线索。方法化学致癌剂二乙基亚硝胺(DEN)建立近交系F334大鼠肝癌模型,体外原代培养大鼠肝癌细胞和正常F334大鼠胚胎肝细胞,Trizol法抽提细胞总RNA,进一步制备Hy3荧光标记的miRNA;利用Exiqon miRNA基因芯片技术,采用含2 056条探针的哺乳动物miRNA表达谱芯片对两组之间差异表达的miRNA进行分析。结果原代培养可获得稳定传代的肝癌细胞及胎肝细胞,两者在形态上无明显差异;miRNA芯片共获得78个差异表达的miRNAs,其中68个表达上调,10个表达下调,部分miRNAs与肿瘤关系密切,其中miR-122为肝细胞癌变相关miRNA。结论正常肝细胞中存在着与肝细胞癌变及侵袭、转移相关的miRNAs,miRNAs的表达具有明显的时序性,主要参与转录后基因表达的调控,其表达特征的改变可能导致了肝癌的发生。
- 吴印涛邱宝安
- 关键词：肝肿瘤胎肝细胞
- 7种microRNAs在原发性肝癌组织和癌旁组织间的差异表达及与血清肿瘤标志物水平的相关性研究被引量：8
- 2010年
- 目的分析小RNA(microRNAs)在原发性肝细胞癌组织和癌旁组织中的表达差异及与血清肿瘤标志物水平的相关性,探索肝癌诊断和预后可能的新标志。方法使用实时定量PCR技术检测7种MicroRNAs在原发性肝细胞癌组织和癌旁组织中的表达差异。结果 7种microRNAs在原发性肝细胞癌组织和癌旁组织中的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。与癌旁组织相比,mi R-34c、mi R-21、mi R-16及mi R-10b在肝癌组织中表达上调,mi R-200a、mi R-148b及mi R-Let-7i在肝癌组织中表达下调,其中mi R-200a和mi R-148b下调明显。mi R-200a在肝癌和癌旁组织中的表达差异与患者血清AFP水平呈正相关(r=0.8489,P<0.01),而其余microRNAs的表达差异与患者血清各肿瘤标志物水平均无相关关系(P>0.05)。结论原发性肝细胞癌和癌旁组织中存在microRNAs的表达差异,mi R-200a可能成为新的肝癌早期诊断标志。
- 张明刘卫辉尤楠张福琴窦科峰
- 关键词：小RNA原发性肝细胞癌
- 采用罗丹明123对肝癌细胞系MHCC97（Rho^low）干细胞亚群的分离及鉴定
- 2008年
- 目的建立分离肝癌细胞系MHCC97细胞中对罗丹明123染料具有不同排斥能力细胞亚群的方法，并探讨其在肝癌干细胞和异质性研究中的意义。方法利用流式细胞分选术（FCM）并结合不同浓度的罗丹明123（Rho123）染料，分析和分选肝癌细胞系MHCC97细胞中具有不同染料排斥能力的肝癌细胞亚群，再通过细胞生长的测定、软琼脂克隆形成以及免疫组织化学检测和裸鼠成瘤实验等方法，以比较不同肝癌细胞亚群的差异。结果根据不同染料排斥能力可以将肝癌细胞系MHCC97细胞分为Rho^low和Rho^high2个亚群，2个亚群在增殖能力、克隆形成率以及甲胎蛋白（AFP）和角蛋白-19（CK-19）表达以及裸鼠成瘤实验上差异有统计学意义，Rho^low亚群具有干细胞特性。结论罗丹明123结合FCM可以富集具有干细胞特性的Rho^low亚群，同时为进一步揭示肝癌异质性机制奠定基础。
- 千年松李韧于衡超曹云新张福琴窦科峰
- 关键词：肿瘤干细胞
- 大鼠胎肝干细胞的鉴定和分化研究
- 2009年
- 胚胎肝脏中含有的原始肝细胞具有成体肝干细胞的基本特性，即具有自我增殖和向肝细胞或胆管细胞分化的双分化潜能。鉴定潜在的干／祖细胞，主要依赖离心法或细胞表面标志来实现。最经典的利用细胞表面标志实现分选方法是流式细胞分选法和免疫磁珠分选法，但肝干细胞表面标志目前尚无公认的金标准旧一且标志分选策略的代价高，限制了其在肝干细胞分选中的应用。胎肝中主要包含6类细胞，要去除这些杂细胞，
- 刘卫辉李韧李杰窦科峰
- 关键词：胎肝干细胞分化潜能细胞表面标志
- 大鼠肝癌细胞与胚胎肝细胞microRNA差异表达谱的研究被引量：3
- 2009年
- 目的建立大鼠肝癌细胞与大鼠胚胎肝细胞microRNA（miRNA）表达的差异谱，为研究miRNA在肝细胞癌变发生机制中的作用提供新线索。方法化学致癌剂二乙基亚硝胺（DEN）建立近交系F334大鼠肝癌模型，体外原代培养大鼠肝癌细胞和正常F334大鼠胚胎肝细胞，TRIzol法抽提细胞总RNA，进一步制备Hy3荧光标记的miRNA；利用ExiqonmiRNA基因芯片技术，采用含2056条探针的哺乳动物miRNA表达谱芯片对两组之间差异表达的miRNA进行分析，其实验数据用SAM3．0软件进行差异显著性分析。结果原代培养可获得稳定传代的肝癌细胞及胎肝细胞，两者在形态上无明显差异；miRNA芯片共获得78个差异表达的miRNAs，其中68个表达E调（foldchange〉2），10个表达下调（foldchanged 0．5）．部分miRNAs与肿瘤关系密切，其中hsa-miR-21为肝癌癌变相关miRNA。结论正常肝细胞中存在着与肝细胞癌变及侵袭、转移相关的miRNAs，miRNAs的表达具有明显的时序性，其表达特征的改变可能导致了肝癌的发生。
- 吴印涛李韧刘卫辉张福琴窦科峰
- 关键词：MIRNA芯片胎肝细胞
- 肝豆状核变性诊疗进展被引量：7
- 2009年
- 肝豆状核变性(wilsonsdisease,WD)是一种常染色体隐性遗传病,肝脏对铜代谢的异常导致铜在肝脏、神经系统等组织器官内堆积,因此,该病主要表现为肝脏、神经系统的损伤以及精神的异常.WD基因的发现使我们更好的理解了WD发病的分子机制,从而使得对该病的基因诊断成为可能.肝移植给内科治疗无效以及暴发性肝衰竭的WD患者带来了治愈的希望.我们主要从基因诊断和肝移植角度回顾近年来WD诊疗的新进展.
- 杨建栋窦科峰
- 关键词：肝豆状核变性基因诊断肝移植
