“重大新药创制”科技重大专项(2013ZX09402-302-215)
- 作品数：9 被引量：17H指数：3
- 相关作者：吴兵赵志强孔素娟王晶刘方蕾更多>>
- 相关机构：兰州生物制品研究所有限责任公司阿拉巴马大学中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：“重大新药创制”科技重大专项甘肃省科技重大专项计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 脑膜炎球菌疫苗血清学评价的相关研究进展被引量：3
- 2014年
- 研究证明,脑膜炎球菌荚膜多糖、多糖蛋白结合物以及外膜蛋白等物质都能够诱导产生抗体,帮助保护机体抵御脑膜炎球菌疾病。阐述了脑膜炎球菌疫苗研制过程中特异性抗体的检测方法以及在疫苗效果评价中的意义,指出在脑膜炎球菌疫苗的效果评价中,抗体含量以及功能性抗体活性的检测是重要指标,为疫苗的市场应用提供了依据。
- 刘佳赵志强谢贵林
- 关键词：脑膜炎球菌疫苗抗体酶联免疫吸附试验
- C群脑膜炎球菌结合物小鼠免疫原性的研究被引量：1
- 2016年
- 目的比较C群脑膜炎球菌多糖蛋白质结合物(简称结合物)的相对分子质量大小和免疫剂量对其在小鼠体内免疫原性的影响,为结合物的分子大小的质控和结合疫苗成品免疫剂量的选择提供实验依据。方法利用CDAP活化法制备C群脑膜炎球菌结合物,通过硫酸铵盐析进行纯化,然后利用Sepharose CL-4B凝胶过滤层析分析,并根据化学检测结果将结合物分为KD0-0.2(组分1)、KD0.2-0.4(组分2)、KD0.4-0.7(组分3)等3个不同相对分子质量组分,每份分别采用1.0μg、0.2μg的免疫剂量免疫小鼠,并对血清进行ELISA分析。结果采用1.0μg免疫剂量时,3种不同相对分子质量的C群脑膜炎球菌结合物均能产生较高水平的抗体,具有典型的加强效应,第2剂免疫即可产生高水平的抗体,而第2、3剂免疫后的抗体水平差异无统计学意义;采用0.2μg免疫剂量时,三种不同相对分子质量的C群脑膜炎球菌结合物只有在第3剂免疫后才能产生较高水平抗体,第1、2剂免疫后的抗体水平差异无统计学意义,组分1和组分2在第3剂免疫后产生的抗体水平优于组分3;对于相同相对分子质量结合物,用1.0μg免疫小鼠产生的抗体水平优于0.2μg免疫组,而且有显著的统计学意义。结论高剂量时,多糖相对分子质量大小对C群脑膜炎球菌结合物的免疫原性没有显著性影响;低剂量时,小相对分子质量结合物对其免疫原性有影响。同等相对分子质量时,1.0μg比0.2μg的免疫剂量可以激发更高的抗体水平。
- 孔素娟袁菲王欣茹王晶刘爱萍于旭博吴兵罗树权侯亚莉谢贵林
- 关键词：免疫剂量免疫原性免疫应答
- 脑膜炎球菌结合疫苗制备过程中各阶段产物的细菌内毒素含量分析被引量：2
- 2014年
- 目的:以细菌内毒素检查法(动态浊度法)对脑膜炎球菌结合疫苗生产过程中各阶段产物进行细菌内毒素含量分析,观察疫苗生产过程细菌内毒素来源及其变化,为今后疫苗生产过程中细菌内毒素质量控制提供依据。方法:在对供试品处理和方法的标准化的基础上,以《中华人民共和国药典》2010年版三部所录动态浊度法对疫苗不同生产阶段的过程产物和疫苗成品进行全面监控。结果:影响脑膜炎球菌结合疫苗细菌内毒素含量的主要来源为原料多糖和载体蛋白质,疫苗制备过程可以很好控制细菌内毒素含量。结论:疫苗生产过程可以有效控制疫苗的细菌内毒素含量,降低疫苗中的细菌内毒素含量可从原料着手,对多糖和载体蛋白质纯化工艺改进,进而控制疫苗的细菌内毒素含量至更低水平以提高疫苗的安全性。
- 吴兵于旭博刘方蕾孔素娟袁菲范锋锋李燕婷宣俊文赵庆萱吕存女谢贵林赵志强
- 关键词：脑膜炎球菌结合疫苗
- C群脑膜炎球菌家兔免疫血清的制备及其群特异性和相关方法专属性分析被引量：4
- 2014年
- 目的制备C群脑膜炎球菌家兔免疫血清,并进行群特异性和相关方法专属性分析。方法用制备的C群脑膜炎球菌菌液免疫青紫兰家兔,经耳缘静脉注射8×109个/ml菌液,0.5~1.0 ml/只,每周1、3、5免疫,共免疫4周,于第6周开始加强免疫,每周2次,连续3周,于末次免疫1周后,经颈动脉采血,分离血清,采用免疫双扩散法检测血清效价。采用ELISA、Western blot及火箭免疫电泳法分析其群特异性和相应方法专属性。结果建立了家兔免疫血清制备方法,制备的3份（1、2、3）免疫血清相应多糖抗体效价分别为1︰8、1︰8和1︰16。自制免疫血清1、3在使用工作浓度下,符合免疫学质量控制ELISA方法的特异性和专属性要求。自制免疫血清3可作为C群脑膜炎球菌结合物Western blot检测的Anti-PS血清,在该检测灵敏度下可完全达到与破伤风类毒素（TT）无交叉反应;血清1、2的轻微交叉反应可通过相应抗原预吸收血清消除,从而达到结合物Western blot检测的Anti-PS使用要求。自制3份免疫血清均可用于火箭免疫电泳分析。结论自制的家兔免疫血清可替代商品诊断血清,并达到了ELISA、Western blot及火箭免疫电泳法群特异性和相应方法专属性要求,可用于对C群脑膜炎球菌结合物制备过程的多糖抗原性分析及结合疫苗质量控制。
- 刘方蕾吴兵侯亚莉杨英英王晶于旭博范锋锋孔素娟袁菲赵志强谢贵林
- 关键词：脑膜炎球菌免疫血清特异性专属性
- 间苯二酚显色法测定唾液酸含量的影响因素被引量：2
- 2016年
- 目的探讨间苯二酚显色法测定唾液酸含量的影响因素,保证试验结果的一致性和准确性。方法按照《中国药典》2015版(三部)规定的唾液酸含量测定方法,分析单糖和二糖、载体蛋白质、不同溶液及化学试剂对该方法测定结果的影响;比较加热时间、加入有机相后的放置时间对检测结果的影响。结果选用的不同单糖和二糖中,蔗糖对试验的影响最大,低中高浓度时吸光值分别为0.065、0.196、0.420;其次是核糖,3种浓度的吸光值分别为0.037、0.113、0.187;高浓度的半乳糖、葡萄糖和乳糖的吸光值在0.02左右,对试验结果有一定影响,低浓度时对试验的影响可以忽略不计。N-乙酰甘露糖胺在低中高浓度时对结果均无影响。破伤风类毒素、重组绿脓杆菌外毒素A、小牛血清白蛋白、白喉类毒素对检测结果无影响,在500μg/m L质量浓度时吸光值均在0.008以下。选用的不同溶液对试验均无影响。选用的化学试剂中乙醇、低浓度的碳二亚胺以及己二酰肼对试验结果均无干扰,丙酮和脱氧胆酸钠均会对试验造成较大影响。反应液的吸光值随着加热时间的延长而增加,吸光值随着放置时间的延长而降低;第一小时内吸光值下降9%左右。结论在质控过程中,这些外源物质及操作过程对唾液酸含量测定结果有一定影响,应严格按照质量控制标准执行操作。
- 孔素娟于旭博袁菲王晶刘爱萍李阿妮吴兵谢贵林
- 关键词：唾液酸分光光度法影响因素
- 人血清中A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖IgG抗体含量ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2014年
- 目的建立人血清中抗A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖Ig G抗体含量的ELISA定量检测方法,并进行验证。方法筛选适用的酶标板,优化抗原包被浓度,确定ELISA检测过程的关键条件,对建立的ELISA方法的特异性、线性、准确性、精密度、最低检测值和稳定性进行验证,并建立实验室质控血清的质控检测范围。结果酶标板的板内CV为9.8%,板间CV为16.4%,符合检测使用要求。免疫血清经多糖吸收后,群特异性抗体含量与同群多糖吸收剂量呈明显的剂量依赖关系。12份美国CDC质控血清中各群Ig G抗体含量与血清的稀释度呈负相关,相关系数（r）和斜率（slope）均接近-1,线性关系良好;检测结果与CDC公布数据一致性良好,一致性相关系数A、C、W135、Y群分别为0.912 5、0.939 6、0.963 7和0.920 6,准确度较好。实验室内部质控血清Men20中各群Ig G抗体含量试验内和试验间精密度分别小于10%和20%,精密度较好;各血清群别的CV值均〈30%,稳定性较好;A、C、Y、W135群多糖Ig G抗体含量最低检测值分别为0.092、0.118、0.067和0.035μg/ml,质控血清的检测范围分别为：92.49~36.53、37.29~17.69、66.18~25.54和50.15~23.31μg/ml。结论建立了标准化的检测人血清中抗A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖Ig G抗体含量的定量ELISA方法,并确定了实验室日常用质控血清Men20的质控检测值范围。
- 王欣茹赵志强李亚南刘方蕾于旭博孔素娟范锋锋林纪胜叶强谢贵林
- 关键词：脑膜炎球菌荚膜多糖酶联免疫吸附试验
- 脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖合成及相关基因的研究进展被引量：2
- 2016年
- 脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm)是流行性脑脊髓膜炎的主要致病菌,荚膜多糖(Capsular polysaccharides,CPS)是该菌主要的致病因子。近年来,随着基因组学与分子生物学的不断发展,CPS合成相关基因越来越受到关注。重点对Nm CPS的合成及相关基因作用作一综述。
- 于飞飞应莲芳张海红
- 关键词：脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖基因
- 成人免疫ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后血清中抗体水平的动态分析
- 2014年
- 目的：从血清抗体体外杀菌功能和IgG含量角度观察健康成人接种一剂ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后不同时间体内抗体的动态水平，探讨抗体功能和含量的相关性和疫苗的保护期限。方法对20名健康成人接种一剂四价脑膜炎多糖疫苗，分别采集免疫前和免疫后不同时期的血清。采用血清杀菌试验（SBA）和标准定量酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中杀菌抗体滴度和抗荚膜多糖IgG抗体含量。结果成人免疫前血清中存在一定水平的抗A、C、Y和W135群荚膜多糖抗体，并且除C群外，血清中针对A、Y和W135群球菌的杀菌抗体滴度都较高。免疫15d后，各群荚膜多糖抗体的含量和血清杀菌抗体滴度都较免疫前有了明显的升高（P＜0．05），并且在30～160d维持在较高的水平；免疫后近3年时杀菌抗体滴度和IgG抗体浓度降至免疫前水平。血清杀菌抗体滴度和IgG抗体浓度之间相关关系较弱（r＜0．3，P＞0．05），但免疫前后不同时间的受试者的血清杀菌抗体几何均数滴度（GMTs）和IgG抗体几何均数浓度（GMCs）之间具有良好的相关关系（r＞0．7，P＜0．05）。结论受试者免疫前后不同时间血清杀菌抗体GMTs和IgG抗体GMCs，在评价疫苗效果时具有一致性。接种ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗有效期大约3年。
- 王欣茹赵志强王浩刘佳刘爱萍于旭博何彦林乔瑞洁林纪胜谢贵林
- 关键词：酶联免疫吸附试验
- 差异火箭免疫电泳定量检测四价脑膜炎球菌结合疫苗游离多糖方法的建立及验证被引量：3
- 2015年
- 目的建立差异火箭免疫电泳（differential rocket immunoelectrophoresis,DRIEP）定量检测四价脑膜炎球菌结合疫苗游离多糖的方法,并对该方法进行验证。方法制备非均一性抗体琼脂糖凝胶,建立脑膜炎A群、C群、Y群、W135群游离多糖的DRIEP定量检测法,并对该方法的专属性、分离效果、线性、重复性及稳定性进行验证。分别采用DRIEP法及DOC沉淀化学法对11批各群脑膜炎球菌单价结合物进行检测。结果各群多糖抗原只与其相应特异性抗体发生结合,无交叉反应;各群结合物或混合物中的TT可完全与多糖分离;A群、W135群游离多糖定量对照品在2.5~20μg/ml范围内,C群、Y群游离多糖定量对照品在2~10μg/ml范围内,与沉淀峰高度呈良好线性关系,R2均〉0.99;各群单价结合物的9次检测结果的CV值均〈15%;多价脑膜炎球菌结合疫苗中各群游离多糖含量均比较接近。DRIEP法检测值较DOC沉淀化学法高约1/2倍,但两种方法检测结果的高低趋势具有相似性。结论DRIEP法可用于四价脑膜炎球菌结合疫苗中游离多糖的定量检测,提高了该疫苗的质控水平。
- 侯亚莉于旭博刘方蕾杨英英吴兵刘佳王晶毛睿谢贵林
