国家自然科学基金(30972825)
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
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- 荧光染料CFSE差异浓度标记活细胞体内示踪方法被引量：2
- 2010年
- 背景:利用荧光染料标记活细胞体内示踪的方法较多,但是应用荧光染料浓度差异实现不同细胞体内示踪的方法目前仍不成熟。目的:观察不同浓度荧光活性染料CFSE标记的小鼠脾细胞体内示踪情况,建立稳定的单染料差异浓度标记活细胞的体内示踪方法。方法:取C57BL/6J及BALB/c小鼠脾脏制备脾细胞单细胞悬液,分别用不同浓度CFSE染色后制备1∶1混合细胞悬液;锥虫蓝染色鉴定细胞活性;将染色的混合细胞输注BALB/c小鼠后不同时间点,流式细胞仪检测小鼠外周血两种荧光细胞的比例。结果与结论:CFSE标记的小鼠脾细胞活力良好,荧光显微镜下见全部细胞标记后均发绿色荧光,形态正常,CFSE标记阳性率为95%。CFSE染色时,在浓度相差20倍时流式直方图才显示为两个完全独立的峰,即CFSE低浓度用0.3μmol/L高浓度用6μmol/L。异基因的C57BL/6J脾细胞在输注1d后就快速消失,而同基因BALB/c脾细胞能够在BALB/c小鼠外周血中长期存在,但是两种细胞荧光强度均未见降低,说明荧光染料CFSE差异浓度标记活细胞进行体内示踪是一种稳定的示踪方法。
- 蒋泽生高毅
- 关键词：CFSE
- 供体特异性体内免疫状态的定量检测被引量：2
- 2010年
- 背景:由于免疫反应的复杂性,目前的免疫学检测方法均有其局限性,虽然各种检测技术精确程度不断提高,但是单一指标不足以判断机体复杂的免疫状态。建立一种在多指标基础上的联合评估模式来监测移植后受体免疫状态是当前需要解决的难题。目的:建立具有供体抗原特异性的体内免疫状态定量检测方法,探索该方法的流式检测技术参数、荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点。方法:取C57及BALB/c小鼠脾脏制备脾细胞单细胞悬液,分别用不同浓度活细胞染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色后制备1∶1混合细胞悬液,按混合细胞输注C57→BALB/c小鼠皮肤移植排斥模型,分别于输注后1,2,4,10h,1,2,3,6d应用流式细胞仪检测外周血两种荧光细胞的比例变化,同时设未移植BALB/c小鼠为对照,探索CFSE荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点,按公式计算供体特异性细胞杀伤率。结果与结论:供体特异性体内免疫状态定量检测方法流式检测设定在淋巴细胞门,两种细胞CFSE的染色浓度差控制在20倍左右,输注细胞总数在一定范围内对结果没有影响,输注细胞后2～4h为最佳检测时间点。提示体内细胞毒性试验是一种简单、准确、稳定的免疫状态体内定量监测方法,可以全面反映小鼠皮肤移植后受体的免疫状态。
- 蒋泽生高毅
- 关键词：皮肤移植小鼠免疫状态
- 食蟹猴单个核淋巴细胞体内荧光示踪方法的建立
- 2014年
- 目的建立食蟹猴单个核淋巴细胞体内荧光示踪方法。探索该方法的细胞采集途径、细胞输注部位和流式检测技术参数。方法从外周血和腋窝淋巴结分别提取分离出单个核淋巴细胞,经CFSE染色后分别将荧光细胞输注食蟹猴外周血和手掌大鱼际下;经过1、2、3 h后从外周血和淋巴结再次提取其中的单个核淋巴细胞,用流式细胞仪检测此样本中荧光细胞数量比例,并优选染色浓度、时长和流式检测技术参数。结果 CFSE最佳染色浓度为1μmol/L,最佳染色时长为15 min;细胞悬液输注1、2、3 h后血管通道组中荧光细胞比例平均值依次为2.37%、0.48%、0.01%,而淋巴管通道中荧光细胞比例显著高于血管通道,平均值依次为12.77%、3.31%、0.07%。结论使用淋巴管道系统进行淋巴细胞的采集示踪,与传统的从血液系统示踪方法比较,可以显著提高可监测靶细胞的数量,可以直观、量化、动态地了解淋巴细胞在体内的变化状态,此方法可重复性高,是一种稳定的食蟹猴体内免疫标记示踪方法。
- 程佩伦钟利民蒋泽生汪艳高毅潘明新
- 关键词：食蟹猴细胞示踪CFSE
- 供体特异性体内免疫状态定量检测方法的研究被引量：2
- 2011年
- 目的建立具有供体抗原特异性的体内免疫状态定量检测方法，探讨该方法的流式检测技术参数、荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点。方法取C57及BALB／C小鼠脾脏制备脾细胞单细胞悬液，分别用不同浓度羧基荧光素乙酰乙酸（CFSE）染色后制备1：1混合细胞悬液，按混合细胞输注C57-BALB／C小鼠皮肤移植排斥模型，不同时间点（分别为输注后1、2、4、10h、1、2、3、6d），流式细胞仪检测外周血两种荧光细胞的比例变化，同时设未移植BALB／C小鼠为对照组，探索CFSE荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点，按公式计算供体特异性细胞杀伤率：％specificlysis=1-donor cells／recipient cells×100％。结果CFSE染色时需要较大浓度差才能完全把两群脾细胞完全分离开，在浓度相差20倍时流式直方图才显示为两个完全独立的峰；即CFSE低浓度用0．3μmol／L，高浓度用6、mol／L。C57-BALB／C皮肤移植排斥模型在皮肤移植后两周即可建立，混合细胞悬液输注后，模型组与对照组输注混合细胞后1、2、4、10h、1、2d特异性杀伤率差异有统计学意义（t=39．5、41．1、26．2、27．4、15，8、5．5，P均〈0．01）。模型组输注后lh和2h杀伤率分别高达（87．4±4．5）％、（92．2±3．9）％。结论供体特异性体内免疫状态定量检测方法流式检测设定在淋巴细胞门，两种细胞CFSE的染色浓度差控制在20倍左右，输注细胞总数在一定范围内对结果没有影响，输注细胞后2—4h为最佳检测时间点，体内细胞毒性实验是一种简单、准确、稳定的免疫状态体内定量监测方法。
- 蒋泽生高毅
- 关键词：脾细胞免疫状态
- 新西兰雌-雄兔皮肤移植模型体内细胞毒性实验
- 2012年
- 背景:建立一种有效的评估模式来监测移植后受者免疫状态是当前的难点。目的:建立兔体内细胞毒性实验方法,验证体内细胞毒性实验能否检测出受体的免疫排斥状况。方法:建立新西兰白兔雌-雄兔皮肤移植模型,另设未作移植的雌、雄兔为对照组。取雌兔及雄兔脾脏制备脾细胞单细胞悬液,分别用不同浓度活细胞染料羟基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色后制备1:1混合细胞悬液。雄兔输注混合细胞后分别于1,2,4,8h抽取外周血,流式细胞仪检测外周血两种荧光细胞的比例变化,计算供体特异性细胞杀伤率。结果与结论:雌-雄兔皮肤移植排斥模型在皮肤移植2周后可建立,混合细胞悬液输注后在模型组和对照组外周血中的比例变化不同,雄兔输注混合细胞后1,2,4,8h的杀伤率模型组高于对照组,差异有显著性意义(P<0.01)。提示体内细胞毒性实验可用于免疫状态监测,可以直观地反映皮肤移植模型的体内特异性免疫环境及移植物所受的免疫攻击强度。
- 梁伟潮蒋泽生汪燕钟利民潘明新
- 关键词：细胞毒性实验移植排斥免疫监测
- 新型免疫状态定量监测皮肤移植模型小鼠的特异性
- 2012年
- 背景:器官移植后如何监测受者的免疫状态,并预测排斥反应的发生,从而调整免疫抑制剂的用量是当前面临的重要问题。目的:探索新型免疫状态定量监测方法在小鼠皮肤移植模型中是否有抗原特异性。方法:建立C57→BALB/c皮肤移植排斥模型,分别输注C57/BALB/c混合脾细胞悬液及第三者对照DBA/BALB/c混合脾细胞,在细胞输注后检测2种混合细胞悬液比例变化及供体细胞杀伤率,同时设置BALB/c→BALB/c同系皮肤移植对照组,免疫低下裸鼠对照组及免疫抑制剂对照组与之对比。结果与结论:C57/BALB/c悬液-移植排斥模型组和C57/BALB/c悬液-移植排斥模型免疫抑制剂组小鼠对供体C57脾细胞有强烈的特异性杀伤作用,其中C57/BALB/c悬液-移植排斥模型免疫抑制剂组特异性杀伤作用稍弱,而输注第三者对照DBA/BALB/c混合脾细胞的小鼠细胞注射2～4h内没有明显特异杀伤作用,但免疫低下的裸鼠始终未表现出特异性杀伤。说明实验建立的抗原特异性免疫状态检测方法能够快速地检测出皮肤移植受体的免疫状态。
- 潘明新钟利民汪艳高毅蒋泽生
- 关键词：细胞毒性试验移植排斥细胞示踪免疫监测
