广东省医学科学技术研究基金(B2009159)
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 相关作者：陈镇洲姜晓丹徐如祥汤浩项永生更多>>
- 相关机构：南方医科大学北京军区总医院暨南大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 构建人端粒酶催化亚单位基因慢病毒表达载体转染人骨髓基质细胞
- 2012年
- 背景:骨髓基质细胞不表达端粒酶,因而在体外传代扩增过程中端粒长度逐渐缩短,导致细胞衰老,这是限制其用于细胞治疗应用的一个重要因素。目的:构建人端粒酶催化亚单位基因慢病毒表达载体,探讨以慢病毒介导的人端粒酶催化亚单位基因修饰人骨髓基质细胞的可行性。方法:以pReceiver-M02-hTERT质粒为模板PCR扩增获得目的基因。用BP重组系统将目的片段重组到载体pDONR221上。然后使用LR重组系统将目的序列重组到载体pLenti6.3/V5-DEST上。将重组载体与包装质粒充分混合,利用脂质体共转染293FT细胞获得慢病毒颗粒。结果与结论:成功构建人端粒酶催化亚单位慢病毒表达载体,病毒的平均物理滴度为1.07×1012LP/L。以之转染人骨髓基质细胞,目的基因表达水平有显著提升,细胞正确表达人端粒酶反转录酶蛋白。说明以慢病毒介导的人端粒酶催化亚单位基因修饰人骨髓基质细胞能强化细胞表达人端粒酶催化亚单位。
- 陈镇洲
- 关键词：人端粒酶催化亚单位人骨髓基质细胞慢病毒转染
- 慢病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因修饰人骨髓基质细胞被引量：1
- 2011年
- 背景:原代细胞的转染效率低下一直是制约其发展的主要因素之一,慢病毒转染以其独特的优势成为各种干细胞基因修饰良好的转染方法。目的:验证慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白基因修饰人骨髓基质细胞的可行性。方法:将携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒在含血清或无血清条件下按不同的MOI值分别转染人骨髓基质细胞,长期观察荧光蛋白表达情况。将经修饰的细胞通过立体定向移植入大鼠纹状体内,观察移植细胞的存活及目的基因的表达情况。结果与结论:基因转染48h后,可见人骨髓基质细胞成功表达绿色荧光蛋白,无血清条件下的转染效率高于含血清条件下的转染效率,转染成功的细胞在体外持续培养2个月以上未见明显的荧光消减。转染后的细胞可在大鼠纹状体存活并持续表达绿色荧光蛋白2个月以上。提示慢病毒是一种高效的转染人骨髓基质细胞的载体,慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白基因转染可以作为人骨髓基质细胞的示踪标志用于体内移植研究。
- 汤浩项永生秦玲莎姜晓丹徐如祥陈镇洲
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白人骨髓基质细胞慢病毒转染
- CatWalk步态分析系统分析大鼠大脑中动脉阻塞模型的行为学特征被引量：6
- 2011年
- 目的探讨以CatWalk步态分析系统对大鼠暂时性大脑中动脉阻塞（MCAO）模型进行行为学评价的可行性。方法30只SD雄性大鼠按随机数字表法分为MCAO模型组和对照组，其中模型组以线栓法制作成暂时性MCAO模型。分别于模型制作后第1、3、7、14、28天应用传统的18分制mNSS评分以及CatWalk步态分析系统对2组大鼠进行行为学特征分析。结果CatWalk结果显示MCAO模型组大鼠的四肢压强、接触面积和运行速度均比对照组大鼠减小减慢；存协调性方面，模型组大鼠造模后第3天时同为后侧的左后肢→右后肢的时间较对照组明显缩短，且其同为左侧的左前肢→左后肢的时间亦较对照组明显缩短，这一变化在第28天时仍然存在：在造模后第3天模型组出现了在对照组中并未见到的Ra型（1．5％）和Rb型f2-3％）步序；但步渊、站立时间、抬爪时间和规律指数等参数在2组间差别不明显。结论CatWalk步态分析系统在压强、速度、接触面积、步态以及协调性等方面可反映脑缺血造成的损伤及其随时间变化的过程，可用于动物模型的多种行为学特征的综合分析。
- 汤浩项永生郭阳蔡颖谦姜晓丹陈镇洲徐如祥
- 关键词：脑缺血行为学评价
