山西省青年科技研究基金(20031061)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：山西医科大学中国医学科学院北京协和医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人胰岛素突变体基因的融合表达
- 2004年
- 目的 以 pTXB1作为融合表达载体 ,构建人胰岛素突变体 (M insulin)的基因表达克隆 ,表达及纯化。 方法 基因合成胰岛素突变体的cDNA序列 ,酶切后装入融合表达质粒 pTXB1,基因测序正确后转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,诱导表达 ,初步纯化。结果 融合蛋白的分子量约为 330 0 0 ,表达量占菌体总蛋白的 5 0 %以上。融合蛋白主要以包涵体的形式存在 ,洗涤包涵体后融合蛋白的纯度达到 85 %以上。Western blot表明表达蛋白具有胰岛素抗原活性。活性测定显示 ,每升诱导培养后的菌液表达产物中 ,具有的放射免疫活性为 0 .5U。结论 成功地构建了人胰岛素突变体的融合表达体系 ,为进一步的研究奠定了基础。
- 于保锋解军陈显久常冰梅张悦红胡晓年牛勃程牛亮
- 关键词：人胰岛素突变体克隆基因
- 脂质体介导的肝细胞生长因子基因在脐静脉内皮细胞中的表达与鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的构建含肝细胞生长因子(HGF)基因真核表达载体pEGFP-N1-HGF,观察HGF基因在人脐静脉内皮细胞中的表达。方法由重组质粒pRc/CMV-HGF中扩增出HGF基因,将其克隆到含增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N1中,应用脂质体将重组质粒pEGFP-N1-HGF转染到人脐静脉细胞株ECV304中,G418筛选获得稳定表达克隆,采用荧光显微镜观察、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学方法鉴定。结果经G418筛选后可形成抗性细胞克隆;荧光显微镜下观察到有绿色荧光;RT-PCR能扩增出HGFmRNA预期的699bp片段;免疫细胞化学证实转染HGF基因的细胞有HGF蛋白的表达。结论重组质粒pEGFP-N1-HGF能够在细胞株ECV304转录、表达。
- 常冰梅李美宁解军张悦红程牛亮牛勃赵荣瑞
- 关键词：脂质体肝细胞生长因子内皮细胞
