河北省自然科学基金(C2005000804)
- 作品数：13 被引量：66H指数：6
- 相关作者：王莉李冬秀刘丽萍梁红霞刘博君更多>>
- 相关机构：中国人民解放军白求恩国际和平医院河北医科大学第四医院河北省人民医院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗人可溶性间皮素相关蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定被引量：11
- 2007年
- 目的:制备鼠抗人可溶性间皮素相关蛋白(SMR)的单克隆抗体(mAb),鉴定其生物学特性。方法:应用计算机通过综合预测对间皮素(MSLN)进行B-细胞表位预测。合成相应肽段并免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,利用免疫细胞化学和Western blot分析对所制备的mAb进行鉴定。结果:综合预测方法分析间皮素的抗原表位可能于153-162、282-292及471-481氨基酸残基或其附近,选择性合成了可能性最高的位于471-481氨基酸残基的可溶性间皮素相关蛋白表位,制备了mAb(2H10),经免疫细胞化学和Western blot分析该抗体具有较高的特异性。结论:成功地制备了鼠抗人可溶性间皮素相关蛋白的mAb(2H10),该抗体具有较高的特异性,为进一步利用ELISA对可溶性间皮素相关蛋白进行检测奠定了基础。
- 陈书成刘雅坤吴小华单保恩陈兴孙东霞王莉
- 关键词：间皮素B细胞表位单克隆抗体
- 血清可溶性间皮素相关肽在卵巢良恶性肿瘤鉴别诊断中的应用被引量：4
- 2012年
- 目的探讨血清可溶性间皮素相关肽(SMRP)在卵巢良恶性肿瘤鉴别诊断中的临床意义。方法血清标本取自2008年1月至2010年7月白求恩国际和平医院100例卵巢肿物患者及40例健康志愿者,ELISA试剂盒测定血清SMRP,化学发光法测定血清CA125,比较血清SMRP和CA125在卵巢良恶性肿瘤中的分布,绘制SMRP的ROC曲线,确定最佳截断值,评价诊断效能。结果卵巢癌组血清SMRP高于良性肿瘤组和健康对照组(P=0.000),良性肿瘤组与健康对照组相比差异无统计学意义(P=0.072)。SMRP的最佳截断值为1.103nmol/L,敏感度(77.27%)稍低,但特异度(97.92%)明显高于CA125。与临床诊断一致性方面,SMRP略优于CA125。结论血清SMRP可能是卵巢良恶性肿瘤鉴别诊断的良好指标。
- 刘丽萍吴小华梁红霞李冬秀
- 关键词：卵巢肿瘤
- siRNA介导的间皮素基因沉默对卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤生长的影响被引量：7
- 2010年
- 目的:研究间皮素(mesothelin,MSLN)基因被沉默后的卵巢癌细胞SKOV3-MSLN-shRNA增殖能力的变化,以及MSLN基因沉默对裸鼠卵巢癌腹腔移植瘤生长的影响。方法:利用针对MSLN基因的siRNA慢病毒液和对照组慢病毒液分别感染SKOV3细胞,建立SKOV3-MSLN-shRNA细胞和SKOV3-MSLN-neg细胞的稳定转染株;以SKOV3细胞作空白对照,用平板克隆形成法和细胞计数法检测3组细胞的增殖能力。应用3组细胞分别建立裸鼠卵巢癌腹腔移植瘤模型,2周后处死裸鼠,观察每组动物的成瘤率及每只裸鼠的肿瘤质量、肿瘤数目和肿瘤种植部位等。结果:SKOV3-MSLN-shRNA细胞的体外增殖能力明显低于SKOV3-MSLN-neg细胞和SKOV3细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。SKOV3-MSLN-shRNA组裸鼠成瘤率为60%,而2个对照组SKOV3-MSLN-neg和SKOV3细胞的裸鼠成瘤率均为100%,差异无统计学意义(P>0.05)。SKOV3-MSLN-shRNA组动物的肿瘤数目、肿瘤质量及肿瘤种植部位明显低于2个对照组(P<0.05)。结论:MSLN基因沉默可以降低卵巢癌SKOV3细胞的体外增殖能力,同时可以抑制卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的生长和种植。
- 李冬秀吴小华张蕾王莉曹瑾刘博君
- 关键词：基因沉默异种移植模型抗肿瘤试验间皮素
- 卵巢癌患者血清SMRP和HE4的表达及其临床意义被引量：8
- 2011年
- 目的探讨血清可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)和人附睾蛋白-4(HE4)在卵巢癌早期诊断及病情监测中的临床意义。方法血清标本取自44例卵巢癌、56例良性肿瘤及40例健康志愿者。ELISA试剂盒测定血清HE4和SMRP,化学发光法测定CA125。结果卵巢癌组血清CA125、HE4和SMRP高于其他两组。经过理想肿瘤减灭术的卵巢癌术后1 w血清CA125、HE4和SMRP水平明显减低。在诊断效能上,单独检测HE4特异度为100.00%,灵敏度86.36%;SMRP灵敏度77.27%,特异度97.92%;二者与CA125联合检测均可提高灵敏度或特异度。结论 HE4和SMRP补充完善了CA125用于卵巢癌的早期诊断和病情监测,具有较高的临床应用价值。
- 刘丽萍吴小华梁红霞
- 关键词：卵巢肿瘤
- 血清间皮素在卵巢上皮性癌诊断和病情监测中的价值被引量：2
- 2010年
- 间皮素（mesothelin）是一种肿瘤细胞表面的糖蛋白抗原，通常只在体腔表面的间皮细胞、恶性间皮瘤、卵巢上皮性癌（卵巢癌）、胰腺癌中表达。间皮素的cDNA编码相对分子质量为71000的多肽前体，此前体可以被酶解成两部分，一部分40000的片段通过糖基磷脂酰肌醇锚定于细胞表面称作间皮素，位于细胞膜上的间皮素经过进一步的酶修饰，形成两个异构体，其中一个异构体可以从细胞表面脱落，
- 李冬秀吴小华刘博君曹瑾吴艳霞郝明
- 关键词：卵巢上皮性癌间皮素病情监测肿瘤细胞表面血清
- 慢病毒介导的RNAi对卵巢癌细胞增殖及间皮素表达的影响被引量：8
- 2008年
- 目的:构建间皮素(mesothelin,MSLN)RNAi重组慢病毒质粒,探讨其对卵巢癌OVCAR-3细胞MSLN的表达及细胞增殖的影响。方法:根据MSLN基因信息,设计了4个小干扰序列和1个阴性对照序列,利用慢病毒质粒载体pRNAT-U6.2/Lenti构建了5个重组质粒并进行了慢病毒包装,分别为LV-MSLN-negative、LV-MSLN-shRNA2、LV-MSLN-shRNA3、LV-MSLN-shRNA4;感染OVCAR-3细胞后,Westernblotting和荧光免疫组化检测干扰效率,选择干扰效率高的质粒载体进行慢病毒大量包装;感染卵巢癌细胞OVCAR-3后,用细胞增殖实验和平板克隆形成实验检测细胞增殖的变化。结果:测序结果证明5种质粒载体的插入序列完全正确,鉴定证明慢病毒包装成功。慢病毒感染OVCAR-3细胞后,Westernblotting证实重组慢病毒LV-MSLN-shRNA4的干扰效率最高,对MSLN蛋白表达的抑制达90%。荧光免疫组化的共聚焦照片显示干扰组(OVC-shRNA)定位于细胞膜的MSLN蛋白表达明显弱于阴性对照组(OVC-neg)和空白对照组(OVC)。OVC-shRNA组细胞增殖[(11.2±1.3)×105]显著慢于OVC-neg组[(20.5±2.5)×105]和OVC组[(21.9±2.3)×105](P<0.05)。OVC-shRNA组克隆形成率为(15.2±2.1)%,明显低于OVC-neg组[(27.9±2.5)%]和OVC组[(28.8±3.1)%](P<0.05)。结论:成功构建MSLNRNAi重组慢病毒质粒LV-MSLN-shRNA4,它能有效抑制卵巢癌OVCAR-3细胞的MSLN表达及细胞增殖,为进一步研究MSLN应用于肿瘤基因治疗奠定了基础。
- 王莉李娜吴小华
- 关键词：间皮素RNA干扰慢病毒细胞增殖
- 人卵巢癌动物模型中循环无细胞DNA含量与瘤负荷及细胞凋亡的关系
- 2010年
- 目的研究循环无细胞DNA(cfDNA)的来源,探讨血清cfDNA水平在卵巢上皮性癌临床诊断及病情监测中的意义。方法利用裸鼠制备人卵巢癌细胞荷瘤模型及腹水模型,并对部分裸鼠实施化疗。应用半定量PCR法检测裸鼠血清及腹水中ALU115、ALU247以及CA125-cfDNA含量,TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况,并且对荷瘤裸鼠化疗前后血清cfDNA水平变化进行检测。结果 cfDNA在各组荷瘤裸鼠的血清及腹水中均有表达,在腹水中的表达值与同一个体血清中含量相比没有显著性差异。血清cfDNA水平与瘤负荷成正相关。cfDNA在化疗后1d达最大值,而后缓慢下降,在化疗10d其值明显低于化疗前水平。化疗前后cfDNA与肿瘤细胞的凋亡率呈正相关。结论血清cfDNA来源于肿瘤细胞,并与细胞凋亡和坏死有关,可能为卵巢上皮性癌的诊断及病情监测提供理论依据。
- 杨波吴小华于利洁崔洪银
- 关键词：卵巢上皮性癌凋亡
- 卵巢上皮性肿瘤组织中间皮素和CA_(125)表达及其相关性研究被引量：25
- 2005年
- 吴小华王小玲张立芳李利王永军郭燕红郭清杨波黎海莉
- 关键词：血清CA125卵巢上皮性癌肿瘤组织皮素CDNA微阵列
- 间皮素和CA125在卵巢上皮性肿瘤中的共定位表达及临床意义被引量：12
- 2009年
- 目的:研究上皮性卵巢癌OVCAR-3等细胞株和人卵巢肿瘤组织中间皮素(mesothelin,MSLN)和CA125的表达及定位,探讨2者之间的共定位关系及临床意义。方法:利用免疫组织化学法和间接免疫荧光双标记染色法检测人卵巢癌细胞株和卵巢上皮性肿瘤组织中间皮素和CA125的定位及表达。结果:免疫组织化学法和双标记免疫荧光细胞化学染色结果提示,间皮素和CA125在卵巢癌细胞及组织中均主要分布在细胞膜上,二者完全重叠,为共定位表达。卵巢上皮性癌组织中间皮素蛋白表达的荧光值为1639.20±181.92,显著高于交界性卵巢上皮性肿瘤(590.85±126.95)、卵巢良性上皮性肿瘤(227.69±26.54)和正常卵巢皮质表面上皮(213.00±24.37),差异有统计学意义(P<0.05);病理分级中G2、G3级的蛋白表达量分别为1642.63±44.58和1701.57±54.73,明显高于G1级的1553.99±57.20(P<0.05);组织学类型中浆液性囊腺癌和子宫内膜样癌的蛋白表达量分别为1723.81±33.20和1673.81±70.27,明显高于黏液性囊腺癌的1466.12±94.93(P<0.05);间皮素的蛋白表达与患者年龄、病理分期及血清CA125的水平均无显著相关性(P>0.05)。结论:卵巢上皮性癌组织中间皮素和CA125高表达,且存在共定位表达关系。间皮素表达与卵巢肿瘤的良恶性以及卵巢癌的分级和类型有关。
- 王莉李娜吴小华刘雅坤崔宏银李冬秀
- 关键词：卵巢肿瘤组织细胞化学间皮素CA125
- 间皮素对卵巢上皮性癌细胞生长、粘附和侵袭能力的影响被引量：6
- 2010年
- 目的:探讨环境间皮素对卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞增殖能力及侵袭粘附能力的影响。方法:用含不同浓度间皮素蛋白的1640培养基培养卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞,培养至12,24,36,48h,利用MTT和平板克隆形成实验测定其增殖情况;粘附试验测定细胞粘附能力、Transwell小室体外细胞转移侵袭装置测定SKOV3和OVCAR3的迁移、侵袭能力的改变。结果:间皮素可增强细胞的生长增殖能力,影响卵巢癌细胞的体外粘附、迁移和侵袭能力,间皮素干预组的细胞粘附率、迁移率和侵袭率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:间皮素增强卵巢癌细胞的生长增殖能力及粘附、迁移和侵袭能力。
- 李冬秀吴小华曹瑾陈晶刘博君
- 关键词：间皮素卵巢肿瘤细胞系
