为了及时、准确地诊断母奶牛妊娠状态,研究建立了奶牛孕酮(P4)胶体金免疫层析法的快速检测技术。先制备完全抗原(P4-BSA),用其免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,抗体经亲和纯化后测定其浓度。采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒直径为15 nm的胶体金,以P4-OVA和羊抗鼠二抗分别作为检测带和质控带包被在硝酸纤维素膜上,将金标记抗体喷涂在玻璃纤维垫上,制成免疫层析快速检测试纸条,通过可见的颜色显示检测样品中孕酮状况。结果表明:试纸条法的奶牛孕酮最低检测限为40 ng/mL,检测时间为3～5 m in,适用于奶牛妊娠早期孕酮水平的快速检测。
