安徽省杰出青年科学基金(1308085QC56)
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
- 相关作者：曹树青陈光朗孙成磊韩娇董万春更多>>
- 相关机构：合肥工业大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金安徽省杰出青年科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 拟南芥AtMYB50和AtMYB61蛋白的原核表达研究被引量：4
- 2014年
- 文章提取拟南芥植株总RNA,通过RT-PCR扩增出AtMYB50与AtMYB61基因cDNA片段,连接到pEASY-Blunt载体上,转化到Trans1-T1感受态细胞内,筛选阳性单克隆进行菌落PCR鉴定并测序验证;利用限制性内切酶双酶切重组载体获得含有黏性末端的目的基因片段,并对原核表达载体pET-32a+和pGEX-4T-1进行完全双酶切,连接目的基因片段后获得重组原核表达载体,将重组原核表达载体转化至大肠杆菌原核表达菌株BL21(DE3);IPTG诱导表达获得目的蛋白,并对蛋白表达条件(诱导时间、诱导温度及IPTG浓度等)进行优化,鉴定表达蛋白水溶性。
- 杜李继顾菊陈光朗孙成磊阳立波曹树青
- 关键词：拟南芥转录因子原核表达
- 拟南芥AtXCD1蛋白的原核表达研究被引量：1
- 2014年
- [目的]研究拟南芥AtXCD1蛋白的原核表达。[方法]构建XCD1原核表达载体,根据NCBI基因序列设计引物,并以PCR扩增得到大量目的片段XCD1,将XCD1连接到原核表达载体pET-32a+,并对重组质粒进行测序鉴定,将重组质粒转化至大肠杆菌原核表达菌株BL21(DE3),对蛋白表达条件:诱导时间、诱导温度和IPTG浓度等进行优化。IPTG诱导表达获得目的蛋白,对蛋白表达条件:诱导时间、诱导温度和IPTG浓度等进行优化。[结果]XCD1序列全长为1 242 bp,与PCR产物大小一致。蛋白XCD1-pET-32a+较适表达条件为在30℃0.1 mmol/L的IPTG诱导1.5 h。[结论]该结果为进一步蛋白纯化及酶活测定试验奠定了基础。
- 陈光朗董万春韩娇樊婷婷杨立波曹树青
- 关键词：原核表达
- 拟南芥bZIP23基因过量表达载体的构建及过表达植株的筛选被引量：1
- 2014年
- [目的]以拟南芥为材料克隆bZIP23基因,构建bZIP23基因的过量表达载体和筛选过表达植株,为验证其功能奠定基础。[方法]提取拟南芥总RNA和RT-PCR克隆bZIP23基因,用限制性内切酶切割和T4 DNA连接酶连接,使bZIP23基因连接到35S强启动子的pART27载体上;将连接产物转化到Trans1-T1感受态细胞中,筛选阳性单克隆进行菌落PCR鉴定并测序验证,获得重组质粒。将该重组质粒电激转化至根瘤农杆菌GV3101菌株,浸花法转化拟南芥野生型植株。[结果]通过单菌落PCR鉴定和DNA测序结果显示,bZIP23基因与35S过量表达载体已连接,获得了重组载体;抗性筛选与遗传鉴定获得相应的转基因过量表达阳性植株。[结论]构建的过量表达载体及筛选得到的过量表达植株为验证bZIP23基因功能奠定了基础。
- 顾菊韩娇董万春阳立波曹树青
- 关键词：转基因植株
- 利用TAIL-PCR技术克隆拟南芥抗旱相关的csm2基因
- 2014年
- 文章在400mmol/L甘露醇的筛选条件下,获得一个T-DNA插入的拟南芥抗旱突变体,命名为csm2-1。采用TAIL-PCR技术获得了T-DNA插入位点的侧翼序列,序列分析证实T-DNA插入基因为At1g07530,该基因编码植物体内的一类GRAS家族的转录调控因子。该研究为进一步阐明GRAS家族基因参与干旱胁迫的分子机制提供新的思路,同时也为植物抗逆分子育种提供候选基因。
- 程丹陈光朗孙成磊阳立波曹树青
- 关键词：抗旱基因克隆拟南芥
