山东省自然科学基金(ZR2010HQ054)
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
- 相关作者：姚庆收武玉永姜吉刚于敏单长民更多>>
- 相关机构：滨州医学院湖北大学更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金中国热带农业科学院橡胶研究所基本科研业务费专项项目山东省高等学校青年骨干教师国内访问学者项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 油菜叶绿体乙酰辅酶A羧化酶单交换表达载体的构建
- 2015年
- 根据已知序列设计引物,通过PCR扩增获得质体定位的乙酰辅酶A羧化酶的4个亚基的基因序列。先将该酶4个亚基的基因进行拼接,然后将这4个拼接好的片段,克隆到pMD18-T载体上,得到质粒pH BM714。再以质粒pHBM714 DNA为模板,用分别带有CpoI和Asc I酶切位点的引物进行PCR扩增,PCR产物在dTTP的保护下经T4 DNA聚合酶处理,与将质粒pHBM720DNA纯化后经CpoI和AscI双酶切后得到的大片段连接,连接产物转化大肠杆菌Xl_(10)-gold,得到正确的重组子命名为pHBM726。此质粒pH BM726,即为带有壮观霉素抗性基因(aadA)筛选标记的质体定位的乙酰辅酶A羧化酶基因油菜叶绿体单交换表达载体;在此载体中壮观霉素抗性基因(aadA)、乙酰辅酶A羧化酶的4个亚基的基因(ACC)和绿色荧光蛋白基因(gfp)共6个基因串联在一起,共用一个启动子序列,一起来进行表达;通过酶切检测、PCR验证和测序验证,均表明该表达载体构建成功。最后此载体在大肠杆菌中表达时,发现重组菌能够在含壮观霉素的培养基上生长,且在可见光下,能看到绿色荧光,表明壮观霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因均在大肠杆菌中成功表达;表达产物通过Western印迹验证表明组成乙酰辅酶A羧化酶的4个亚基的基因在大肠杆菌中成功表达。以上结果表明,该表达载体中串联排列的这6个基因均在大肠杆菌中成功表达。该研究结果可为质体定位的乙酰辅酶A羧化酶转叶绿体的研究奠定基础,为油菜油脂代谢研究提供参考。
- 武玉永谭秀华马立新
- 关键词：油菜叶绿体乙酰辅酶A羧化酶
- 培养基种类对花生毛状根株系生物量和白藜芦醇含量的影响被引量：4
- 2014年
- 旨在研究不同培养基对花生毛状根株系生物量和白藜芦醇含量的影响。利用发根农杆菌R1601侵染花生的叶片,诱导毛状根,利用PCR技术检测毛状根。使用5种培养基(1/2MS、MS、MS+500 mg/L羧苄西林钠、B5和N6)分别培养同一个株系的花生毛状根,4周后利用高效液相色谱法(HPLC)测量毛状根生物量和白藜芦醇含量。结果显示,不同培养基对花生毛状根株系生物量的积累有显著差异,1/2MS培养基和MS培养基有利于花生毛状根株系生物量的积累。不同培养基对花生毛状根株系中白藜芦醇的含量有显著差异,B5培养基和N6培养基有利于花生毛状根株系中白藜芦醇的积累。
- 姚庆收姜吉刚武玉永梁乘榜
- 关键词：发根农杆菌毛状根生物量
- 发根农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系的建立被引量：3
- 2012年
- [目的]建立新的橡胶树遗传转化体系,为利用基因工程技术研究橡胶树提供基础。[方法]利用发根农杆菌R1601、15834和1.2556 3个株系分别侵染橡胶树热研7-33-97的叶片和茎段,诱导毛状根,并利用PCR技术检测诱导得到的毛状根。[结果]在相同的条件下,仅橡胶树茎段在发根农杆菌R1601侵染后产生毛状根,其诱导率达36.6%;PCR结果表明,T-DNA序列已整合进橡胶树的基因组中。[结论]初步建立了发根农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系。
- 姚庆收武玉永于敏
- 关键词：发根农杆菌橡胶树毛状根RI质粒
- 花生毛状根及其愈伤组织中白藜芦醇提取方法的比较被引量：2
- 2012年
- 目的为了辅助筛选高产白藜芦醇的花生毛状根及其愈伤组织株系,选择适合于花生毛状根及其愈伤组织中白藜芦醇的提取方法。方法分别采用有机溶剂提取法、碱提取法和超声波法,提取花生毛状根及其愈伤组织中的白藜芦醇,利用HPLC法测定各提取方法的提取液中白藜芦醇的含量。结果 3种方法中,以超声波法的提取率最高,并且超声30min即获得较好效果。结论超声波法适合于花生毛状根及其愈伤组织中白藜芦醇的提取,有助于辅助筛选高产白藜芦醇的花生毛状根及其愈伤组织株系。
- 姚庆收姜吉刚甘晶晶高蒙蒙
- 关键词：花生白藜芦醇有机溶剂法超声波法
- 花生毛状根的高频诱导及NAA和2,4-D对花生毛状根生长和白藜芦醇含量的影响被引量：6
- 2012年
- 为获得高诱导率的花生毛状根诱导条件,同时探究不同浓度的萘乙酸(NAA)和2,4二氯苯氧乙酸(2,4-D)对花生毛状根生长和白藜芦醇含量的影响。研究了不同发根农杆菌菌株和不同乙酰丁香酮浓度对花生毛状根诱导率的影响;以固体MS培养基为对照,分别添加不同浓度的NAA和2,4-D,培养花生毛状根,探究对毛状根生长和白藜芦醇含量的影响。实验显示花生毛状根诱导率可达到92.3%。花生毛状根随着NAA的浓度升高,生物量同对照相比较无显著差异,各浓度的NAA之间也无明显差异;与对照相比较,白藜芦醇含量显著增高,呈显著差异,但各浓度的NAA之间白藜芦醇的含量无明显差异。添加2,4-D形成的生物量明显偏低,白藜芦醇含量与添加NAA组无差别。以A600为0.8的发根农杆菌R1601菌液侵染花生叶片,在含50μmol/L乙酰丁香酮的MS培养基培养时,可以高效的诱导得到花生毛状根;NAA可以作为一种外源激素提高花生毛状根中白藜芦醇的含量。
- 姚庆收姜吉刚单长民武玉永于敏
- 关键词：发根农杆菌花生毛状根
- 发根农杆菌介导的垂序商陆遗传转化体系的建立及毛状根株系生物量分析被引量：3
- 2014年
- 目的建立发根农杆菌介导的垂序商陆遗传转化体系及毛状根株系生物量分析,为利用基因工程技术开发商陆奠定研究基础。方法活化发根农杆菌R1601,利用其不同浓度的菌液对垂序商陆的叶片和茎段进行转化,利用PCR技术鉴定毛状根;随机选取毛状根培养,鉴别不同株系间的生物量差异。结果垂序商陆对发根农杆菌R1601侵染敏感,4个浓度都能高效诱导垂序商陆形成毛状根,其中A600为1.0时,茎段和叶片的遗传转化效率都能达到100%;PCR鉴定表明毛状根中已经整合进了T-DNA序列;不同毛状根株系生物量分析表明毛状根株系生物量呈极显著差异。结论建立了发根农杆菌R1601介导的垂序商陆的高效遗传转化体系,不同毛状根株系间生物量存在极显著差异。
- 姚庆收单长民武玉永于敏逄高燕
- 关键词：发根农杆菌RI质粒毛状根
