江西省自然科学基金(0130023)
- 作品数：5 被引量：8H指数：1
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- 相关机构：江西农业大学复旦大学辽宁医学院更多>>
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- 禽法氏囊三肽囊素免疫生物学及其同功能单链抗体研究进展被引量：6
- 2002年
- 法氏囊 ( BF)是禽类特有的免疫器官 ,为 B细胞发育、成熟提供微环境 ,是免疫球蛋白基因转变场所 ;其免疫活性物质为三肽囊素( Bursin) ;它不仅分布于 BF,还存在于胸腺Hassall小体、哈德氏腺、脾脏、BF T细胞区及骨髓 ;它能诱导家禽和哺乳动物 B细胞前体分化 ;其靶器官是 BF,能够拮抗 IBD疫苗对 BF的损伤 ,提高 ND弱毒疫苗及油苗产生抗体水平 ;人工合成 Bursin作用的靶器官也是 BF,可促进BF发育、抗体的产生。
- 邬向东谌南辉
- 关键词：法氏囊三肽囊素单链抗体
- 鸡源Bursin-ScFv噬菌体展示文库的构建及初步筛选被引量：1
- 2008年
- 本研究利用抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体免疫SPF来航鸡,获得产生抗独特型抗体的脾细胞,从中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板,根据来航鸡IgG抗体重链(VH)、轻链(VL)可变区基因FR设计引物,进行PCR扩增。在体外扩增出该抗体的可变区VH和VL基因(大小分别约为370和320 bp)。通过重叠延伸反应(SOE),以(Gly4Ser)3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VLScFv,将ScFv DNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得重组的鸡源抗三肽囊素独特型抗体全套单链噬菌体抗体库。并测得该库容量约为5×105,噬菌体中ScFv基因的插入率为80%,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为1011PFU/mL的初级噬菌体抗体库。用抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的淘筛,出现特异性富集。经ELISA、动物试验表明所筛选的5个阳性克隆可与抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)特异性结合,并能促进抗体的生产。
- 邬向东曲悦谌南辉王萍何后军
- 关键词：三肽囊素抗独特型抗体可变区重链噬菌体抗体库
- 三肽囊素抗独特型抗体可变区基因库的建立被引量：1
- 2003年
- 利用抗bursin单克隆抗体免疫SPF来航鸡 ,获得抗独特型抗体的产生细胞 ,从中提取总RNA ,经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板 ,根据鸡抗体重、轻链基因设计引物 ,进行PCR扩增。在体外成功地扩增出该抗体的可变区重链和轻链基因。
- 邬向东曲悦袁汉英谌南辉
- 关键词：三肽囊素抗独特型抗体反转录PCR扩增家禽法氏囊
- 三肽囊素(Bursin)同功单链抗体(ScFv)的构建研究 Ⅰ.鸡脾脏组织细胞总RNA提取方法研究被引量：1
- 2003年
- 分离纯净、完整的细胞总RNA对于分子克隆的实验十分重要 ,但自然界中RNA酶广泛存在且稳定性很高 ,RNA极易被RNA酶污染而降解。快速提取RNA可以减少RNA酶污染的机会而成为RNA提取的首选方法。选用 3种快速RNA提取法 (方法I、II、III) ,发现方法III最好 ,电泳可见 3个RNA条带清晰无降解 ,纯度也最高 ;方法II较差 ,虽然操作时间最短 ,但却易降解 ,而且电泳时多出一条明显的DNA条带 ;方法I也能提取到较好的RNA ,但纯度不如方法III。
- 邬向东曲悦谌南辉
- 关键词：组织细胞RNA酶
- 三肽囊素抗独特型ScFv噬菌体展示文库的构建被引量：1
- 2008年
- 利用在体外构建的三肽囊素抗独特型抗体可变区VH和VL基因,通过重叠延伸反应(SOE),以(Gly4Ser)3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VLScFv,且ScFvDNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得重组的鸡源抗三肽囊素抗独特型抗体全套单链噬菌体抗体库,并将该抗体库展示在噬菌体表面,以利用噬菌体展示技术的强大筛选能力筛选出与三肽囊素同功能单链抗体(Bursin-ScFv)。
- 邬向东谌南辉李麟何后军袁汉英王萍
- 关键词：三肽囊素抗独特型抗体单链抗体噬菌体抗体库
