国家自然科学基金(30300072)
- 作品数：3 被引量：24H指数：1
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- γ射线诱导IEC-6细胞GSK-3β信号转导途径的激活
- 2006年
- 目的观察60Coγ射线对IEC-6肠上皮细胞糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)信号转导途径的激活效应。方法培养的IEC-6细胞接受6Gy60Coγ射线照射后,分别在照射后5、30、60和120min进行各项实验。应用RT-PCR法检测GSK-3β、Akt、caspase-9和caspase-3mRNA表达变化,Westernblot检测GSK-3β和Akt蛋白磷酸化的变化,分光法检测caspase-9酶活性。结果6Gyγ射线照射后30min GSK-3βmRNA表达开始增高,60、120min GSK-3βmRNA均明显高于对照组;照射后30minGSK-3β蛋白磷酸化水平开始降低,60、120min GSK-3β蛋白磷酸化水平明显低于对照组水平;AktmRNA在γ射线照射后与对照组相比无明显改变;蛋白磷酸化水平在照射后30min开始降低,60和120min均明显低于对照组;caspase-9mRNA在照射后30min开始增高,60和120min均高于对照组,caspase-9酶活性变化趋势与mRNA一致,在照射后30min开始增高,并在辐射后60和120min逐渐升高;caspase-3mRNA在照射后60和120min高于对照组。结论6Gyγ射线照射可以使GSK-3β上游的信号分子Akt磷酸化抑制,活性降低,进一步使GSK-3β在γ射线照射后磷酸化水平降低,被活化,从而激活GSK-3β信号转导途径,激活后的GSK-3β可激活其下游介导的与细胞凋亡相关的蛋白激酶家族的成员caspase-9、-3,从而造成IEC-6细胞的损伤。
- 周舟张蕾余晓东邓朝晖张广斌余争平
- 关键词：Γ射线糖原合成酶激酶-3CASPASE-9
- 辐射诱导IEC-6细胞GSK3β信号转导途径的激活与细胞凋亡的关系研究被引量：1
- 2006年
- 探讨了辐射诱导IEC-6细胞GSK3β信号转导途径的激活与细胞凋亡的关系,以及调控GSK3β信号转导途径对γ辐射诱导IEC-6细胞凋亡的保护作用。分别用RT-PCR检测GSK3β和caspase-3mRNA表达,Western-blot法检测GSK3β蛋白质磷酸化水平,放射活性法检测GSK-3β蛋白酶活性,caspase-3分光法检测caspase-3酶活性,Hoechst33342荧光染色法检测细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化。发现6Gyγ射线照射可导致IEC-6细胞GSK3β基因表达上调,蛋白磷酸化水平降低,激酶活性增高;同时可使GSK3β介导的下游蛋白激酶caspase-3基因表达上调及酶活性增强;GSK3β和caspase-3特异性抑制剂预处理IEC-6细胞可使γ辐射诱导的IEC-6细胞凋亡细胞百分率降低,染色体DNA片段化消失。研究结果表明γ辐射可通过激活GSK3β从而进一步激活细胞凋亡相关蛋白激酶分子caspase-3,最终导致IEC-6细胞凋亡。抑制GSK3β和caspase-3激活可减轻6Gyγ辐射导致的IEC-6细胞凋亡,实验证实了GSK3β与caspase-3在γ辐射致肠上皮IEC-6细胞株损伤过程中的重要作用。
- 周舟张蕾邓朝晖余晓东张广斌余争平
- 关键词：Γ辐射IEC-6细胞GSK3ΒCASPASE-3细胞凋亡
- 缺氧诱导心肌细胞凋亡与Caspase-3激活及细胞内钙超载的关系被引量：23
- 2005年
- 目的 :研究缺氧对心肌细胞Caspases的激活效应与细胞内钙的关系。方法 :将培养的心肌细胞暴露于 95 %N2 / 5 %CO2 混合气体培养室进行缺氧处理 ,缺氧 0、30min、1、3、6、12、2 4h后 ,应用激光共聚焦显微镜检测缺氧早期心肌细胞胞浆游离钙的变化 ;应用细胞内钙螯合剂、Caspase 1与Caspase 3特异性抑制剂预处理心肌细胞后缺氧12h ,检测DNA片段化与Caspase 3活性 ;Westernblot、RT PCR方法分别检测细胞线粒体与胞浆中Cytc蛋白的变化以及Caspase 3mRNA表达的改变。 结果 :缺氧后 30min心肌细胞胞浆游离钙即显著增高 ,1h达到峰值。缺氧3h线粒体Cytc无显著变化 ,而胞浆中Cytc开始增多 ,至缺氧 12h ,线粒体中Cytc仅见一弱阳性条带 ,而胞浆呈强阳性反应 ,缺氧 2 4h线粒体中已不能检测到Cytc。缺氧 3h心肌细胞Caspase 3mRNA上调 ,在观察的 2 4h内持续处于高表达状态。分别应用Caspase 3抑制剂和细胞内钙螯合剂预处理心肌细胞后均可使心肌细胞Caspase 3活性降低并完全阻断DNA片段化发生 ,细胞内钙螯合剂与Caspase 3抑制剂联合应用使凋亡细胞百分率降低的程度比分别单独使用两者更明显。结论 :缺氧可致心肌细胞线粒体Cytc释放至胞浆 ,导致Caspase途径激活 ,从而导致细胞凋亡。缺氧所致心肌细胞钙超载在时序上早于?
- 周舟王小华朱光旭余争平
- 关键词：缺氧凋亡CASPASE-3细胞内钙心肌细胞
