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癌症高发区环境水样有机提取物诱导L-02细胞转化及其表观遗传学机制: 2012年; 目的:检测华中某癌症高发地区环境水样有机提取物诱导人肝细胞系L-02细胞转化的能力,并初步探讨其诱导细胞转化的表观遗传学机制。方法:分别采集研究地区河水、离河较近(约1 km)及离河较远(约20 km)的浅井水(约10 m),用固相萃取方法提取其中的有机物。用台盼蓝染色计数法和单细胞凝胶电泳试验检测受试物的细胞毒性和致DNA损伤效应,以受试物对L-02细胞进行长期染毒并利用软琼脂克隆形成试验和裸鼠皮下成瘤试验检测受试物诱导L-02细胞转化的能力。采用甲基化特异性PCR(methyrlation specific PCR,MSP)技术检测转化细胞中O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O^6-methylguanine-DNA methyhransferase,MGMT)基因启动子区甲基化状况,并分别用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测转化细胞MGMT mRNA和蛋白的表达水平。结果:河水、离河较近的井水、离河较远的井水的有机提取物处理L-02细胞24 h后,细胞存活率达70%的处理浓度分别为每毫升培养基30、150、200ml原水,且均含有致DNA损伤的物质。以此作为最高剂量对细胞进行长期染毒,12周以后各处理组细胞软琼脂克隆形成试验和裸鼠皮下成瘤试验均显示转化特性。MSP结果显示转化细胞中MGMT基因启动子区发生高甲基化,与DMSO溶剂对照组比较,转化细胞中MGMT mRNA和蛋白表达水平均下调(P<0.05)。结论:研究地区环境水样有机提取物具有诱导L-02细胞转化的能力,MGMT基因启动子区的高甲基化可能参与有机物诱导的细胞转化过程。; 张世鑫邢秀梅孙新何民富马璐杨萍肖勇梅何志妮李道传张波王庆陈雯; 关键词：细胞恶性转化 MGMT 高甲基化

含B56调节亚基的PP2A全酶在肿瘤信号通路中的调控作用: 2011年; 蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A,PP2A）是细胞中广泛表达的异三聚体全酶,调节许多重要的信号通路,它的表达异常所致的信号通路紊乱会引发肿瘤和促进肿瘤的发展.PP2A在特定的状态下能够发挥抑癌因子的作用,这种抑癌特性由B调节亚基与底物的相互作用来决定,因此B调节亚基在PP2A的抑癌功能中起关键作用.; 朱小年陈丽萍陈雯; 关键词：蛋白磷酸酶2A

毒作用模式在环境化学物危险度评价中的研究进展被引量：4: 2010年; 毒作用模式(mode of action,MOA)在环境化学物危险度评价中发挥了极其重要的作用。近年来,生物标志的研究进展和组学技术(Omics)在毒理学研究中的应用为改进MOA研究、完善其在人类健康危险度评价中的应用提供了新思路。该综述主要介绍了近年来MOA在危险度评价中的应用进展,以MOA的建立及人类关联性框架为重点,以黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)为例阐述MOA的研究思路和分析方法。此外,还介绍了Omics技术在MOA研究中的应用趋势及MOA在环境化学物危险度评价中新的应用取向——替代终点。; 邢秀梅张世鑫陈雯; 关键词：环境化学物危险度评价生物标志毒理基因组学

环境化学致癌物的表观遗传调控研究进展被引量：4: 2011年; 随着表观遗传学（Epigenetics）概念的提出，毒理学机制研究深入到了一个新的层面，一些毒理学现象，比如非遗传毒性致癌物的致癌机制，得到更加科学的解释，笔者现对该领域的研究进展做一综述。; 张波李道传陈雯; 关键词：表观遗传调控化学致癌物表观遗传学致癌机制毒理学

基于毒性通路的毒理学危险度评价方法被引量：6: 2010年; 当前的危险度评价（risk assessment）体系主要依赖整体动物试验进行危害鉴定和剂量一反应关系的外推。对于毒效应有阈值的化学物，由动物实验获得未观察到有害作用水平（no observed adverse effect level，NOAEL）、观察到有害作用的最低水平（lowest observed adverse effect level，LOAEL）或基准剂量（benchmark dose，BMD）除以合适的不确定系数得到安全水平或每日允许暴露量；; 张波杨萍陈雯; 关键词：危险度评价毒理学 LEVEL 通路毒性

化学致癌物诱导人胚肾上皮细胞转化模型的构建被引量：2: 2010年; 目的探讨DNA修复缺陷和癌基因高表达人胚肾上皮细胞转化模型在化学致癌物筛查中的应用价值。方法利用siRNA技术构建DNA损伤修复基因缺陷人胚肾上皮细胞(human embryonic kidney epithelial cell,HEK),采用微核实验检测DNA修复基因缺陷和H-rasV12癌基因高表达对DNA损伤修复功能的影响,并测定已知致癌物[硫酸镍(NiSO4)、N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)]和促癌剂佛波酯(TPA)诱导上述细胞的转化活性,比较两种类型的HEK细胞模型筛查化学致癌物的应用价值。结果应用慢病毒介导的siRNA干扰技术成功构建了HEK-shERCC1、HEK-shERCC2、HEK-shATM和HEK-shMLH1等DNA损伤修复基因缺陷细胞株。与对照细胞HEK-shGFP相比,各DNA修复缺陷HEK细胞的生长速度、细胞形态和琼脂糖克隆的克隆形成率均没有差异,但HEK-sh ERCC2和HEK-shATM细胞对MMC(mitomycin C,MMC)所致遗传损伤的修复能力显著降低,1.0μg/ml MMC处理后,HEK-shERCC2和HEK-shATM细胞的微核率比对照细胞HEK-shGFP分别增加了34‰和30‰(P<0.05)。2μmol/L MNNG、400μmol/L NiSO4和800ng/ml TPA诱导HEKR细胞转化的时间分别是8周、8周和11周,但在染毒后20周均未能诱导各DNA损伤修复缺陷HEK细胞发生转化。结论癌基因高表达转化模型用于化学物质致癌活性的筛查,其灵敏性高于DNA修复基因缺陷细胞转化模型。; 唐石伏王庆庞雅琴赖延东肖勇梅张波李道传陈丽萍杨萍陈雯; 关键词：DNA损伤修复基因硫酸镍佛波酯细胞转化

黄曲霉毒素B1诱导的恶性转化肝细胞miRNA表达谱的变化被引量：2: 2011年; 目的:检测黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)诱导的恶性转化肝L02细胞(L02T)的miRNA表达谱,寻找差异表达的miRNA。方法:以含有AFB1的培养液多次间歇性染毒L02细胞获得转化细胞L02T,通过miRNA芯片技术检测和分析对照L02和转化L02T细胞的miRNA表达谱;用实时荧光定量PCR方法对芯片结果加以验证;采用TargetScan软件预测miRNA可能调控的靶基因。结果:获得2组细胞856个miRNA的表达谱,在25个表达差异显著的miRNA中,15个表达上调,10个表达下调;用定量RT-PCR对芯片结果中表达差异的miR-320a、miR-638和miR-98进行验证,并对其中上调显著的miR-638进行生物信息学分析,预测到4个与肝癌相关的潜在靶基因。结论:在AFB1诱导的恶性转化肝L02细胞中筛查出25个表达差异显著的miRNA,差异表达的miRNA可能在细胞恶性转化过程中起重要作用。; 李志芳李道传王庆刘彩霞李文学陈雯; 关键词：黄曲霉毒素B1 细胞恶性转化 MIRNA

miR-27a在猿猴病毒小T抗原诱导支气管上皮细胞恶性转化中的作用: 2012年; 目的:检测猿猴病毒40(simian virus 40,SV40)小T抗原(small T antigen,ST)诱导人支气管上皮细胞(human bronchialepithelial cell,HBE)恶性转化中miRNAs的表达谱,寻找与细胞转化相关的miRNAs。方法:选择HBE、HBER和HBERST细胞株,提取总RNA,利用miRNA芯片和实时荧光定量PCR技术检测和验证永生化HBE、HBER和HBERST细胞中差异表达的miRNAs。通过细胞生长曲线检测、细胞周期分析、细胞克隆形成试验等确证与SV40 ST诱导HBE细胞恶性转化相关的miRNAs。结果:在HBE、HBER和HBERST细胞856个miRNA的表达谱中筛选出6个与SV40 ST诱导细胞转化相关的miRNA,2个表达上调(miR-20a和miR-27a).4个表达下调(let-7d,let-7f,miR-1246和miR-3746)。抑制miR-27a能减缓HBERST细胞的增殖速度(P<0.01),延长细胞在G0～G1期的停留时间(P<0.01)和降低HBERST细胞在软琼脂上形成克隆的数目(P<0.01)。结论:miR-27a的异常表达参与了SV40ST诱导的HBE细胞恶性转化。; 王庆李道传刘彩霞李志芳肖勇梅张波曾晓雯陈雯; 关键词：人支气管上皮细胞细胞恶性转化 MIRNA

毒理学评价试验新策略研究进展被引量：3: 2013年; 目前世界范围广泛使用的化学物质超过10万种,年产量大于1t的化学品约为3万种,其中仅有少数化学物质进行过系统的毒理学评价.化学物质的安全涉及食品、环境和职业安全等领域,其中环境化学物污染、职业环境化学物超标、食品安全等已成为目前社会经济发展的重大问题.现行的动物试验体系应用于毒理学评价存在很多局限性,主要体现在：动物染毒剂量远远高于人实际接触;小数量实验动物到大量人群外推的不确定性;耗资、耗时多,无法适应实际需求;无法测定化学物的混合暴露和交互作用等.; 章征保李道传陈雯; 关键词：毒理学评价环境化学物化学物质实验动物食品安全

全基因组扩增技术对DNA甲基化保真性的影响: 2013年; 目的：采用焦磷酸测序技术对全基因组扩增后DNA甲基化保真性进行研究。方法：采用全基因组扩增试剂盒对L02、A549和HCT116细胞进行全基因组亚硫酸氢盐修饰后的DNA扩增，选择3个特异基因（MGMT、GSTP1和P16）和反映基因组总甲基化水平的LINE1序列，利用焦磷酸测序技术检验扩增前后甲基化的保真性。结果：DNA平均扩增量为246倍，片段长度〉1000bp，符合甲基化检测的基本要求。反映总甲基化水平的LINE1在扩增前后无明显变化；扩增后3个特异基因甲基化的变化幅度与扩增前基因甲基化水平相关。当基因的甲基化水平t〉60％时，其扩增前后变化不大；当基因甲基化水平在〉120％～60％之间时，扩增前后的变化较大，且无一致的变化趋势；而当基因甲基化水平低于〈20％时，扩增后基因甲基化水平下降显著。此外，焦磷酸测序结果表明全基因组扩增对各特异基因多个CpG甲基化位点的影响与对该基因平均甲基化水平的影响一致。结论：全基因组亚硫酸氢盐修饰后的DNA扩增适用于基因整体甲基化水平和甲基化率≥60％的特异基因的甲基化研究，但会影响低DNA甲基化率基因f〈60％）的DNA甲基化的保真性。; 王二曼何志妮李道传张标陈雯曾晓雯; 关键词：DNA甲基化全基因组扩增焦磷酸测序

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