云南省科技攻关计划(2004NG-01)
- 作品数：8 被引量：74H指数：5
- 相关作者：张富强胡媛媛王金萍宋建领张文东更多>>
- 相关机构：云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室成都军区疾病预防控制中心云南省动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：云南省科技攻关计划引进国际先进农业科技计划云南省中青年学术和技术带头人后备人才项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- H9 N2亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆与表达被引量：1
- 2006年
- 根据已知H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因序列,设计、合成PCR引物。自H9N2亚型禽流感病毒感染的鸡胚尿囊液中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶扩增血凝素基因,采用Invitrogen定向表达系统进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组血凝素,分子质量约75 ku。采用阳性血清经免疫印迹及ELISA分析重组血凝素的免疫反应性,结果表明,重组血凝素能与H9N2亚型病毒抗血清发生特异性结合,具有良好的免疫反应性。
- 王金萍宋建领张富强胡媛媛
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型血凝素
- H5N1亚型禽流感病毒NP基因的克隆与表达被引量：1
- 2007年
- 根据已知H5N1亚型禽流感病毒NP基因序列设计、合成PCR克隆引物。自H5N1阳性病料中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶,经PCR扩增NP基因,采用Invitrogen定向表达系统进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组NP蛋白,分子质量约66.0ku。采用单克隆抗体和阳性血清经ELISA、免疫印迹分析重组蛋白的免疫反应性。结果表明:所获得的重组NP蛋白在ELISA分析中均能与阳性血清和单克隆抗体发生特异性结合,但在免疫印迹分析中仅与阳性血清发生特异性结合。
- 胡媛媛宋建领张富强郭松辉王金萍
- 关键词：禽流感病毒H5N1亚型核蛋白
- H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的克隆与表达被引量：13
- 2006年
- 根据已知H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因(na)序列设计、合成克隆引物。自H5N1亚型病毒感染的鸡胚尿囊液中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(PyobestTMDNAPolymerase)扩增na基因,采用Invitrogen定向表达系统(ChampionTMpETdirectionalTOPOexpressionsystem)进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组神经氨酸酶,分子量约53.8kDa。分析重组NA的免疫反应性和免疫原性,结果表明:重组NA能与H5N1亚型病毒抗血清发生特异性结合,且其免异动物后能诱导机体产生特异性抗体,具有良好的抗原性。
- 宋建领张富强王金萍胡媛媛
- 关键词：禽流感病毒H5N1亚型神经氨酸酶
- 禽流感病毒M1蛋白的表达及其免疫反应性分析
- 根据已知禽流感病毒M1基因序列设计合成PCR克隆引物。自接种H5N1亚型病毒的鸡胚组织中提取RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(PyobestTM DNA Polymerase)经PCR扩增M1基因,采用Invit...
- 宋建领王金萍胡媛媛张富强
- 关键词：禽流感病毒免疫反应性
- 文献传递
- H9N2亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的克隆及表达被引量：11
- 2006年
- 根据已知H9N2亚型禽流感病毒神经氨酸酶(NA)基因序列设计,合成克隆引物。自H9N2亚型病毒感染的鸡胚尿囊液中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(PyobestTMDNAPolymerase)扩增NA基因,采用Invitrogen定向表达系统(ChampionTMpETdirectionalTOPOexpressionsystem)进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组NA,分子量约54·7ku。经免疫印迹及ELISA分析重组NA的免疫反应性和免疫动物分析其免疫原性,结果表明:重组NA能与H9N2亚型病毒抗血清发生特异性结合,且其免疫动物后能诱导机体产生特异性抗体,具有良好的抗原性。
- 宋建领张富强王金萍胡媛媛
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型神经氨酸酶
- H5N1和H9N2亚型禽流感病毒型特异性抗原捕捉ELISA检测方法的建立被引量：12
- 2005年
- 采用禽流感病毒多克隆抗体及型特异性单克隆抗体,研究建立了型特异性抗原捕捉ELISA检测方法,用于检测H5N1和H9N2亚型禽流感病毒。优化了反应条件,确定了包被抗体、检测抗体及酶结合物的最佳工作浓度,对该方法的敏感性、特异性、重复性及稳定性进行了分析,并与病毒分离鉴定的结果进行了比较。结果表明,该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于临床样品及鸡胚、细胞培养物中禽流感病毒的检测。
- 宋建领张富强胡媛媛王金萍
- 关键词：禽流感病毒
- 禽流感病毒RT-PCR及多重RT-PCR检测技术的研究
- 基于目前已知禽流感病毒基质蛋白、血凝素、神经氨酸酶基因,研究建立了A型、H5、N1、H9、N2亚型特异性RT-PCR及H5/N1、H9/N2、A/H5/N1多重RT-PCR检测技术,用于检测或同时检测和鉴别A型及:H5N...
- 张应国宋建领胡媛媛王金萍张富强
- 关键词：禽流感病毒血凝素神经氨酸酶多重RT-PCR
- 文献传递
- 2009甲型H1N1亚型流感病毒抗原性及遗传特性研究被引量：5
- 2009年
- 张文东张富强范泉水张应国邱薇冯子良郑颖王双印李刚山
- 关键词：甲型流感病毒H1N1亚型抗原性
- 禽流感病毒RT-PCR及多重RT-PCR检测技术的建立被引量：34
- 2005年
- 研究建立了禽流感病毒(AIV)A型、H5、N1、H9、N2亚型特异性RT-PCR及H5/N1、H9/N2、A/H5/N1多重RT-PCR检测技术,用于检测或同时检测和鉴别A型及H5N1、H9N2亚型AIV.所建立的RT-PCR和多重RT-PCR从核酸提取、基因扩增到产物分析在3～4h内即可完成,经对36株AIV及相关病毒分离物检测,与病毒分离鉴定的结果完全一致,且与相关病毒或其他亚型无交叉反应.采用多重RT-PCR检测80份棉拭子样品,并与病毒分离鉴定方法比较,二者H5N1、H9N2亚型的鉴定结果完全吻合.结果表明,该方法具有快速、敏感、特异等优点,为临诊样品中AIV型及H5N1、H9N2亚型鉴定和诊断的有效方法.
- 张应国宋建领胡媛媛王金萍张富强
- 关键词：禽流感病毒多重RT-PCRH5N1亚型
- 禽流感病毒M1蛋白的表达及其免疫反应性分析被引量：3
- 2005年
- 根据已发表的禽流感病毒M1基因序列设计合成PCR克隆引物,自接种H5N1亚型病毒的鸡胚组织中提取RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(PyobestTMDNA Polymerase)经PCR扩增M1基因,采用Invitrogen定向表达系统(ChampionTMpET directional TOPO expression system)进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组蛋白,分子量约29.8 kDa。采用单克隆抗体和阳性血清经ELISA、阻断ELISA、免疫印迹分析重组蛋白的免疫反应性。结果发现:重组M1蛋白能与单克隆抗体和阳性血清发生特异性结合,且此结合能被天然病毒抗原阻断。研究表明:重组蛋白M1具有良好免疫反应性。
- 宋建领王金萍胡媛媛张富强
- 关键词：禽流感病毒免疫反应性
