国家自然科学基金(30472253)
- 作品数：13 被引量：24H指数：3
- 相关作者：王建伟王亚平姜蓉王莎莉罗春燕更多>>
- 相关机构：重庆医科大学河北北方学院重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市教委科研基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CD_(34)^+细胞体外定向诱导分化的实验研究
- 2006年
- 目的:探讨造血生长因子不同组合方式对CD34+细胞体外定向诱导分化作用。方法:应用阴性分选策略,以Stem sepTM系统从正常人骨髓细胞中分离CD34+造血干/祖细胞(H SC/H PC),在液体培养体系加入不同组合细胞因子对CD34+细胞进行诱导,检测细胞总数、CD71+细胞和CD15+细胞比例及粒单系祖细胞和红系祖细胞扩增数量。结果:液体培养体系中,以FL+Tpo+SCF+IL-3+Epo细胞因子组合对CD34+细胞向红系细胞的诱导分化能力最强,2w后CD71+细胞比例为61.20%±5.31%,BFU-E、CFU-E分别扩增27.12±3.95和30.65±40.26倍。以FL+Tpo+SCF+IL-3+GM-CSF+G-CSF细胞因子组合对CD34+细胞向粒系细胞的诱导分化能力最强,2w后CD15+细胞比例为56.18%±6.57%,CFU-GM扩增29.87±10.52倍。结论:合理组合生长因子,可定向诱导CD34+细胞生成大量血细胞,将有助于满足临床应用的需要。
- 姜蓉王建伟王亚平王莎莉
- 关键词：CD34^+细胞诱导分化造血生长因子
- 人参总皂苷对K562细胞红细胞生成素受体表达的影响被引量：8
- 2008年
- 目的:探讨人参总皂苷(TSPG)对人红白血病细胞株(K562细胞)红细胞生成素受体(EpoR)表达的影响。方法:采用流式细胞仪检测TSPG作用前后的K562细胞膜EpoR阳性率的变化;免疫细胞化学检测TSPG作用前后K562细胞EpoR表达的变化;以免疫印迹法检测TSPG处理前后K562细胞全细胞、细胞膜和细胞质中EpoR含量的变化。结果:K562细胞膜表达EpoR蛋白的阳性率随TSPG剂量的增加而显著下降;免疫细胞化学染色可见对照组K562细胞胞膜着色深,胞质浅淡,核/质比例大;经TSPG 200mg/L作用72h后,K562细胞胞膜着色明显变浅,胞质着色明显加深且丰富,核/质比例明显降低;不同剂量的TSPG作用K562细胞72h后,全细胞总蛋白中的EpoR的表达无明显差异,经200mg/L TSPG诱导后的K562细胞膜中EpoR蛋白表达下降,而TSPG(100、200、300、400mg/L)诱导K562细胞72h后,胞质EpoR蛋白表达增强,且随着剂量的加大更加明显。结论:TSPG能使K562细胞的EpoR位置重塑,为研究TSPG诱导K562细胞向红系细胞分化的作用机制提供了依据。
- 官涛王建伟张晓云王亚平王莎莉李荣姜蓉
- 关键词：人参总皂苷红细胞生成素受体K562细胞
- 人参总皂苷诱导红系血细胞增殖的信号转导研究被引量：8
- 2006年
- 目的研究人参总皂苷（TSPG）刺激红系血细胞增殖有关的细胞内信号转导途径。方法用集落形成实验检测TSPG刺激红系造血祖细胞（BFU-E、CFU-E）增殖的能力；噻唑蓝法（MTY）检测红细胞生成素（Epo）对脐血细胞增殖的影响；Western blotting法检测TSPG刺激脐血细胞24h后EpoR表达的变化；免疫沉淀法检测TSPG对EpoR介导的蛋白酪氨酸激酶JAK2和信号传导及转录激活因子5（STAT5）的酪氨酸磷酸化的影响。结果1．TSPG10～75mg／L均能提高脐血细胞形成BFU．E、CFU．E的集落产率，以25mg／L提高幅度最明显；2．以MTT法测定得出Epo2×10^3～5×10^4IU／L均能促进脐血细胞的增殖，以5×10^3IU／L促进增殖效果最明显；3．在不同剂量的TSPG刺激下，造血细胞EpoR的表达变化不明显；4．TSPG作用造血细胞24h后，加入Epo继续刺激0、2、5、30min，JAK2和STAT5的酪氨酸磷酸化均增强。结论TSPG在促进造血细胞增殖的过程中，对造血细胞EpoR表达的影响不显著，但可能在EpoR介导的信号转导过程中增强JA如和sT蛆的酪氨酸磷酸化发挥重要作用。
- 王建伟王亚平王莎莉姜蓉
- 关键词：人参总皂苷红细胞生成素受体JAK2噻唑蓝法
- 人参总皂苷对K562细胞促红细胞生成素受体的作用被引量：1
- 2009年
- 目的:研究人参总皂苷(TSPG)对人红白血病细胞株(K562)促红细胞生成素受体(EpoR)的作用。方法:以50、100、200、3005、00mg/L TSPG刺激K562细胞24h,采用流式细胞仪检测细胞膜EpoR表达的变化;Elisa检测K562细胞膜、细胞浆EpoR表达量的改变;激光共聚焦显微镜观察K562细胞EpoR表达的分布。结果:以不同剂量TSPG作用K562细胞24h,流式细胞仪检测显示K562细胞膜表面EpoR呈剂量依赖性下降;细胞Elisa实验结果也显示K562细胞膜表面EpoR表达呈剂量依赖性下降,而细胞浆内EpoR表达呈剂量依赖性增加;激光共聚焦显微镜观察可见K562细胞经200mg/L TSPG作用24h后其膜上的EpoR数量明显减少,荧光强度明显减弱。结论:TSPG可使K562细胞浆EpoR的表达增强,且随着剂量的加大更加明显,而使细胞膜中EpoR的表达减少,这可能是TSPG抑制K562细胞增殖的作用机制之一。
- 胡晓舒黄永罗春燕姜蓉王建伟
- 关键词：K562细胞
- 青蒿琥酯对K562细胞和脐血CD34^+造血干/祖细胞的选择性作用被引量：1
- 2007年
- 目的探讨青蒿琥酯(artesunate,AST)对K562细胞和正常造血干/祖细胞是否具有选择性作用。方法选用K562细胞及脐血CD34+造血干/祖细胞,加入不同浓度AST。MTT法检测药物对上述两种细胞增殖的影响;甲基纤维素半固体培养法考察AST对其体外扩增和多向分化能力的影响;以流式细胞术Annexin V-FITC-PI双染定量检测细胞凋亡率;Western blot方法检测BCR-ABL融合蛋白的表达。结果青蒿琥酯对K562细胞有明显的抑制增殖和诱导凋亡的作用(P<0.01),并存在时效和量效关系,对集落抑制作用明显(P<0.01)。青蒿琥酯在12.5~25μg/ml作用48h对脐血CD34+造血干/祖细胞增殖抑制作用和诱导凋亡作用不明显(P>0.05),对集落生成亦无明显抑制作用(P>0.05)。经青蒿琥酯作用48h,K562细胞BCR-ABL蛋白以剂量依赖方式被降解(P<0.01)。结论青蒿琥酯在一定浓度范围内对K562细胞具有选择性抑制增殖和诱导凋亡的作用,对脐血CD34+造血干/祖细胞影响较小。
- 林雪梅田雪莲杨慧宋姝丹王莎莉王亚平
- 关键词：青蒿琥酯K562细胞CD34^+造血干/祖细胞分化凋亡
- 造血干细胞可塑性的研究进展
- 2008年
- 造血干细胞是具有高度自我更新能力和多向分化潜能的造血始祖细胞。近年来研究发现,造血干细胞也具有向非造血细胞类型分化的特性,称为"可塑性"。这种"可塑性"向干细胞的传统观念提出了挑战,学术界对这种特性及其可能的机制尚有很大争议。本文就造血干细胞可塑性的可能机制及其研究中的一些问题进行综述。
- 余昕烊陈曦王建伟
- 关键词：造血干细胞细胞分化
- 不同组合细胞因子与人参总皂苷对体外培养CD34^+细胞分化的诱导效应(英文)被引量：1
- 2007年
- 背景:造血生长因子可分别作用于不同的造血细胞和细胞的不同分化阶段。红细胞生成素可促进晚期红系祖细胞的增殖分化,白细胞介素3为多潜能集落刺激因子,对多种造血细胞的分化成熟具有促进作用。目的:观察细胞因子的不同组合及人参总皂苷对CD34+细胞体外定向诱导分化为红系血细胞的影响。设计:观察对比实验。单位:重庆医科大学。材料:实验于2002-07/2004-01在重庆医科大学组织胚胎学教研室、基础医学研究所、重庆市生物化学与分子药理学重点实验室完成。正常人骨髓细胞来自第三军医大学大坪医院胸外科无血液系统疾病患者手术摘除的肋骨,所有患者知情同意。人参总皂苷和试剂由重庆中药研究所惠赠。胎牛血清、FITCCD34+抗体、FITC标记同型对照小鼠IgG1为BectonDickinson公司产品,CD71+抗体为SantaCruz公司产品,血小板生成素、Flt-3配基、干细胞因子、白细胞介素-3为SantaCruz公司产品,红细胞生成素为Amgen公司。方法:应用阴性分选策略,以StemsepTM系统从正常人骨髓细胞中分离CD34+造血干/祖细胞。经造血细胞因子不同组合(白细胞介素3+红细胞生成素、干细胞因子+白细胞介素3+红细胞生成素、Flt-3配基+血小板生成素+干细胞因子+白细胞介素3+红细胞生成素)进行液体培养,并以干细胞因子+白细胞介素3+红细胞生成素为对照组,在其中加入终浓度分别为10,20,50,70,100mg/L人参总皂苷为加药组,检测细胞总数、CD71+细胞比例;在CD34+细胞培养体系中加入不同剂量的人参总皂苷(剂量同前)为药物组,以不加人参总皂苷为对照组,通过甲基纤维素半固体培养法检测人参总皂苷诱导CD34+造血干/祖细胞向红系祖细胞(早期红系祖细胞、晚期红系祖细胞)增殖与分化能力。主要观察指标:①不同的细胞因子组CD34+细胞体外增殖情况。②人参总皂苷对CD34+细胞定向诱导分化为红系�
- 王建伟张华姜蓉王亚平
- 关键词：人参总皂苷诱导分化
- 促红细胞生成素受体在造血细胞中的表达及功能调控
- 2008年
- 人促红细胞生成素受体(EPOR)属于单跨膜区段无酶结构的膜受体,EPOR的空间构型以二聚体的形式存在,其中二硫键和色氨酸/丝氨酸基团(WSXWS)结构对EPOR的空间构型稳定及功能有重要作用。EPOR的跨膜段对其活性有关键性的作用。EPOR在造血细胞膜上的表达随造血细胞对于促红细胞生成素(EPO)的依赖而变化,其在空间上的表达分布为少量的EPOR表达在细胞膜的表面,其余存在于细胞的区室当中,这就为调节EPOR在膜上的表达量提供了可能性。EPOR通过内含体溶酶体途径降解,蛋白酶体控制这种机制,用蛋白酶体抑制剂可使EPOR的酪氨酸激酶活性和细胞内信号转导路径持续2 h。某些EPO的拟肽可与EPOR结合引起药理学活性,如EPO模拟肽1和EPOR来源肽,以及EPOR分子内部的结构变异都可以引起EPOR持续的活性。研究人造血细胞膜表面EPOR的表达、空间构型、降解、将信号传入细胞内的机制等,有助于更深入了解红细胞的药物信号决定因素及设计出增强EPOR功能的模拟药物。
- 黄永王建伟王亚平
- 关键词：基因表达调控血细胞
- GATA-1与红系造血被引量：2
- 2008年
- GATA-1作为一种核蛋白,是造血系统转录因子,表达在红系、巨核系和肥大细胞,是正常红细胞发育和分化成熟所必需的,它主要调控红系细胞的增殖和分化;GATA-1对红细胞的存活、增殖、分化有不同的作用机制;与红细胞生成素及红细胞生成素受体相互作用;某些造血系统疾病与GATA-1有密切关系。
- 罗春燕王建伟
- 关键词：GATA-1红系造血核转位
- 人参总皂苷对造血细胞红细胞生成素受体表达的影响被引量：1
- 2008年
- 目的研究人参总皂苷(TSPG)对脐血造血细胞(UCB)红细胞生成素受体(EPOR)表达的影响。方法以25、50、75和100mg/LTSPG刺激脐血单个核细胞24h,采用流式细胞仪检测细胞膜EPOR表达的变化;细胞Elisa实验检测细胞膜EPOR表达量的改变;免疫细胞化学观察细胞EPOR阳性率的变化。结果流式细胞仪检测显示50mg/LTSPG均能提高脐血细胞膜表面EPOR的表达;细胞Elisa实验结果显示50mg/LTSPG能够提高脐血造血细胞膜表面EPOR的表达量;免疫细胞化学观察显示TSPG50mg/L组单个核细胞的EPOR表达阳性率较对照组显著增高(P<0.01)。结论适当剂量(50mg/L)的TSPG可增强脐血单个核细胞膜表面EPOR的表达。
- 黄永王建伟王亚平姜蓉
- 关键词：单个核细胞
