国家自然科学基金(30500447) 作品数:6 被引量:15 H指数:3 相关作者: 吴军 罗高兴 程文广 贺伟峰 袁顺宗 更多>> 相关机构: 第三军医大学西南医院 成都军区昆明总医院 重庆医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
Screening of FOXP3-interacted proteins by yeast two-hybrid technique 2008年 屏蔽由酵母与 Treg 说明因素 forkhead 盒子蛋白质 P3 (FOXP3 ) 交往的蛋白质的目的二混血儿的系统。方法人的 FOXP3 基因被巢 RT-PCR 从外部血 mononuclear 细胞(PBMC ) 放大并且插入了到 plasmid pGBKT7 构造诱饵向量,然后,在宿主酵母紧张 AH109 的诱饵向量的自我激活和毒性被观察。此后,一个人的肝 cDNA 图书馆被诱饵向量屏蔽。积极克隆被营养素缺乏的文化和 back-hybridizing 外面选择。从候选人的序列积极克隆被生物信息学方法爆炸并且分析。编码 FOXP3 的构造诱饵向量没在酵母 AH109 被发现自我激活和毒性的结果。与 FOXP3 交往了包括肿瘤蛋白质 D52,拼接的三蛋白质因素 3b 子单元 1 并且假想蛋白质,被识别。与 FOXP3 交往的结论三新候选人蛋白质被这酵母外面选择二混血儿的系统和图书馆,它可以在 Treg 便于 FOXP3 的进一步的学习。 Zhou Lina Wu Jun Luo Gaoxing He Weifeng Chen Xiwei Bo Ganping Yuan Shunzong Zhang Xiaorong Hu Xiaohong关键词:生物信息学 FOXP3 酵母 肾移植急性排斥反应早期诊断尿液蛋白质组学研究 被引量:7 2008年 目的利用二维凝胶电泳和生物信息学技术,从严格筛选的2例肾移植术后发生急性排斥反应患者尿液标本中,寻找急性排斥反应早期标志物。方法在pH值为4~7范围,采用Sypro-Ruby染色,对发生急性排斥反应过程的不同时间点(-3,-2,-1,7,14,21d)的患者尿液二维凝胶电泳(Two-dimensional Gel Electrophoresis,2-DE)图谱进行比较,挑选了30个有上调或者下调趋势的蛋白点。将这些蛋白点进行切胶、胰酶消化后用MALDI-TOF-MS/MS分析。结果得到了重复性好、分辨率高的肾移植术后尿蛋白2-DE图谱。30个差异蛋白点经质谱分析和数据库检索,鉴定了16个蛋白点,对应13种蛋白质。根据蛋白功能查询结果,发现了3个蛋白含量变化趋势与排斥反应密切相关的蛋白,分别是α-1抗胰凝乳蛋白酶(alpha-1-antichymotrypsin,AACT)、肿瘤排斥抗原gp96(tumor rejection antigen gp96)和锌-α2糖蛋白(Zn-Al-pha-2-Glycoprotein)。结论肾移植术后发生急性排斥反应患者的不同时间点尿液2-DE图谱存在明显差异。AACT、肿瘤排斥抗原gp96和锌-α2糖蛋白可能作为临床诊断肾移植术后急性排斥反应的标志物候选蛋白。 贾雄飞 贺伟峰 罗高兴 甘成军 黄正根 袁顺宗 王小娟 彭旭 程文广 谭江琳 胡婕 吴军关键词:肾移植 急性排斥反应 二维电泳 质谱 肾移植术后尿蛋白二维电泳图谱的建立 2008年 目的近年来诊断急性排斥反应的发生,一直朝着寻找非侵入性的检测方向努力,尿液中的蛋白可以为肾脏疾病病理变化提供线索。本次实验的目的旨在建立肾移植术后病人尿蛋白二维电泳图谱。方法利用二维凝胶电泳(Two-dimensional Gel Electrophoresis,2-DE)技术,以固相pH梯度等电聚焦为第一向,改良等电聚焦的电压在3500V,总伏小时为14000 Vh;12%的SDS-PAGE进行第二向电泳,银染显色。结果得到了令人满意的肾移植术后发生急性排斥反应患者尿蛋白二维电泳图。结论此方法,可为后续利用蛋白质组技术,研究急性排斥反应诊断标志物提供可靠的技术支持。 贾雄飞 贺伟峰 毛小琴 甘成军 罗高兴 黄正根 袁顺宗 王晓娟 彭旭 程文广 谭江琳 吴军关键词:肾移植 急性排斥反应 蛋白质组 二维电泳 激活后γδT细胞迅速增殖分子机制的初步研究 被引量:3 2006年 目的通过比较分析初始γδT细胞和初始CD4^+T细胞激活后增殖动力学,以深入了解γδT细胞增殖特点以及相关分子机制。方法应用流式细胞技术分离技术分选出初始γδT细胞和初始CD4^+T细胞。在此基础之上.用[~3H]掺入法检测不同剂量的anti-CD3刺激培养48h后细胞增殖的情况,并进行NIA15K高密度基因芯片分析差异表达基因。结果在经anti- CD3刺激后,初始γδT细胞比初始CD4^+T细胞更快速地被激活增殖。细胞激活后,DNA芯片分析显示出γδT细胞比CD4^+T细胞表达明显更高水平的细胞增殖相关基因。其后,通过定量RT-PCR检测c-Myc基因表达情况,得到与基因芯片分析相同的结果。结论这些细胞增殖相关基因为γδT细胞早期激活增殖的力学特性提供了分子基础。 贺伟锋 程文广 胡婕 罗高兴 陈希炜 尹芝南 吴军关键词:ΓΔT细胞 CD4^+T细胞 基因芯片 酵母双杂交系统筛选FOXP3的相互作用蛋白 被引量:2 2008年 目的利用酵母双杂交系统筛选与人FOXP3相互作用的蛋白。方法应用酵母双杂交系统,将成功构建的酵母诱饵表达载体pGBKT7-FOXP3,与转化了成人肝cDNA文库的酵母菌Y187接合,筛选与FOXP3相互作用的蛋白,通过一对一的回复性杂交实验排除假阳性,并对阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析。结果经过酵母双杂交共获得最终确认3个阳性克隆,测序后经生物信息分析为肿瘤蛋白D52、分裂因子3b及未知蛋白。结论成功应用酵母双杂交系统筛选出与FOXP3相互作用的3个蛋白,它们可能与Treg细胞的发育分化及其功能有关。 周丽娜 吴军 贺伟峰 罗高兴 陈希炜 柏干苹 袁顺宗 张小容 胡晓红关键词:基因 克隆 FOXP3 酵母双杂交 γδ T细胞与CD4^+ T细胞产生IFN-γ动力学的比较研究 被引量:3 2006年 目的通过比较分析γδ T细胞和CD4^+ T细胞IFN-γ合成动力学,以深入了解γδ T细胞产生IFN-γ特点。方法应用流式细胞技术分离技术分选出初始γβT细胞和初始CD4+T细胞。在此基础之上,通过定量RT-PCR技术检测γβT细胞和CD4+T细胞在不同刺激条件下IFN-γ基因转录情况。结果对比CD4+T细胞,γδT细胞产生IFN-γ不但需要更少的刺激信号以及更低的刺激域值,并且能更快地达到峰值。结论γβT细胞有加速产生IFN-γ的动力学特点。 贺伟锋 谭江玲 罗高兴 陈希炜 尹芝南 吴军关键词:ΓΔT细胞 CD4^+T细胞 IFN-Γ 动力学