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国家自然科学基金(30500433)

作品数:9 被引量:31H指数:4
相关作者:刘家云苏明权郝晓柯骆晓梅杨安钢更多>>
相关机构:第四军医大学西京医院第四军医大学河北省人民医院更多>>
发文基金:国家自然科学基金河北省科技支撑计划项目国家重点基础研究发展计划更多>>
相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 9篇中文期刊文章

领域

  • 9篇医药卫生

主题

  • 7篇细胞
  • 5篇基因
  • 4篇前列腺
  • 4篇前列腺癌
  • 4篇前列腺癌细胞
  • 4篇腺癌
  • 4篇腺癌细胞
  • 4篇癌细胞
  • 4篇SURVIV...
  • 3篇启动子
  • 3篇小分子
  • 3篇小分子干扰
  • 3篇分子
  • 3篇SURVIV...
  • 2篇乙型
  • 2篇特异
  • 2篇特异性
  • 2篇前列腺癌细胞...
  • 2篇细胞系
  • 2篇活性鉴定

机构

  • 6篇第四军医大学...
  • 4篇第四军医大学
  • 2篇河北省人民医...
  • 2篇解放军第97...
  • 1篇军事医学科学...
  • 1篇解放军第30...
  • 1篇第四军医大学...

作者

  • 8篇刘家云
  • 5篇郝晓柯
  • 5篇苏明权
  • 4篇杨安钢
  • 4篇骆晓梅
  • 3篇李庆霞
  • 3篇黄红艳
  • 2篇温伟红
  • 2篇贾林涛
  • 2篇王娟
  • 1篇薛采芳
  • 1篇赵晶
  • 1篇孟艳玲
  • 1篇王成济
  • 1篇王凯
  • 1篇薛茜
  • 1篇张南征
  • 1篇段昕波
  • 1篇吕品田
  • 1篇赵文清

传媒

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  • 1篇第四军医大学...
  • 1篇第三军医大学...
  • 1篇中华肿瘤防治...

年份

  • 1篇2012
  • 1篇2010
  • 2篇2009
  • 1篇2008
  • 3篇2007
  • 1篇2006
9 条 记 录,以下是 1-9
排序方式:
针对S基因的siRNA或shRNA表达框对HepG2.2.15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用比较被引量:2
2007年
目的 化学合成针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因的siRNA,同时制备针对相同区段的shRNA表达框,并比较二者对HepG2.2.15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用。方法 化学合成针对HBVS基因的带有FITC标记的siRNA,设计合成带有FTrc标记的引物,PCR扩增含有RNA聚合酶Ⅲ启动子H1序列和shRNA编码序列的表达框,并对扩增产物进行纯化,将等摩尔数siRNA和shRNA表达框分别用脂质体转染稳定表达HBV的HepG2.2.15细胞,转染1d后流式细胞仪检测转染效率,转染3d后RT-PCR检测靶基因mRNA的水平,用SDS-PAGE、Westem blot及间接免疫荧光染色检测HBsAg的表达。收集转染前和转染后1、3、5和7d的细胞培养上清,检测HBsAg水平,同时用荧光定量PCR方法检测HBV DNA的含量。结果成功制备了针对HBVS基因的shRNA表达框,将其与等摩尔数siRNA分别转染HepG2.2.15细胞后,RT-PCR证实细胞中HBV mRNA水平降低,SDS-PAGE、Westem blot及间接免疫荧光染色检测到HBsAg的表达受到抑制,细胞培养上清中HBsAg和HBV DNA含量下降。与siRNA相比,shRNA表达框对HBV的抑制作用虽然起效较慢,但持续时间更长。结论shRNA表达框和siRNA均可明显抑制HBV的转录和表达,与siRNA相比,shRNA表达框能够更持久地抑制靶基因的表达。
温伟红刘家云王凯薛茜孟艳玲赵晶贾林涛薛采芳王成济杨安钢
关键词:乙型肝炎病毒RNA干扰SIRNA
靶向X区的siRNA抑制乙型肝炎病毒基因的表达和复制被引量:4
2006年
目的构建针对乙型肝炎病毒(HBV)X基因的siRNA表达载体,观察其对HBV基因表达和复制的影响。方法设计并合成针对HBVX区基因的siRNA寡核苷酸,经退火形成双链后克隆入pSUPER载体,构建成功的siRNA表达载体与pTK-Hyg质粒共转染稳定表达HBV的HepG22·2·15细胞,潮霉素抗性筛选获得稳定细胞克隆,对所得细胞培养上清液中的HBsAg和HBeAg进行定量检测,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测靶基因mRNA的抑制效果,荧光定量PCR检测HBVDNA。结果成功构建了针对HBVX基因的siRNA表达载体pSUPER-X1和pSUPER-X2,两种siRNA均能明显抑制HepG22·2·15细胞的HBsAg和HBeAg分泌,抑制率分别为97%和88%,RT-PCR结果显示HBV的mRNA表达降低,荧光定量PCR结果证实siRNA能降低HBVDNA拷贝数2个数量级。结论载体产生的针对HBVX基因的siRNA能高效、特异地抑制HBV基因的表达和复制。
刘家云郝晓柯李庆霞黄红艳马龙洋温伟红贾林涛杨安钢
关键词:肝炎病毒乙型小分子干扰转染聚合酶链反应
RNA干扰survivin基因增强SKBr-3细胞对多柔吡星敏感性的体外研究被引量:2
2010年
目的探讨抑制survivin基因的表达对人乳腺癌SKBr-3细胞化疗敏感性的影响。方法构建针对survivin基因序列特异性shRNA的表达载体,脂质体转染SKBr-3,G418筛选阳性克隆。实验分为RNA干扰组(S1&P),脂质体对照组(H1&P)和空白对照组。光镜观察转染后细胞的形态变化;0.5μg/ml多柔吡星作用于转染后的细胞,电镜观察细胞形态学变化;TUNEL染色、AnnexinV荧光标记检测细胞凋亡,MTT法检测细胞增殖的抑制率。结果成功构建具有新霉素抗性的靶向survivin的序列特异性shRNA表达载体,基因测序完全正确;转染后干扰组细胞均发生细胞凋亡的形态学改变;低剂量多柔吡星诱导后,TUNEL染色结果 ,S1&P组凋亡细胞比例(23.6±4.8)%明显高于H1&P组(4.1±1.1)%和空白对照组(3.2±1.4)%(P<0.05),表明转染了RNA干涉载体的SKBr-3细胞对低剂量多柔吡星的敏感性显著增加;Annexin-V染色结果 :空白对照组凋亡比例为(17.43±3.12)%,H1&P组为(20.51±4.67)%,S1&P组为(68.76±8.49)%,后者与前两者比较均有统计学差异(P<0.05)。干扰组细胞凋亡率、细胞增殖的抑制率均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外实验证实抑制survivin基因的表达可提高乳腺癌SKBr-3细胞对多柔吡星的敏感性。
李庆霞王娟赵文清刘家云黄红艳张明杨安钢
关键词:RNA干扰SURVIVINSKBR-3细胞药物敏感性
Survivin靶向microRNA表达载体的构建和鉴定被引量:7
2007年
目的:设计并构建Survivin靶向的microRNA表达载体,观察其对Survivin基因的抑制作用。方法:以Survivin为靶基因,根据pPRIME载体要求,设计针对Survivin的microRNA序列,PCR扩增获得目的片段并克隆到载体中,序列正确的载体脂质体转染Hela细胞,RT-PCR和Western blotting检测其对Survivin的抑制作用。结果:用XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定、DNA测序证实构建的microRNA表达载体序列正确,后者在mRNA和蛋白水平上均能明显抑制Hela细胞中Survivin的表达。结论:Survivin靶向microRNA表达载体构建成功,并能抑制靶基因的表达,为其在肿瘤基因治疗中的应用奠定了基础。
骆晓梅刘家云苏明权郝晓柯
关键词:MICRORNASURVIVIN靶向治疗
肿瘤特异性survivin启动子在前列腺癌细胞中的活性鉴定被引量:7
2007年
目的:克隆survivin启动子片段,并检测其在人前列腺癌LNCaP细胞和人正常张氏肝细胞中的转录活性,为该启动子在前列腺癌的靶向性基因治疗中奠定基础。方法:用PCR扩增survivin基因启动子S1pro和S2pro克隆入pPRIME载体,构建重组质粒pPRIME-S1pro和pPRIME-S2pro,脂质体转染LNCaP细胞和张氏肝细胞,检测survivin启动子在细胞中的转录活性。结果:survivin基因启动子在前列腺癌细胞中具有较强活性,其中S2pro启动活性明显高于S1pro,达到CMV启动子活性的39%。结论:survivin启动子在前列腺癌细胞中具有较强启动活性,可望成为新的前列腺癌靶向性基因治疗工具。
骆晓梅刘家云苏明权郝晓柯
关键词:前列腺癌SURVIVIN启动子基因治疗
survivin启动子与PSMA启动子/增强子在前列腺癌细胞系中的转录活性比较被引量:1
2012年
目的:通过研究并比较前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因启动子、增强子和survivin基因启动子在不同前列腺癌细胞系(LNCaP和PC-3细胞)中的转录活性,为前列腺癌的靶向性基因治疗提供依据。方法:采用PCR扩增PSMA基因的启动子、增强子和survivin基因启动子,分别克隆入pGL3-Basic,脂质体转染前列腺癌细胞和张氏肝细胞,检测各启动子在细胞中的转录活性。结果:survivin基因启动子在前列腺癌细胞中均具有较强活性,均明显高于PSMA启动子/增强子,其中S2pro启动活性最强,达到CMV启动子活性的1/3,然而,survivin启动子及PSMA启动子/增强子在肝细胞系中几乎不表达。结论:survivin启动子在前列腺癌细胞中具有较强启动活性,可望成为新的前列腺癌靶向性基因治疗工具。
骆晓梅刘家云苏明权郝晓柯
关键词:前列腺癌前列腺特异性膜抗原启动子增强子
靶向survivin的microRNA和siRNA抑制前列腺癌细胞survivin基因表达和凋亡作用的比较被引量:3
2009年
目的:构建靶向survivin的microRNA表达载体,观察其与siRNA表达载体对survivin基因表达的抑制作用.方法:以survivin为靶基因,根据pPRIME设计针对survivin的microRNA序列,获得目的片段克隆到相应载体中,序列正确的载体脂质体转染前列腺癌PC-3细胞,RT-PCR和Western Blot检测其对survivin基因表达的抑制作用,流式细胞术和电镜观察其对细胞凋亡的影响.结果:双酶切鉴定、DNA测序证实构建的microRNA表达载体序列正确,序列正确的microR-NA和siRNA表达载体在mRNA和蛋白水平上均能明显抑制PC-3细胞中survivin的表达,流式细胞术和电镜结果显示其可促进PC-3细胞的凋亡,且microRNA表达载体的作用效果较siRNA表达载体强.结论:Survivin靶向microRNA和siRNA均能抑制靶基因的表达,诱导前列腺癌细胞凋亡,与siRNA相比,microRNA作用效果更强.
骆晓梅刘家云苏明权郝晓柯
关键词:小分子干扰
survivin启动子的克隆及其在前列腺癌细胞系中的活性鉴定被引量:1
2009年
目的克隆survivin启动子片段,并检测其在人前列腺癌细胞中的转录活性,为该启动子在前列腺癌靶向基因治疗中的应用提供实验依据。方法PCR方法扩增survivin基因启动子S1pro和S2pro,克隆入pGL3-Basic,分别构建重组质粒pGL3-S1pro和pGL3-S2pro,脂质体转染前列腺癌细胞和Chang liver肝细胞,检测sur-vivin启动子在细胞中的转录活性。结果survivin基因启动子在前列腺癌细胞中均具有较强活性,其中S2pro活性明显高于S1pro,达到CMV启动子活性的三分之一。结论survivin启动子在前列腺癌细胞中具有较强启动活性,有可能成为新的前列腺癌靶向性基因治疗工具。
骆晓梅张南征刘家云苏明权郝晓柯
关键词:前列腺癌基因SURVIVIN启动子基因治疗
RNAi抑制Survivin基因表达对乳腺癌SKBr-3细胞放射敏感性影响的研究被引量:5
2008年
目的:研究利用RNA干扰抑制Survivin基因的表达对人乳腺癌SKBr-3细胞放射敏感性的影响。方法:构建针对Sur-vivin基因的RNA干扰真核表达载体pSU-PER-S1并转染SKBr-3细胞,分别用RT-PCR和蛋白质印迹法检测Survivin mR-NA和蛋白表达水平的变化;流式细胞仪检测细胞周期;平板克隆形成实验计算细胞存活率,用单击多靶数学模型进行曲线拟合做图,求曲线参数D0、Dq和N值,比较细胞放射敏感性变化。结果:RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果表明,pSUPER-S1转染后的SKBr-3细胞中Survivin mRNA和蛋白水平显著下降;流式细胞仪检测结果显示,转染后的SKBr-3细胞G1期阻滞明显〔(74.03±8.91)%〕,高于对照组〔(44.21±12.03)%〕,S期细胞数减少〔(17.11±4.96)%〕,低于对照组〔(43.12±8.64)%〕,P<0.05;经不同剂量γ射线照射后的细胞存活曲线拟合作图后发现,转染后的细胞D0、N和Dq值均下降(D0=1.29,N=4.9,Dq=2.6),与对照组相比(D0=1.56,N=14.85,Dq=5.21)差异有统计学意义(P<0.05),提示细胞放射增敏感性增加。结论:利用RNA干扰技术抑制Survivin基因在乳腺癌SKBr-3细胞中的表达可以增加其对放疗的敏感性。
李庆霞刘家云黄红艳王娟吕品田段昕波张勇杨安钢
关键词:小分子干扰微管相关蛋白质类
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