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江苏省自然科学基金(BK2010136)
作品数:
6
被引量:16
H指数:3
相关作者:
王千秋
龙福泉
张瑞丽
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龚匡隆
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相关机构:
中国医学科学院北京协和医学院
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南京医科大学
作者
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王千秋
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龙福泉
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张瑞丽
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张津萍
传媒
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国际皮肤性病...
年份
1篇
2015
1篇
2014
1篇
2013
2篇
2012
1篇
2011
共
6
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梅毒螺旋体膜蛋白Tpp17调节血管内皮屏障通透性的机制研究
被引量:3
2015年
目的研究梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp17(rTpp17)对血管内皮屏障的调节作用,探讨膜蛋白Tppl7在梅毒免疫病理学发病机制中的作用。方法利用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)构建体外细胞单层模型,将采用基因工程技术重组合成的rTppl7刺激HUVEC单层模型,ELISA检测Transwell小室的下室培养基中辣根过氧化物酶(HRP)流量;Cell-ELISA检测细胞表面VE.钙黏蛋白(VE-cadhefin)表达水平;rTppl7预处理HUVEC单层模型,加入Calcein—AM标记的THP-1细胞共培养,荧光倒置显微镜下计数THP-1细胞穿过HUVEC单层的迁移率;将HUVEC接种激光共聚焦专用培养皿,rTpp17处理后,加入荧光染料罗丹明-鬼笔环肽工作液,共聚焦显微镜下观察细胞骨架蛋白F-actin排列变化。结果rTpp17可提高HUVEC单层模型通透性及下调细胞膜VE-cadhefin的表达水平;促进THP-1细胞穿越HUVEC单层的迁移率,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P〈0.05);rTppl7可促进细胞骨架蛋白F-actin重排。结论梅毒螺旋体膜蛋白Tpp17可提高血管内皮屏障通透性,下调血管内皮细胞VE-cadhefin的膜表达水平,促进细胞骨架蛋白F-actin重排及单核-巨噬细胞穿过血管内皮细胞单层,可能在梅毒的免疫病理学发病机制中起重要作用。
张瑞丽
王千秋
关键词:
梅毒
人脐静脉内皮细胞
梅毒螺旋体膜蛋白Tpp47对血管内皮细胞黏附功能影响的实验研究
被引量:3
2014年
目的探讨梅毒螺旋体膜蛋白Tpp47对血管内皮细胞的作用。方法利用基因工程技术重组合成的梅毒螺旋体膜蛋白rrpp47及脂多糖分别刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC),ELISA检测上清中细胞间黏附分子1(ICAM-1)及E选择素的水平;荧光定量PCR检测HUVEC中ICAM-1及E选择素mRNA的转录水平;M1Tr法检测HUVEC增殖水平;将重组蛋白Tpp47及脂多糖预处理的HUVEC与钙黄绿素AM标记的THP-1细胞共培养,荧光倒置显微镜下观察HUVEC与THP-1细胞的黏附情况。结果梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp47刺激HUVEC后,其分泌的黏附分子ICAM-1(1.28±0.03)及E选择素(0.51±0.01)水平显著提高,与空白对照组(0.90±0.01与0.13±0.03)比较,差异均有统计学意义(t值分别为18.28和18.19,均P〈0.05);将重组蛋白Tpp47刺激24h后的HUVEC与THP-1细胞共培养,HUVEC与THP-1细胞的黏附率为56.1%±1.9%,较空白对照组(16.3%±2.1%)明显提高,差异有统计学意义(r=12.65,P〈0.05)。M1Tr试验结果显示,重组蛋白Tpp47刺激HUVEC后,其增殖率(19.5%±1.7%)高于空白对照组(10.0%±3.1%),差异有统计学意义(X^2=3.92,P〈0.05);较脂多糖低(41.2%±3.7%),差异有统计学意义(X^2=10.42,P〈0.05)。结论梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp47可体外上调HUVEC与THP-1的黏附能力及促进HUVEC增殖,可能在梅毒的发病中起一定作用。
张瑞丽
王千秋
关键词:
密螺旋体
苍白
细胞黏附分子
E选择素
THP-1细胞
梅毒螺旋体感染兔模型的研究
被引量:2
2011年
通过家兔睾丸接种梅毒螺旋体建立家兔感染动物模型是研究梅毒的重要实验方法.接种话的梅毒螺旋体展现出5个阶段的变化:孵育期、指数增长期、静止生长期、退化期、潜伏期。各阶段根据损害的表现、损害的持续时间、寄生菌的特征、感染器官的表现、病理学改变、血清学的改变、与青霉索治疔的相关性共7个方面的变化各自有其特点。该模型的建立,对梅毒发病机制、早期诊断、药物治疗及预后等多方面的研究均具有重要意义。
龙福泉
王千秋
关键词:
动物模型
梅毒螺旋体重组蛋白Tp0136的表达、纯化及免疫活性分析
被引量:5
2012年
目的 克隆并表达梅毒螺旋体Tp0136基因,对其表达产物进行纯化以及免疫活性分析。方法 全基因合成Tp0136基因,构建E.coli表达载体;诱导表达并纯化重组蛋白,用SDS-PAGE和Western印迹鉴定。用纯化的重组蛋白Tp0136免疫新西兰兔,并以重组Tp0136作为包被抗原建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA)以鉴定其免疫原性,Western印迹检测梅毒阳性血清鉴定其免疫反应性。结果 成功构建E.coli表达载体pET28a-Tp0136,并表达和纯化出膜蛋白Tp0136,相对分子质量为50 000,纯度 〉 95%。用重组蛋白Tp0136免疫新西兰兔,能刺激其产生高滴度抗体,具有较强的免疫原性。Western印迹显示其能与梅毒阳性血清发生特异性反应,具有较好的免疫反应性。结论 成功表达具有Tp0136全基因和较强免疫活性的膜蛋白,Tp0136可能在梅毒螺旋体的免疫致病机制中起到重要作用。
龙福泉
王千秋
张津萍
龚匡隆
关键词:
梅毒螺旋体
膜蛋白
免疫活性
儿童获得性梅毒
被引量:2
2012年
儿童获得性梅毒是儿童在出生后感染梅毒螺旋体所致,较为少见,但近年来陆续有报道,值得关注。现就儿童获得性梅毒的流行病学、传播途径、临床特点、防控策略等概述。
龙福泉
王千秋
关键词:
获得性梅毒
儿童
梅毒螺旋体
流行病学
梅毒螺旋体膜蛋白 Tpp17体外活化血管内皮细胞的实验研究
被引量:1
2013年
目的:研究梅毒螺旋体重组蛋白Tpp17体外对人脐静脉内皮细胞( HUVEC )的活化作用,探讨膜蛋白Tpp17在梅毒免疫学发病机制中的作用。方法将采用基因工程技术重组合成的梅毒螺旋体膜蛋白Tpp17刺激HUVEC, ELISA测培养上清中细胞因子TNF-α、MCP-1、ICAM-1及E-selectin的水平,荧光定量聚合酶链反应测HUVEC中TNF-α、MCP-1、ICAM-1及E-selectin mRNA的转录水平;将重组蛋白Tpp17预处理的HUVEC与Calcein-AM标记的THP-1细胞共培养,荧光倒置显微镜下观察HUVEC与THP-1细胞的黏附情况;将HUVEC接种于transwell小室的下室,重组蛋白Tpp17处理后,Calcein-AM标记的THP-1细胞接种于上室,荧光倒置显微镜观察下并计数THP-1细胞的迁移率。结果梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp17可上调HUVEC细胞因子TNF-α、MCP-1、ICAM-1及E-se-lectin的表达水平,提高其对THP-1细胞的趋化和黏附能力,与空白组比较,差异有统计学意义( P<0.05)。结论梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp17可体外活化HUVEC,提高HUVEC对THP-1细胞的趋化和黏附能力,可能在梅毒的免疫病理中起重要作用。
张瑞丽
王千秋
关键词:
梅毒
THP-1
趋化
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