山东省自然科学基金(Y2007D69)
- 作品数：5 被引量：33H指数：3
- 相关作者：周洪旭李国勋李长友李淑文谭秀梅更多>>
- 相关机构：青岛农业大学河北农业大学山东农业大学更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 荧光增白剂和增效蛋白对粘虫核型多角体病毒的增效作用被引量：6
- 2008年
- 离体和活体处理粘虫幼虫围食膜后,通过SDS-PAGE分析其围食膜蛋白条带的变化、观察其形态学特征、生物测定等方法研究了荧光增白剂FB28和棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白(En-Ha)对粘虫幼虫围食膜的破坏作用及其对粘虫核型多角体病毒(MsNPV)的增效作用。结果表明,FB28离体处理围食膜能够解离大部分围食膜蛋白,幼虫摄取含有1%FB28的饲料4 h后,围食膜破裂,呈现出蓝色的荧光,高分子量蛋白条带消失。En-Ha离体处理围食膜,能够降解高分子量蛋白,出现高分子量蛋白条带消失,低分子量蛋白条带出现的现象;幼虫摄取含有9μg/mL En-Ha饲料7 h后,围食膜极易断裂,高分子量蛋白条带消失。经过一段时间恢复实验后,FB28和En-Ha处理的幼虫围食膜都能够恢复正常,其破坏作用是短暂的。生物测定结果表明,FB28和En-Ha均能够通过破坏围食膜完整性提高MsNPV的感染率,使LC50显著降低。
- 陈涛王俊平李淑文周洪旭李国勋
- 关键词：荧光增白剂增效蛋白粘虫核型多角体病毒围食膜
- 草坪害虫华北大黑鳃金龟幼虫围食膜蛋白Ho-Peritrophin3基因克隆及序列分析被引量：3
- 2010年
- 华北大黑鳃金龟是一种重要的草坪害虫,其幼虫中肠围食膜是害虫生物防治的潜在靶标。本研究利用棉铃虫围食膜蛋白多克隆抗体,从已构建的华北大黑鳃金龟中肠cDNA表达文库中筛选得到一个编码围食膜蛋白的cDNA克隆Ho-Peritrophin3,其cDNA长度为1 737 bp,在polyA末端上游含有1个多聚腺苷酸信号序列AATA-AA,最长开放阅读框(ORF)编码528个氨基酸,与华北大黑鳃金龟围食膜蛋白Ho-Peritrophin2的相似性最高,为64.9%。结构域分析表明,Ho-Peritrophin3只含有较少的O-糖基化位点和N-糖基化位点,不含有类粘蛋白结构域,具有5个几丁质结合功能域(chitin binding domain,CBD),它们均由6个保守的半胱氨酸残基组成,与Ho-Per-itrophin1、Ho-Peritrophin2羧基端的CBD只含有4个半胱氨酸残基明显不同。Ho-Peritrophin3的胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的作用位点主要位于5个CBD内部,受到其保护,不会被降解;与Ho-Peritrophin1、Ho-Peritrophin2不同的是在第5个CBD下游区域的107个氨基酸中,有36.3%的氨基酸属于胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的酶切位点。
- 周洪旭李长友李国勋
- 关键词：草坪害虫华北大黑鳃金龟免疫筛选
- 营养和湿度对华北大黑鳃金龟生长发育和生殖的影响被引量：13
- 2009年
- 以华北大黑鳃金龟为对象,研究了营养和湿度对其发育和生殖的影响。在室内条件下,以不同饲料饲养成虫,取食榆树叶的华北大黑鳃金龟产卵量最高,为107.1粒/头,其次是毛白杨叶,而取食玉米叶和刺槐叶的产卵量最低。在马铃薯块、甘薯块和花生米三种饲料中幼虫最嗜取食马铃薯块,且存活率最高,幼虫重量显著高于取食甘薯块和花生米的幼虫重量。土壤湿度对卵发育影响较大,土壤湿度为18%时,卵的孵化率最高为75.6%,过干过湿都不利于卵的孵化。以含有15.7 mg/cm^2水的滤纸在暗处培育卵,孵化率可达77.7%,这种卵的孵育方法操作简便,减少了土壤中病原微生物和土壤颗粒对卵的侵染及损伤。土壤湿度为15%-18%时最有利于幼虫的生长发育,高于或低于这一湿度,幼虫的死亡率均增加。饲养中发现,幼虫在低龄阶段死亡率最高,尤其在初孵幼虫生长发育的前30 d内,这可能与低龄幼虫体壁较薄,抵抗过干过湿以及物理损伤的能力较差有关。
- 周洪旭谭秀梅李长友郑桂玲李国勋
- 关键词：华北大黑鳃金龟营养生长发育生殖
- 华北大黑鳃金龟两种围食膜蛋白cDNA的分子克隆与序列分析被引量：3
- 2009年
- 6本文以华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita中肠为材料,依据Stratagene公司文库构建试剂盒方法,构建其中肠cDNA表达文库,该文库滴度为1.9×106pfu/mL,重组率为99.97%。依据现代免疫学原理,利用棉铃虫Helicoverpaarmigera围食膜蛋白多克隆抗体筛选文库,得到两个编码华北大黑鳃金龟围食膜蛋白的cDNA克隆Ho-Peritrophin1与Ho-Peritrophin2,其cDNA长分别为2385bp和1633bp,在polyA末端上游各有3个多聚腺苷酸信号序列AATAAA,最长开放阅读框(ORF)分别编码729个和477个氨基酸,与粉纹夜蛾Trichoplusia niCBP2(chitin bindingprotein2)的相似性最高,分别为21.9%和19.1%。结构域分析表明,Ho-Peritrophin1与Ho-Peritrophin2分别具有9个和6个几丁质结合功能域,只含有较少的O-糖基化位点,不含有类粘蛋白结构域。胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶对两种蛋白的作用位点主要位于几丁质结合功能域(chitin binding domain,CBD)内部,而因受几丁质结合功能域保护,这两种蛋白能够抵抗这些蛋白酶的降解。与正常CBD比较,这两种蛋白C端的CBD只含有4个Cys,只在第1与第3、第4与第5个Cys之间形成两对二硫键,缺少由第2与第6个Cys形成的二硫键。推测其N端还应包括信号肽序列和几丁质结合功能域的未知序列。
- 周洪旭谭秀梅李长友王俊平孙绪艮郭巍李国勋
- 关键词：华北大黑鳃金龟中肠CDNA表达文库
- 鞘翅目害虫-华北大黑鳃金龟围食膜结构的初步研究被引量：11
- 2008年
- 应用光学显微镜和生化技术，研究了华北大黑鳃金龟（Holotrichia oblita）围食膜的基本结构和表面形态，初步分析了围食膜蛋白质的种类，蛋白质和糖的含量，测定了棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白对围食膜结构的影响。结果表明，华北大黑鳃金龟围食膜表面平滑致密，富有弹性，但与多数昆虫围食膜相比韧性较差，主要由蛋白质、糖和几丁质组成，其中蛋白质的含量约为36．25％，糖的含量约为8．91％，其他为几丁质等；经SDS—PAGE测定，围食膜的蛋白质种类较多，有28条多肽比较清晰，分子量多在17．6—320．3kDa。棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白不能降解华北大黑鳃金龟围食膜中的蛋白质。
- 李帅李淑文李长友周洪旭李国勋
- 关键词：华北大黑鳃金龟围食膜增效蛋白
