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金花茶黄烷酮3-羟化酶基因CnF3H的克隆及表达分析被引量：6: 2015年; 本研究利用反转录PCR和RACE方法,从中国珍稀濒危植物金花茶(Camellia nitidissima)花瓣中获得了黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)基因的c DNA全长,命名为Cn F3H,Gen Bank登录号为HQ290517。碱基序列分析表明,该Cn F3H基因c DNA序列全长为1 360 bp,5'非翻译区(untranslated regions,UTR)长54 bp,3'UTR长202 bp,开放阅读框长为1 104 bp编码367个氨基酸。氨基酸序列比对分析表明,Cn F3H与茶(C.sinensis)F3H同源性高达99%。二级结构预测表明,无规则卷曲在Cn F3H蛋白结构中所占比例最大,其次为α-螺旋和延伸链。相对荧光定量PCR分析表明,Cn F3H基因的表达量在幼蕾期、初蕾期和膨大期的表达量较高,之后逐渐降低;Cn F3H基因在花器官不同部位中均有表达,其表达量高低顺序为雄蕊、花瓣、萼片、雌蕊和苞片。本研究为全面深入地研究金花茶花色形成的分子调控机理提供了充实的理论依据。; 周兴文殷恒福朱宇林李纪元; 关键词：金花茶基因克隆

金花茶CnBCH基因cDNA全长克隆及生物信息学分析被引量：4: 2017年; 利用CODEHOP和RACE方法,从珍稀观赏植物金花茶(Camellia nitidissima)花瓣中克隆得到了β-胡萝卜素环羟化酶(β-carotene hydroxylase,BCH)基因的cDNA全长,命名为CnBCH。碱基序列分析结果表明,该CnBCH基因全长1 089 bp,包含58 bp的5'非翻译区(untranslated regions,UTR)、105 bp的3'UTR和927 bp编码308个氨基酸的开放阅读框。生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白质为不稳定亲水性蛋白,分子量为34.42 k D,无信号肽,含有4个跨膜结构域,一个脂肪酸羟化酶超家族(FA_hydroxylase super family)功能结构域以及BCH功能结构域(PLN02601);CnBCH二级结构以α-螺旋为主,其次为无规则卷曲,β-折叠所占比例最少。氨基酸序列比对分析结果显示,CnBCH与茄科、蔷薇科等植物BCH蛋白同源性都在70%以上,与柿树(Diospyros kaki T.)BCH同源性最高。本研究为进一步了解CnBCH基因的功能及其在金花茶花瓣类胡萝卜素合成中的作用提供了帮助。; 周兴文周银慧赵英朱宇林; 关键词：金花茶 Β-胡萝卜素羟化酶克隆

金花茶CnCHS基因原核表达载体的构建及表达分析: 2014年; 根据已经克隆得到的金花茶(Camellia nitidissima Chi.)查尔酮合成酶基因序列,设计引物对P1/P2扩增出该基因全长并将其构建到原核表达载体pGEX-4T-1中,转入大肠杆菌BL21后,用浓度为0.4mmol/L的IPTG诱导其表达。SDS-PAGE电泳检测结果显示,被诱导的大肠杆菌菌体中出现了约68ku的特异融合蛋白,表明该基因在大肠杆菌中成功表达。; 周兴文李纪元朱宇林孙迎坤; 关键词：金花茶查尔酮合成酶原核表达

金花茶CnLCYE基因cDNA克隆及表达载体构建被引量：2: 2017年; 利用RT-PCR和RACE技术,从珍稀观赏植物金花茶(Camellia nitidissima)花瓣中克隆得到了一个番茄红素ε-环化酶(lycopeneε-cyclase,LCYE)基因c DNA全长,命名为CnLCYE。碱基序列分析显示,CnLCYE基因全长2 149 bp,包含291 bp的5'非翻译区(untranslated regions,UTR)、265 bp的3'UTR和1 593 bp编码530个氨基酸的开放阅读框。该基因编码的蛋白质含有2个跨膜结构域,一个NADB_Rossmann superfamily结构域以及番茄红素ε-环化酶结构域(PLN02697)。CnLCYE蛋白二级结构以无规则卷曲为主,其次为α-螺旋,β-折叠所占比例最少。氨基酸序列比对分析结果显示,CnLCYE与茄科、蔷薇科等植物LCYE蛋白同源性都在70%以上,与普洱茶(Camellia sinensis var.assamica)LCYE同源性最高。根据该CnLCYE全长序列设计带有KpnⅠ和Bam HⅠ位点的全长扩增引物扩增基因全长,用KpnⅠ和Bam HⅠ双酶切后与表达载体p CAMBIA1300连接,成功构建了CnLCYE基因的正义表达载体,为深入研究CnLCYE基因的功能及其对花色的调控作用提供了帮助。; 周兴文康梅生冯晓娟孙迎坤; 关键词：金花茶克隆表达载体构建

盐胁迫对香石竹种子萌发及幼苗生长的影响被引量：1: 2013年; 以香石竹为试材,研究了不同浓度NaCl处理对香石竹种子萌发、幼苗生长等生理生化指标的影响,探讨盐胁迫对香石竹种子萌发及幼苗生长的抑制效应。结果表明:NaCl处理可抑制香石竹的生长量和生物量;与地上部分相比,根系对盐胁迫更加敏感。随着NaCl浓度的增加,香石竹的发芽率和发芽势不断降低,脯氨酸含量呈上升趋势;在NaCl浓度为0.6%时,脯氨酸含量明显增加,而根系活力显著降低,香石竹幼苗生长明显受到抑制。; 杨凯孙迎坤谭雯周兴文; 关键词：盐胁迫香石竹种子幼苗

金花茶查尔酮合成酶基因CnCHS的克隆及遗传转化研究被引量：5: 2015年; 根据已发表的金花茶查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因(CnCHS)序列设计全长扩增引物,以金花茶花瓣总cDNA为模板进行PCR扩增,成功获得了该基因cDNA全长。将扩增所得全长产物连接PMD18-T载体后转化大肠杆菌E.coli DH5α,提取质粒后经酶切、测序鉴定后,将其与双元表达载体pCAMBIA1300连接,成功构建了CnCHS基因的正义表达载体pCAM-CnCHS。将该重组表达载体转化农杆菌EHA105后,利用农杆菌介导法将CnCHS基因转入烟草,获得转基因烟草18株。利用PCR法及Southern blotting对所获得的转基因植株进行鉴定,结果显示CnCHS基因成功整合到烟草基因组中,阳性率达67%,并获得了单拷贝转基因植株。这些结果表明本研究成功构建了金花茶CnCHS基因对烟草的遗传转化体系,为深入研究CnCHS基因的功能及其对花色的调控效应奠定了基础。; 周兴文李纪元朱宇林; 关键词：金花茶查尔酮合成酶转基因植株

崇左金花茶花粉萌发及在不同贮藏条件下活力变化的研究被引量：5: 2017年; 2015年7月,采集崇左金花茶Camellia chuangtsoensis S.Y.Liang et L.D.Huang花粉,分别置于室温25℃,4℃,-20℃和-80℃保存。采用离体液体培养基法筛选出最佳崇左金花茶花粉的萌发条件,在此基础上试验不同贮藏温度和不同贮藏时间对花粉萌发率的影响。结果表明,崇左金花茶花粉萌发的最适培养基为12%蔗糖+0.12%H3BO3。花粉-20℃条件下贮藏5个月时,花粉萌发率仍可达原来的(68.93%)25%;在-80℃条件下贮藏5个月时,花粉萌发率可达原来的32%,-80℃条件下保存的花粉其萌发率略高于-20℃。; 周兴文杨乐黄肇宇张凤兰王辉

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高层次人才科研启动基金(G20120027)