国家自然科学基金(30701004)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 相关作者：黄轶曾昭淳黄道超杨梅华蒋雪更多>>
- 相关机构：重庆医科大学第三军医大学新桥医院第三军医大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- MicroRNA-7成熟障碍活化NF-κB通路在胃癌远处转移的作用与调控机制
- 目的：目前全球每年有超过100万人被确诊为胃癌，并且由于胃癌5年生存率仍然不超过20%，导致每年超过85万人死于该疾病。在多种癌症中已经发现microRNA-7（miR-7）的表达缺失和NF-κB的异常激活，但是miR-...
- 叶庭菠
- 关键词：胃癌NF-ΚB通路远处转移
- 应用酵母双杂交方法筛选与鉴定组蛋白乙酰基转移酶hTIP60β相互作用蛋白被引量：1
- 2010年
- 目的克隆人组蛋白乙酰基转移酶TIP60β基因,应用酵母双杂交技术研究筛选与TIP60β发生相互作用的蛋白。方法运用RT-PCR方法从人脑组织克隆TIP60β cDNA,构建酵母双杂交BD诱饵载体pGBKT7-TIP60β,以其为诱饵从成人肝cDNA文库中筛选与之相互作用的阳性克隆,并对阳性克隆进行序列测定和相关生物学分析。结果诱饵载体pGBKT7-TIP60β经双酶切可释放出1443bp DNA片段,与理论值大小一致,测序比对分析表明序列正确。以其为诱饵经酵母双杂交筛选共获得32个克隆,进一步验证与测序分析,最终确认HDAC7A、DMD2、CREB1、BD73、PHF17、AR等9个克隆基因。结论以TIP60β为诱饵利用酵母双杂交系统获得9个基因编码的蛋白,它们很可能与TIP60β转录活性调节功能有关。
- 黄轶曾昭淳
- 关键词：组蛋白乙酰基转移酶酵母双杂交
- GW112基因siRNA对人胃癌SGC-7901细胞体外增殖的影响被引量：2
- 2010年
- 目的构建靶向GW112siRNA逆转录病毒载体并筛选特异高效的RNAi靶点,研究GW112基因沉默后对胃癌SGC-7901细胞体外增殖的影响。方法应用逆转录病毒载体psilencer5.1-H1Retro构建针对GW112基因3个不同靶点的RNAi干扰载体-pSiRNA-GW112(pSi405-GW112,pSi1066-GW112,pSi1480-GW112),将脂质体法转染PT67细胞包装的病毒感染SGC-7901细胞,嘌呤霉素筛选稳定克隆,RT-PCR鉴定病毒整合,Real-timePCR筛选高效抑制靶点,CCK-8法检测对细胞体外增殖的影响。Westernblot检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果测序结果证实各干扰靶点的重组逆转录病毒载体pSiRNA-GW112构建正确。RT-PCR结果显示除亲本细胞外,经各靶点病毒上清感染的细胞均能扩增出510bp的Puro抗性基因片段。Real-TimePCR分析表明与SGC-7901亲本细胞组相比,7901-Si405,7901-Si1066及7901-Si1480组GW112的转录水平分别只有SGC-7901组的(15.50±0.01)%,(32.40±0.01)%与(57.00±0.02)%。而7901-Sc组GW112表达基本无变化。Si405,Si1066与Si1480靶点的抑制率分别为84.5%,67.6%及43.0%。沉默GW112后导致SGC-7901细胞体外增殖能力显著抑制(P<0.05),并伴随PCNA蛋白表达下调。结论构建的重组逆转录病毒载体pSiRNA-GW112能显著抑制SGC-7901细胞的体外增殖能力,且这种增殖抑制与下调的PCNA表达有关。
- 黄轶杨梅华杨华安蒋雪曾昭淳
- 关键词：RNA干扰
- NDUFA13失活在诱导小鼠自发性肝炎病理进程中的作用及机制被引量：3
- 2021年
- 目的构建线粒体蛋白(NDUFA13)基因肝特异性敲除小鼠,探讨NDUFA13表达失活在小鼠自发性肝炎病理进程中的作用及可能机制。方法采用Cre/loxP转基因技术,将NDUFA13 flox基因编辑小鼠NDUFA13fl/fl与Alb-Cre转基因小鼠杂交,得到肝脏特异性NDUFA13杂合敲除(NDUFA13fl/-;Alb-Cre)小鼠。经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳,对鼠尾与肝脏DNA基因进行分型鉴定。以同窝NDUFA13fl/fl小鼠为对照,将肝脏特异性NDUFA13fl/-小鼠作为研究对象,10只/组,分别在4周龄、2年龄时各处死5只,获取小鼠肝组织样本,通过HE染色分析肝组织病理变化,免疫组化分析NDUFA13、NF-κB/p65、NF-κB/p-p65及炎症小体NLRP3的表达,ROS染色试剂盒分析细胞总ROS及线粒体ROS水平;免疫组化与免疫荧光分析免疫细胞标志物CD45、MPO、F4/80以及炎症因子IL1β、IL33的表达情况。结果PCR鉴定结果显示成功建立肝特异性NDUFA13杂合敲除小鼠;HE染色显示4周龄与2年龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织均损伤严重;免疫组化检测显示,4周龄与2年龄NDUFA13fl/-小鼠NDUFA13蛋白表达显著下调(P<0.05),NF-κB信号分子p65、p-p65(Ser536)及炎症小体NLRP3蛋白表达显著增加(P<0.05);ROS测定发现NDUFA13基因杂合敲除导致小鼠肝脏细胞总ROS、线粒体ROS水平均显著增加;免疫组化与免疫荧光结果显示,肝组织CD45、MPO、F4/80等炎症细胞标志物的聚集以及IL1β、IL33等炎症因子的分泌均明显增多(P<0.05)。结论NDUFA13蛋白表达失活可诱导小鼠自发性肝炎病理表型,其机制可能与活化的ROS/NF-κB/NLRP3信号通路相关。
- 徐小惠李锐曾欣王欣薛炳乾黄道超黄轶
- 关键词：NLRP3
- GW112基因逆转录病毒载体的构建及在胃癌SGC-7901细胞的表达研究
- 2009年
- 目的构建人GW112基因的逆转录病毒载体,并通过病毒介导其在人胃癌SGC-7901细胞的稳定表达。方法采用DNA重组技术构建并鉴定重组逆转录病毒载体pLEGFP-N1-GW112;以脂质体PT67细胞包装病毒,经病毒感染的SGC-7901细胞通过G418筛选及荧光定量PCR鉴定,建立GW112稳定过表达SGC-7901细胞株。结果成功构建了pLEGFP-N1-GW112逆转录病毒表达载体,经病毒包装的重组转录病毒成功感染SGC-7901细胞,Real-Time PCR结果显示实验组中GW112基因是对照组细胞中的4.2倍。结论逆转录病毒介导的GW112基因在胃癌SGC-7901细胞获得了稳定过表达,为进一步研究GW112在胃癌中的功能奠定了良好基础。
- 杨梅华熊鸿燕杨华安曾昭淳黄轶
- 关键词：逆转录病毒胃癌SGC-7901
- 线粒体GRIM--19缺失经ROS--NRF2--HO--1途径调控胃癌转移作用与机制
- 目的：胃癌是我国发病前三的恶性肿瘤之一，转移是胃癌致死的最主要因素，探明胃癌转移相关机制对于监测病情、延长患者生存期具有重要意义。目前研究发现GRIM-19在多种恶性肿瘤中表达下调，课题组前期研究发现，GRIM-19显著...
- 王欣
- 关键词：胃癌
- 文献传递
- 肝细胞线粒体NDUFA13蛋白缺陷可诱导小鼠自发性慢性肝纤维化被引量：4
- 2021年
- 目的探究肝细胞线粒体NDUFA13蛋白表达缺失在诱导小鼠肝脏纤维化发生中的作用及可能机制。方法以肝脏特异性NDUFA13杂合敲除小鼠品系(NDUFA13fl/-;Alb-Cre)作为研究对象,以同窝NDUFA13fl/fl小鼠作为对照,8只/组,进行长达两年的实验观察,分别在实验早期和晚期处死小鼠获取肝组织样本。采用HE染色、Masson染色观察不同时期小鼠的肝组织病理变化及纤维化表型。Western blot检测肝组织中NDUFA13蛋白表达水平。免疫荧光分析巨噬细胞标志物F4/80与转化生长因子TGF-β1、肿瘤坏死因子TNF-α与白介素IL-1β的表达。免疫组化分析肝星型细胞活化标志物α-SMA、基质金属蛋白酶MMP-9与基质金属蛋白酶组织抑制剂TIMP-1、胶原纤维Collagen-Ⅰ与Collagen-Ⅲ的表达情况。结果HE染色、Masson染色发现4周龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织炎症浸润明显但未出现纤维化表型;2年龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织严重损伤且伴大量胶原纤维产生。Western Blot结果显示2年龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织中NDUFA13蛋白表达水平较对照小鼠明显降低(P<0.05)。免疫荧光与免疫组化结果显示,NDUFA13fl/-小鼠肝组织中巨噬细胞F4/80聚集增多并伴随大量TGF-β1产生(P<0.05),以及TNF-α、IL-1β等炎症因子大量分泌(P<0.05);同时,α-SMA、Collagen-Ⅰ及Collagen-Ⅲ表达明显增多(P<0.05),基质金属蛋白酶MMP-9表达降低(P<0.05),而其抑制剂TIMP-1表达明显增加(P<0.05)。结论肝细胞线粒体NDUFA13蛋白缺陷能够诱导小鼠自发的慢性肝纤维化病理表型,可能与巨噬细胞/炎症因子信号诱导的肝星状细胞异常活化有关。
- 徐小惠曾欣李锐冯金梅黄道超黄轶
- 关键词：巨噬细胞肝星状细胞肝纤维化
