国家重点基础研究发展计划(2001CB510001)
- 作品数：34 被引量：125H指数：6
- 相关作者：吴玉章邹丽云贾正才周伟倪兵更多>>
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- MAGE-12的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位肽的预测及其三维结构构建
- 2012年
- 【目的】从理论上分析预测肿瘤抗原MAGE-12(melanoma antigen-12)的HLA-A2(histocompatility leukocyte antigen-A2)限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位肽并构建其三维结构。【方法】以肿瘤特异性抗原MAGE-12为研究目标,采用超基序法、量化基序法、多项式法、延展基序法与三维结构构建相结合的CTL表位预测方法。【结果】预测出的MAGE-12的表位中有4个符合HLA-A2限制性CTL表位要求。【结论】预测出的4个HLA-A2限制性CTL表位为MAGE-12的表位的可能性较大,经后续实验筛选、鉴定后,可用于基于MAGE-12的肿瘤治疗性多肽疫苗的设计研究。
- 李艳秋鲍布和高默杰倪兵吴玉章
- 关键词：肿瘤抗原MAGE-12表位
- MAGE-12 B细胞表位联合应用的免疫原性研究被引量：2
- 2009年
- 目的设计合成肿瘤抗原MAGE-12的B细胞表位并研究其表位联合应用的免疫原性。方法在MAGE-12的B细胞表位序列MAGE-123-14(LEQRSQHCKPEE)、MAGE-1282-93(QSDEGSSNEEQE)的基础上,采用4分枝多重抗原肽结构设计合成抗原肽后分MAGE-123-14组、MAGE-1282-93组、MAGE-123-14联合MAGE-1282-93组,分别以MAGE-123-14、MAGE-1282-93、MAGE-123-14联合MAGE-1282-93抗原肽免疫C-57BL/6小鼠,产生多克隆抗体,应用ELISA和免疫组化实验检测多克隆抗体是否为抗原肽的特异性抗体。结果免疫C-57BL/6小鼠后可产生MAGE-12的抗原特异性的多克隆抗体,且多表位抗原肽联合使用组抗体效价高于单表位抗原肽组产生的抗体效价。结论证明MAGE-12的B细胞多表位抗原肽联合使用的免疫原性强于单个B细胞表位抗原肽的免疫原性。
- 李艳秋吴玉章倪兵何仰东
- 关键词：B细胞表位MAGE-12ELISA
- 刀豆素蛋白A诱导小鼠肝纤维化模型的建立被引量：34
- 2004年
- 目的 建立小鼠的肝纤维化模型。方法 2 0只Balb c小鼠随机分 2组。实验组 (E组 )小鼠经尾静脉注射12 .5mg kg剂量的 1mol L刀豆素蛋白A(ConA) ,每周 1次 ,连续 6周 ;而对照组 (N组 )正常小鼠则相应地经尾静脉注射 2 5 0 μLPBS。每次注射ConA或PBS 2 4h后 ,经小鼠尾静脉取血检测ALT和AST。第 6次注射ConA一周后处死小鼠 ,取肝组织做HE染色及MassonTrichrome染色 ,显微镜下观察肝脏组织形态改变及胶原沉积情况。结果 与对照组比较 ,实验组小鼠的ALT和AST均明显升高 ,肝体积明显增大 ,表面不光滑 ,布满增生小结节。光镜下见肝组织结构紊乱 ,肝细胞坏死明显 ,有较多的淋巴细胞浸润。MassonTrichrome染色胶原明显增多。结论 反复静脉注射ConA可成功诱导建立小鼠肝纤维化模型。
- 李鸿立田聆魏于全赵霞
- 关键词：肝纤维化动物模型
- 小鼠热休克蛋白gp96羧基端片段的克隆、表达及纯化
- 2004年
- 热休克蛋白 (Heatshockprotein )gp96 (Grp94 )是近年来新发现的一类糖蛋白 ,除了分子伴侣的功能外 ,现有越来越多的文献报道了它在先天性免疫和获得性免疫中的重要作用。gp96可以促进抗原呈递细胞的成熟以及细胞因子的分泌。热休克蛋白抗原肽复合体可以引起特异性的细胞毒T淋巴细胞效应 ,应用这个特点可以设计抗病毒及抗肿瘤药物[1 ] 。但是gp96全长分子量大 ,蛋白在大肠杆菌中表达量低 ,不稳定 ,难纯化。组织提取的gp96又受组织来源和样品量的限制。对gp96的结构和功能的研究带来困难。克隆并表达了小鼠热休克蛋白gp96的羧基端 5 6 0 75 1aa约四分之一长的功能片段 ,该段包含gp96的一个肽结合区和二聚化位点[2 ] 。将该功能片段在大肠杆菌中进行融合表达 ,纯化后将融合的片段切掉 ,并对目的片段进行了分析 ,结果表明该段可能是形成二聚体密切相关的片段 。
- 韩金乐李宏涛李集林田波
- 关键词：热休克蛋白GP96
- 利用分子模拟技术筛选HLA-A2限制性CTL表位肽被引量：4
- 2003年
- 以肿瘤抗原MAGE-2为例,运用分子模拟方法对其4个优势候选HLA-A2限制性CTL表位进行初步鉴定,再通过多肽结合实验对鉴定结果进行验证.结果表明,4个候选肽中有3个与HLA-A2分子有较好的亲和力,进一步进行体外诱导CTL效应实验显示,3个高亲和力的表位肽可在体外有效诱导特异性CTL效应.利用计算机辅助鉴定CTL表位,克服了以往筛选肽要将肽逐一洗脱下来的繁琐实验过程,并且可直接观测到多肽复合物的结合模式,该技术在筛选大量优势CTL表位中具有较大的应用价值.
- 耿淼吴玉章林治华贾正才周伟邹丽云
- 关键词：分子模拟免疫抗原递呈
- 轮状病毒结构蛋白VP6 HLA-A*0201限制性CTL表位的初步鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的预测并初步鉴定轮状病毒W a株结构蛋白VP6 HLA-A*0201限制性CTL表位,为轮状病毒免疫保护机制研究及疫苗的研制奠定基础。方法应用表位亲和力预测软件SYFPEITH I及蛋白酶切位点预测软件PAProc和Fragpred ict相结合预测VP6 HLA-A*0201限制性CTL表位;用分子模拟对候选肽作进一步筛选;标准Fmoc方案合成候选肽,RP-HPLC纯化、分析,质谱进行鉴定;最后用T2细胞株测定候选肽与HLA-A*0201分子的亲和力及稳定性。结果结合SYFPEITH I、蛋白酶切位点预测结果及分子模建结果,选择分值最高同时在C末-端含有蛋白酶切位点的4条肽作为候选表位肽;标准Fmoc方案合成的各肽纯度均大于95%,质谱检测结果表明,各肽的相对分子质量与理论值基本一致;在候选的4条表位肽中,TLLANVTAV(340-348)和VLADANETL(333-341)与HLA-A*0201呈高亲和力结合,荧光系数(flu-rorescene index,FI)分别为2.66和2.64,同时肽-HLA-A*0201复合物半数解离时间(d issoc iation comp lex50,DC50)均大于8 h。结论TLLANVTAV(340-348)和VLADANETL(333-341)为潜在的HLA-A*0201限制性CTL表位。
- 魏静李晋涛支轶唐艳张小萍王靖雪吴玉章
- 关键词：轮状病毒CTL表位结构蛋白分子质量
- 轮状病毒结构蛋白VP7 HLA-A2.1限制性CTL表位的初步鉴定
- 2006年
- 目的 预测并初步鉴定轮状病毒Wa株结构蛋白VP7 HLA—A2．1限制性CTL表位。方法 用BIMAS软件预测VP7 HLA—A2．1限制性CTL表位；分子模拟技术对分值最高的4条肽进行分子模建；最后测定候选肽与HLA-A2．1分子的亲和力及结合稳定性。结果 结合BIMAS及分子模拟的预测结果，选择4条肽QLYCDYNLV（132—140）、LLNYILKSV（18—26）、VLMKYDQSL（140—148）及VNWKKWWQV（287—295）作为候选表位肽；4条肽与HLA—A2．1结合的荧光系数（FI）值分别为2．58、3．83、3．19及0．82，肽-HLA-A2．1复合物半数解离时间（DC50）分别为2-4、6-8、8及2h。结论 QLYCDYNLV（132—140）、LLNYILKSV（18—26）及VLMKYDQSL（140—148）为潜在的HLA-A2．1限制性CTL表位。
- 魏静李晋涛支轶唐艳张小萍王靖雪吴玉章
- 关键词：轮状病毒HLA-A2.1CTL表位
- TRAG-3 HLA-A2.1限制性CTL表位的预测及结合力分析被引量：3
- 2003年
- 目的 寻找并鉴定TRAG 3来源的HLA A2 .1限制性CTL表位 ,为临床开展基于TRAG 3表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法 应用超基序和量化基序方案预测TRAG 3HLA A2 .1限制性CTL表位 ;采用标准Fmoc方案合成侯选表位 ,RP HPLC纯化、分析多肽 ,质谱鉴定各肽 ;最后 ,用T2细胞株测定各肽与HLA A2 .1分子的结合力。结果 超基序和量化基序方案预测出了 4个侯选表位肽 ;标准Fmoc方案合成的各肽经纯化后纯度大于 90 % ,各肽的相对分子质量与理论值一致 ;在 4个侯选表位肽中 ,ILLRDAGLV( 58- 6 6 ) 九肽与HLA A2 .1的结合力最强。结论 表位预测的结果与结合力分析实验结果一致性较好 ,两者联合应用初步认为ILLRDAGLV( 58- 6 6 ) 九肽为TRAG 3HLA A2 .1限制性CTL表位的可能性最大。
- 朱波陈正堂程晓明林治华邹丽云吴玉章
- 关键词：HLA-A2.1CTL表位
- 治疗用HBV模拟抗原的设计及其诱导慢性乙型肝炎患者外周血CTL活性研究被引量：7
- 2003年
- 目的 引入四聚体技术比较基于不同表位组合的模拟抗原分子的免疫原性 ,研究其结构与诱导免疫应答之间的关系。方法 以乙型肝炎病毒核心抗原 (HBcAg) 18～ 2 7表位为基础 ,分别引入了TH、TH +B细胞表位 ,合成了 3种模拟抗原 ,并以这 3种模拟抗原在体外刺激慢性乙型肝炎患者的外周血单个核细胞为模型 ,通过HLA A2 0 2 0 1tetramer定量检测抗原特异性细胞毒性T细胞 (CTL)。结果 3种模拟抗原分子能有效地诱导慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞产生抗原特异性CTL反应 ;TH 和B细胞表位的引入可增强该效应。结论 我们所建立的四聚体技术可定量检测表位特异性CTL ;模拟抗原的设计中引入TH 。
- 周芙蓉王晴贾正才邹丽云周伟吴玉章
- 关键词：慢性乙型肝炎外周血CTL活性
- 肿瘤抗原TRAG-3 HLA-A2.1限制性CTL表位的鉴定被引量：4
- 2004年
- 目的 寻找并鉴定TRAG 3来源的HLA A2 .1限制性CTL表位 ,为临床开展基于TRAG 3表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法 应用超基序和量化基序方案 ,预测TRAG 3HLA A2 .1限制性CTL表位。用计算机分子模拟的方法 ,对预测表位进行分子模拟。用流式细胞仪分析测定各肽与HLA A2 .1分子的结合力。最后 ,应用HLA A2 .1阳性健康志愿者外周血单个核细胞 (PBMC)对其体外诱导的CTL效应进行鉴定。结果 应用超基序和量化基序方案 ,预测出 4个候选表位肽 ,用计算机分子模拟发现其中只有TRAG 3( 37- 45) 不符合HLA A2 .1限制性CTL表位的特点。在上述 4个九肽中 ,TRAG 3( 58- 6 6 ) 与HLA A2 .1分子的结合力最高。在进一步的CTL诱导实验中 ,发现TRAG 3( 58- 6 6 ) 能够诱导健康志愿者PBMC产生特异性CTL。结论 表位预测、计算机分子模拟、结合力分析和体外CTL诱导实验的一致性较好。 4种方法一致认为 ,TRAG 3( 58- 6 6 ) (ILLRDA GLV)为HLA A2 .1限制性CTL表位。该表位肽可望用于基于TRAG
- 朱波陈正堂程晓明林治华吴玉章
- 关键词：CTL表位
