云南省卫生科技计划项目(2009NS068)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：王剑松柯昌兴颜汝平石永福左毅刚更多>>
- 相关机构：昆明医学院第二附属医院中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：云南省卫生科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人膀胱癌组织Kringle 5基因的克隆、优化表达、纯化及活性鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的构建能够表达分泌性人纤溶酶原krinle5(K5)的大肠杆菌工程菌,优化表达并鉴定其抗人血管内皮细胞(ECV)304的生物活性。方法从人膀胱癌组织中提取总RNA,RT-PCR扩增K5基因,构建原核表达载体pGEX-5X-1/K5,运用工程菌表达蛋白。带谷胱甘肽(GST)标签琼脂糖4B亲和柱层析、纯化蛋白,CellTiter96AQueous细胞增殖检测法(MTS)检测K5对ECV304增殖影响。结果 PCR扩增得到282bp片段,并成功插入pGEX-5X-1质粒,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下工程菌表达了特异性融合蛋白,经凝血酶酶切后得到分子量约为12kD的K5蛋白;K5蛋白能特异性抑制ECV304增殖,抑制率最高蛋白浓度为5ng/L。结论含重组质粒pGEX-5X-1/K5大肠杆菌表达产物量多且易纯化,为包括肿瘤在内的病理性血管增生疾病抗血管生成药物开发做了积极的尝试。
- 柯昌兴王剑松胡明宇毕城伟陈慧诚刘龙丁颜汝平詹辉
- 关键词：纤溶酶原融合蛋白
- 膀胱癌患者血、尿及癌组织中血管生成因子和抑制因子的表达变化被引量：4
- 2010年
- 目的观察膀胱癌患者血、尿及癌组织中血管生成因子和抑制因子的表达水平与膀胱癌分级、分期的关系。方法 ELISA法检测20例不同分级、不同分期膀胱癌患者血清、尿液中的血管内皮生长因子(VEGF)、血管抑素(AS)、内皮抑素(ES)、Kringle 5(K5)基因蛋白,免疫组织化学法(IHC)检测膀胱癌组织中的VEGF、AS、ES、K5蛋白。结果高分级、高分期组膀胱癌患者血清及尿液中的VEGF、AS、ES、K5蛋白表达水平较低分级、低分期组高(P均<0.05);VEGF、AS、ES在浅表和浸润膀胱癌组织中表达有差异(P均<0.05)。结论不同分级、不同分期膀胱癌患者癌组织及血清、尿液中VEGF、AS、ES、K5的表达不同。
- 柯昌兴李昊王剑松石永福杨德林左毅刚颜汝平徐鸿毅
- 关键词：血管生成因子血管生成抑制因子内皮抑素血管抑素
- 膀胱癌组织及血、尿中血管生成因子和抑制因子表达的意义被引量：3
- 2011年
- 目的探讨膀胱癌患者血清、尿液及癌组织中血管生成因子和抑制因子的表达水平与膀胱癌分级、分期的相关性,为运用内源性血管生成抑制因子抗膀胱癌治疗提供依据。方法采用ELISA法检测20例不同分级、分期膀胱癌患者血清、尿液中血管内皮生长因子(VEGF))、血管抑素(AS)、内皮抑素(ES)和Kringle5(K5)水平,免疫组织化学法检测膀胱癌组织标本中VEGF、AS、ES和K5表达情况。结果高分级、高分期组膀胱癌患者血清、尿液中VEGF、AS、ES和K5水平均高于低分级、低分期组(均P<0.05);在膀胱癌组织中,VEGF、AS、ES和K5主要着色部位为癌细胞胞质和癌细胞周围微血管内皮细胞,除K5外,VEGF、AS和ES在高分级、高分期膀胱癌组织中的表达均较低分级、低分期膀胱癌组织中的表达要高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论膀胱癌组织及血清、尿液中VEGF、AS和ES表达水平与肿瘤分级、分期呈正相关。
- 柯昌兴李昊王剑松石永福杨德林左毅刚颜汝平徐鸿毅
- 关键词：膀胱肿瘤血管内皮生长因子内皮抑素血管抑素
- Kringle5基因的表达、纯化及其抗膀胱肿瘤作用的初步研究
- 2010年
- 目的获得高纯度并且有活性的K5蛋白.方法继构建了重组质粒pGEX-5X-1-K5的基础上,转化感受态细胞BL-21、DH-5α、Top10,并优化了表达条件,经过裂解、洗涤、溶解包涵体后,用带GST标签的谷胱甘肽琼脂糖4B亲和柱进行纯化,Bradford法测蛋白浓度,分别用ECV304细胞和裸鼠皮下移植瘤模型对蛋白进行了活性测定.结果获得了表达量最高的条件:BL21感受态细胞,诱导时间:6 h,纯化后的K5蛋白纯度达到95%以上,K5浓度为5μg/mL时抑制率最高.裸鼠模型上,K5组肿瘤的生长速度明显慢于PBS对照.结论含有GST的融合蛋白表达载体,表达量多、易于纯化、成本低、蛋白纯度高,并能有效的抑制ECV304细胞,抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,为K5的工业化大规模生产奠定了基础.
- 胡明宇王剑松柯昌兴韦海荣赵献张启波
- 关键词：KRINGLE5蛋白纯化膀胱肿瘤
