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内蒙古自治区自然科学基金(2012MSll23)
作品数:
1
被引量:5
H指数:1
相关作者:
乌新林
董培德
林凯金
侯明星
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相关机构:
内蒙古医科大学
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发文基金:
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相关领域:
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2012
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人结肠癌相关成纤维细胞的原代培养及其生物学特性
被引量:5
2012年
目的探讨人结肠癌相关成纤维细胞(CAFs)及结肠正常成纤维细胞(NFs)的培养和鉴定方法,分析两者在生物学特性和蛋白表达方面的差异。方法采用组织块法和胶原酶消化法进行人结肠CAFs和NFs的原代培养;选择第3代人结肠CAFs及NFs,通过形态学观察和免疫细胞化学染色进行鉴定;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测人结肠CAFs和NFs的增殖活性,并绘制7d生长曲线;酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定结肠CAFs和NFs细胞上清液中骨桥蛋白(OPN)、转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶(MMP)-2含量。结果结肠CAFs胞质突减少,细胞不规则,排列紊乱,可见双核及多核细胞,除细胞角蛋白(CK)外,波形蛋白(vimentin)与α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)均为阳性表达;与结肠NFs比较,结肠CAFs增殖活性明显增强;ELISA法测定结肠CAFs和NFs细胞上清液中蛋白含量,其中OPN分别为(2.106±0.137)μg/L和(1.499±0.151)μg/L(P〈0.01),TGF-β分另0为(331.203±12.203)ng/L和(315.391±12.998)ng/L(P〈0.01),VEGF分别为(17.216±0.632)ng/L和(14.887±0.661)ng/L(P〈0.01),MMP-2分别为(1.830±0.192)坤g/L和(1.436±0.102)μg/L(P〈0.01)。结论通过组织块法和胶原酶消化法原代培养皆可获得高纯度的人结肠CAFs和NFs;两者在形态结构、增殖活性和蛋白表达等方面差异有统计学意义,这些差异可能是人结肠CAFs发挥其促结肠癌发生发展作用的生物学基础。
乌新林
林凯金
苏秀兰
侯明星
董培德
施琳
关键词:
结肠癌
癌相关成纤维细胞
原代培养
生物学特性
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