国家高技术研究发展计划(2004AA215172)
- 作品数：2 被引量：8H指数：1
- 相关作者：方宏清陈惠鹏王德解李彦英陈宏更多>>
- 相关机构：军事医学科学院江西科技师范学院西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 甲状旁腺激素和转铁蛋白N端半分子融合蛋白在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2005年
- 利用重叠PCR技术将PTH(parathyroidhormone,甲状旁腺激素)基因与TFN(transferrinN_terminalhalf_molecule,转铁蛋白N端半分子)基因在体外融合,融合基因克隆至真核表达载体pPIC9中,转化毕赤酵母GS115。转化子经甲醇诱导后,融合蛋白得到了表达并分泌到发酵上清液中。经SPSepharoseFF阳离子交换层析、PhenylSepharoseFastFlow疏水层析纯化获得了纯度大于95%的PTH_TFN样品。Westernblot分析及腺苷酸环化酶实验证明融合蛋白中的PTH具有与抗PTH抗体结合能力及刺激腺苷酸环化酶的活性,铁饱和实验证明融合蛋白中的TFN和单独的TFN具有相同铁结合能力。因而TFN可望作为PTH的天然运输载体。
- 张豪李晓静王德解陈璟李彦英李玉玲沈明山方宏清陈惠鹏
- 关键词：甲状旁腺激素毕赤酵母基因表达腺苷酸环化酶
- 鼠羧肽酶原B在毕赤酵母中的表达、纯化与鉴定被引量：7
- 2007年
- 为了在毕赤酵母中表达鼠羧肽酶原B(procarboxypeptidaseB,proCPB)蛋白,以RT-PCR法从SD鼠胰腺细胞中克隆了proCPB基因,将其插入pPIC9载体,PEG1000介导转入毕赤酵母GS115细胞,在甲醇的诱导下,实现了proCPB在毕赤酵母中的成功表达。通过发酵条件的优化,使用BMGY(pH6·0)培养基,添加0·5%的酪蛋白水解物,于28℃,在起始OD600达10·0时,每隔12h补加0·5%的甲醇,重组酵母GS115-proCPB表达的产物量可达到最高(500mg/L),表达时间可达120h,表达的目的蛋白占总蛋白的94%以上。通过纯化条件的优化,采用两步疏水层析,可使目的蛋白的纯度达96%以上,蛋白得率达38%,重组proCPB活化后所得CPB的比活力可达110u/mg(CPB标准品为180u/mg)。相对分子量测定表明重组蛋白的分子量与理论值极相近,N-端氨基酸测序进一步表明proCPB基因在毕赤酵母中得到了正确的表达和翻译后加工修饰。
- 王德解苗林陈宏李彦英陈惠鹏方宏清
- 关键词：羧肽酶B毕赤酵母蛋白纯化
