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国家科技重大专项(0082X10002-007)

作品数：1 被引量：1H指数：1
相关作者：赵冬久周林福周承陈智彭国平更多>>
相关机构：浙江大学医学院附属第一医院浙江大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇单链
  • 1篇单链抗体
  • 1篇毒性
  • 1篇细胞
  • 1篇细胞毒
  • 1篇细胞毒性
  • 1篇细胞毒性T淋...
  • 1篇细胞毒性T淋...
  • 1篇相关抗原
  • 1篇淋巴
  • 1篇淋巴细胞
  • 1篇免疫
  • 1篇免疫活性
  • 1篇抗体
  • 1篇抗原
  • 1篇活性
  • 1篇活性鉴定
  • 1篇表面抗原

机构

  • 1篇浙江大学
  • 1篇浙江大学医学...

作者

  • 1篇彭国平
  • 1篇陈智
  • 1篇周承
  • 1篇周林福
  • 1篇赵冬久

传媒

  • 1篇中华传染病杂...

年份

  • 1篇2012
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
HBsAg基因与细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4单链抗体的真核质粒载体构建及表达蛋白活性鉴定被引量：1
2012年
目的构建HBsAg基因（HBV5）与抗鼠细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）单链抗体（ScFv）的真核质粒载体，并检测融合表达蛋白特异性抗原的结合活性。方法将CTI。A-4单链抗体的真核表达质粒pSect2／ScFv4F10及含HBVS基因的质粒pSect2／S分别经SfiI和HindⅢ双酶切后，S基因片段进-步克隆至质粒pSect2／ScFv4F10中。将质粒pSect2／ScFv4F10、pSect2／ScFv4F10。转染中华仓鼠卵巢细胞，Western印迹法检测目的蛋白的表达。将表达的蛋白经超滤浓缩与亲和层析纯化后，分别通过竞争抑制ELISA和表面等离子共振（sPR）技术，检测其与重组小鼠CTLA-4抗原的结合活性及亲合常数。采用One-wayANOVA比较组间差异。结果成功构建可稳定表达ScFv4F10蛋白的真核质粒载体pSect2／ScFv4F10。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western印迹法检测表明，其表达蛋白的相对分子质量约为52×10^3。当将抗鼠CTLA-4的亲本单链抗体4F10浓度固定时，其与CTLA-4纯化抗原混合反应的吸光度（A）570值随ScFv融合蛋白比例的减少而逐步增大；且当ScFv、ScFv4F10与4F10单链抗体以摩尔比为2：1混合时，其对4F10结合抗原的竞争抑制率分别可达到72．6％和64．5％；亲本单链抗体、ScFv4F10、ScFv4F10与重组CTLA-4抗原的结合平衡常数KA值分别为7．29×10^8mol／L、9．52×10^6mol／L和2．04×10^6mol／L，解离平衡常数KD分别为1．40×10^-9mol／L、1．05×10^-7mol／L和4．91×10^-7mol／L。结论成功构建了HBVS基因与CTLA-4单链抗体ScFv4F10的真核表达质粒载体pSect2／ScFv4F10，其表达的蛋白与CTLA-4抗原具有一定的亲和活性。
彭国平赵冬久周承周林福陈智
关键词：细胞毒性T淋巴细胞相关抗原免疫活性
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